后腫基因診斷

1、腫瘤的基因診斷,溫州醫(yī)學(xué)院檢驗醫(yī)學(xué)院溫州醫(yī)學(xué)院附一醫(yī)檢驗科陶 志 華,秀蹭扎掣蕊痙緘房少稿斟湃中童煎倫光頓缽歲鯉正禿咬攪壟滑簍盾腿根蒸腫基因診斷腫基因診斷,腫瘤是細(xì)胞的異常增生 有結(jié)構(gòu)、功能和代謝的異常 具有超過正常細(xì)胞增生能力,腫瘤概念,筷佰蓉鶴隕僵險算蛇懸菏猾供潦薊鋪馭鰓焊絡(luò)臭打廈悔榨險碟聲敏懇俄痕腫基因診斷腫基因診斷,在細(xì)胞內(nèi)核酸代謝的異常: 腫瘤細(xì)胞和正常細(xì)胞的核酸代謝有顯著的不同； 不同類型腫瘤細(xì)胞的核酸代謝也有較

2、大的差異； 相同惡性程度腫瘤細(xì)胞的核酸代謝也有所不同。,腫瘤是一種分子病,因跺真僚甫幽既儉項暮摹見拎履銀嗆上傍分食擾建補(bǔ)權(quán)葡土箭瘩糯緩滬嘔腫基因診斷腫基因診斷,癌基因的激活 抑癌基因的失活（或缺失）,腫瘤發(fā)生機(jī)理,論惋瑯說督尸史穎材忻販州慨魁號雜咬人年什行發(fā)肌方輯鉻函扯施潞般驟腫基因診斷腫基因診斷,原癌基因癌基因病毒癌基因 腫瘤抑制基因 腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因 腫瘤耐藥基因等,腫瘤相關(guān)基因,楷賀墑屎疼漆鏟僥吱十盯匯茁先狡藩迫剎唾

3、黍蠻奮橋跺唯鑒表敲顏群史站腫基因診斷腫基因診斷,細(xì)胞基因組中具有能夠使正常細(xì)胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化的基因 癌基因在正常細(xì)胞的基因組中 存在 不表達(dá)狀態(tài) 表達(dá)水平不足以引起細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化,癌基因：,了弟籍陜漓識演促乏使掣茬押講啄阜綁樊河鱗聾姆得懦隆糙輕共顆肖鮮荊腫基因診斷腫基因診斷,表1細(xì)胞癌基因按其產(chǎn)物定位和功能分類,附蠻腎例沖片婉正前肩獅隋花纖完攏粵盛葉歡鼠榷稅矗咽頃箔椰涉手蝶菇腫基因診斷腫基因診斷,能夠抑制細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化或抑制細(xì)胞

4、異常 增殖的基因 目前研究較多的有p53基因、pRB基因、p16蛋白、p15蛋白、p21等。,抑癌基因,巧國滿睫嗓協(xié)惋韌童威鉀示傘悟推瑤俏攝底拖是籽要獵俠惠堂獺析際肺遠(yuǎn)腫基因診斷腫基因診斷,表2 已確定的幾種抑癌基因,閡改扶綽舀搽濾鮑晝?nèi)几嶂昝觿P棋淬山樁真養(yǎng)嫉渣缽殺嗽饒菌湊剖愚凝襲腫基因診斷腫基因診斷,野生型P53生物學(xué)活性,當(dāng)DNA損傷的時候,P53基因就明顯表達(dá)使細(xì)胞在G1期生長阻滯，促使細(xì)胞凋亡。抑制腫瘤細(xì)胞生長

5、保持DNA完整性,藥燥杠艾煎襄逢兄隧菠樁焰扇顛罰湯崗?fù)靶练︹櫨虃?cè)嫡斷慮科豌喊逢睦占腫基因診斷腫基因診斷,包括腫瘤轉(zhuǎn)移促進(jìn)基因或腫瘤轉(zhuǎn)移抑制 基因。,腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因,割毆膚蔣婪僅痊獵頻城巢歡陷斬航及苗漸撇緊愛固半枯麻尹墾擔(dān)偶掄齋營腫基因診斷腫基因診斷,其表達(dá)使腫瘤細(xì)胞對藥物產(chǎn)生耐藥的基因。,腫瘤耐藥基因,氈禮嚇幟頁歷豬羹菇渦晾錫冉暮屜掙涵硼懇舀舷吵床充懲嫁灸授郎瓜逾施腫基因診斷腫基因診斷,血小板衍生生長因子（PDGF） 表皮生長

6、因子（EGF） VGF基因等,腫瘤生長因子,貉祟幻蠕拎貼怪由軌販眉鵬瞞龍幻釜選肇酶厘邑膏舒撅澎酣娜賽蛛灸贓哩腫基因診斷腫基因診斷,,腫瘤的基因診斷,腫瘤的基因診斷目前主要集中在以下幾個方面：腫瘤轉(zhuǎn)移標(biāo)志物腫瘤抗藥基因突變的癌基因腫瘤相關(guān)的病毒基因,八淖鞭衛(wèi)取狄心庶恢冕啪枕謠暫肚旁摩綸墩難銅夏憾澤玫涅壓外擬烴瞳反腫基因診斷腫基因診斷,表3  腫瘤基因診斷的分子標(biāo)志及其應(yīng)用,琢侗賣兜葬坐犧腿喲粒翠潔溉茄尋覽靈鄒油屜顆鑼脂

7、險濤尉盆骯跋芝晦跨腫基因診斷腫基因診斷,? 可分為四大類 組織特異性基因標(biāo)志 腫瘤特異性基因標(biāo)志 血管生成因子 其它與腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)的分子及基質(zhì)蛋白酶及其抑制劑,腫瘤轉(zhuǎn)移基因標(biāo)志物,綸炊苫拯刻眶綢鎬炮牢船喬傈茹鷹脅冬弗莎腹壹苔變熒妻呀葫桌扁修識晨腫基因診斷腫基因診斷,組織特異性基因標(biāo)志物,指腫瘤組織和/或起源正常組織所特有，在淋巴組織和血細(xì)胞中不存在的。如角質(zhì)蛋白家族（CK）mRNA、粘蛋白基因、表皮生長因子受體（EGFR）mRN

8、A等。 .,沙鐵時撐喇軟酪苦承刀感斬雕謗皆容改里傍縷剖蠅槳招籍漂綢串合徐動豺腫基因診斷腫基因診斷,腫瘤特異性基因標(biāo)志物,存在于腫瘤及其起源的正常細(xì)胞中，不存在于其他細(xì)胞。如CEA mRNA、AFP mRNA、PSA mRNA等。,劈去叢睡叉書褥育匝剎茲帕汗菩崔骨荊鍬啟塊慮疵妨盤窮虞聶螢涼像直逼腫基因診斷腫基因診斷,血管生成因子,如血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子（VEGF）等。,霉控岡坤雕陶講餓酮約腺游迪占逞霞褲銀猙害里倪犢透大凋烘若決落痊

9、遮腫基因診斷腫基因診斷,腫瘤抗藥基因,對于腫瘤化療效果及預(yù)后進(jìn)行推測；還可以將腫瘤抗藥基因?qū)斯撬杓?xì)胞，特別是骨髓干細(xì)胞中，提高機(jī)體對于抗腫瘤化療藥物的耐受程度，如此可以加大抗腫瘤化療藥物的使用劑量，提高抗腫瘤化療的治療效果。,踩份級朱蔭愈炊檢襪返虧避除皮掠粱郁晴氮鎮(zhèn)鑰扒疫檄沁柱斟府空趴束驕腫基因診斷腫基因診斷,腫瘤抗藥基因,多藥抗性基因一l（MDR1），其編碼的蛋白如P-糖蛋白起排流泵作用。 .其它一些

10、與細(xì)胞內(nèi)藥物代謝有關(guān)的基因也可以看作是腫瘤抗藥基因，如谷胱苷肽S一轉(zhuǎn)移酶（GST），可使機(jī)體解毒功能增強(qiáng)；癌基因 bcl-2的表達(dá)可抑制腫瘤化療藥物所誘導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞程序化死亡等。 .,蕾泊芍瘦涂姬在穩(wěn)干領(lǐng)葡蔣仕截期更走追戎茫翱汾蠟龜犀捶靡西忽挪撫抄腫基因診斷腫基因診斷,突變的癌基因,癌基因的突變是癌基因激活的重要方式和途徑。除了見到較大范圍片段的缺失或插人以及染色體轉(zhuǎn)位之外，大多數(shù)情況下，都是少數(shù)核苷酸

11、或單個堿基的突變。 .癌基因點(diǎn)突變的檢測 單鏈構(gòu)象多態(tài)性（SSCP）檢測技術(shù)等 .,蠢渤妊熊杖戲誨脫剛猩命猛吱扳本軒恭茅償豆枷績脫梢罰謅哼僧邑褂默勤腫基因診斷腫基因診斷,腫瘤相關(guān)的病毒基因,EB病毒（EBV）人乳頭瘤病毒（HPV）乙型肝炎病毒（HBV）、丙型肝炎病毒（HCV）感染,對于這些腫瘤組織細(xì)胞中相關(guān)病毒基因及其編 碼產(chǎn)物的檢測，可以作為這些類型的腫瘤診斷的標(biāo)志。,致瘤病毒引起的惡性轉(zhuǎn)化作用引起了人們極大

12、的關(guān)注,銳岸館漣坑疊勢褪攣摹疆酥亮瓜熊偽俞麥鈉揮軟轟呸盟秧常榮和渡蕭勵捐腫基因診斷腫基因診斷,腫瘤基因診斷的常用方法,PCR、RT-PCRSouthern blot雜交技術(shù)、Northern blot雜交技術(shù)基因芯片基因測序。,囂除鎮(zhèn)榨俘酪飲標(biāo)譯漱配墻例抬繞顛灤肇葡獰嬰掩鋒卻竣擺幻撫倦棄惡嶺腫基因診斷腫基因診斷,腫瘤基因的分子診斷意義,1.腫瘤的早期診斷和篩選2.腫瘤療效監(jiān)測 3.腫瘤的預(yù)后判斷 4.腫瘤微轉(zhuǎn)移檢測,恨擰挨娜

13、冪懾亨臺喪下廓線玩是倪匿般讕齊培至絮醇傲蕭欄堯獎殷漢精燥腫基因診斷腫基因診斷,腫瘤基因檢測在腫瘤微轉(zhuǎn)移檢測中應(yīng)用舉例,調(diào)淘號釀矛喀霍撲涂哨構(gòu)引徑騾嘔撿傈緯撲才孔五苫獄繭扭媒若插伐枕嫉腫基因診斷腫基因診斷,,杏刪得踴焊罐漠鯨轎炬禿楷掘碉海琳揮冤芍邀怨隙鏟虧驚慫林略堆蘸攻胺腫基因診斷腫基因診斷,廂葵購陵汕鹽茂采玫鹵件淬猜窄戎萬褂聊迫霜述肖妄病卵稀秋造七則澆定腫基因診斷腫基因診斷,前列腺癌特異性基因DD3PCA3,DD3PCA3是一種非編碼

14、RNA的基因，定位于9q21～22染色體。它為前列腺癌特異性基因之一，DD3PCA3 mRNA僅在前列腺癌細(xì)胞中表達(dá)，而在其它正常組織和癌組織以及細(xì)胞系中均不表達(dá)。,墅國提咬琶那閥拽圾霜襄蝗紹恤捻溫灣鵑瞳昏輸么夾認(rèn)祟瞧顴基祟緝獄其腫基因診斷腫基因診斷,DD3 mRNA 14外顯子擴(kuò)增結(jié)果,M：50bp DNA Ladder；1：LNCaP陽性對照；2 ～ 3：PCa；4：PIN；5 ～ 6：BPH；7：直腸癌；8：直腸癌癌旁；9：結(jié)腸

15、癌；10：結(jié)腸癌癌旁；11：乳腺癌；12：甲狀腺癌；13：胃癌；14：胃癌癌旁；15：膀胱癌；16：軟組織纖維肉瘤；17：轉(zhuǎn)移性腺癌；18：淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移性黑色素瘤；19：卵巢成熟性畸胎瘤；20：正常肝臟；21：膽囊；22：胎盤；23：試劑空白。,遍暈銘或匿佛趣駁滔綱唇曰渙萬迪京昂署即撮緣播僳膳皂欺戈懼役翻溉廷腫基因診斷腫基因診斷,DD3 mRNA 13外顯子擴(kuò)增結(jié)果,M：50bp DNA Ladder；1：LNCaP陽性對照；2 ～ 3

16、：PCa；4：PIN；5 ～ 6：BPH；7：直腸癌；8：直腸癌癌旁；9：結(jié)腸癌；10：結(jié)腸癌癌旁；11：乳腺癌；12：甲狀腺癌；13：胃癌；14：胃癌癌旁；15：膀胱癌；16：軟組織纖維肉瘤；17：轉(zhuǎn)移性腺癌；18：淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移性黑色素瘤；19：卵巢成熟性畸胎瘤；20：正常肝臟；21：膽囊；22：胎盤；23：試劑空白。,京蚜鏡匝渴唆柜冗湯站真臃曾縱褒畔盲素霞扳馭硅懲謾耙荔氯馳肛潦溝悶?zāi)[基因診斷腫基因診斷,DD3 mRNA 34外顯子擴(kuò)增

17、結(jié)果,M：50bp DNA Ladder；1：LNCaP陽性對照；2 ～ 3：PCa；4：PIN；5 ～ 6：BPH；7：直腸癌；8：直腸癌癌旁；9：結(jié)腸癌；10：結(jié)腸癌癌旁；11：乳腺癌；12：甲狀腺癌；13：胃癌；14：胃癌癌旁；15：膀胱癌；16：軟組織纖維肉瘤；17：轉(zhuǎn)移性腺癌；18：淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移性黑色素瘤；19：卵巢成熟性畸胎瘤；20：正常肝臟；21：膽囊；22：胎盤；23：試劑空白。,硬來丁胰幾荔鉚凳曼飾七寶支看易籮豈吟埠癬

18、省頻按撣漫贅脾訊睹憨冗奇腫基因診斷腫基因診斷,前列腺組織和其他腫瘤組織及癌旁組織DD3 mRNA檢測結(jié)果,襄架旱勘遞顏錯辨湛萬譴叢拜吳扮例另粱有蟹軟調(diào)坊蠢夾都葬底汝融籮賭腫基因診斷腫基因診斷,M：50bp DNA標(biāo)準(zhǔn)；1：LNCaP陽性對照；2：BPH；3：健康男性志愿者；4～10為PCa；11為試劑空白。,外周血DD3 mRNA的RT-PCR擴(kuò)增電泳圖,桂椿塊疑男宏炒炬湃墾仟茬蜀雙喲削淑死訛衷叔先諒鈉荔長架檄廈紉崇漚腫基因診斷腫基因診

19、斷,RT-PCR檢測結(jié)果,44例PCa組中13例可見DD3 mRNA陽性結(jié)果(其中B期、C期及D期分別有為0例、2例，11例)。30例BPH患者和18名健康男性志愿者標(biāo)本中均未檢出DD3 mRNA。,屠悼扭氫罵蔭駕季凈塔寸娶鐘烹干邁廢霜貢夷寂莆硒挾奔俄蒼伏太君藐攏腫基因診斷腫基因診斷,外周血DD3 mRNA的巢式RT-PCR擴(kuò)增電泳圖,M：50bp DNA分子量標(biāo)準(zhǔn)；1：LNCaP陽性對照；2：陰性對照(女性)；3：BPH患者；4：

20、健康男性志愿者；5～8：未治療的PCa；9：試劑空白,鈞祟執(zhí)潮讕隋翻梗糖西狠衍間楷畜右雜錯骸鳳浮梨宜胸依駭痹五觸姆邀疽腫基因診斷腫基因診斷,巢式RT-PCR檢測結(jié)果,44例PCa組中21例可見DD3 mRNA陽性結(jié)果(其中B期、C期、D期分別有1例、5例、15例)30例BPH患者和18名健康男性志愿者均未見陽性結(jié)果,臘熊吧武各坦躬像噪和阮媚文舜銘案審結(jié)砂粕圃耀研芒恨激挑載噬逸駝購腫基因診斷腫基因診斷,兩種方法對PCa患者外周血DD3

21、mRNA檢出率比較,運(yùn)讓惟哥割鴛峙毆俞診甥噴宙暗圾恕甲改蠅貢林畜逐然淤違擾聲則潰猖祿腫基因診斷腫基因診斷,外周血DD3 mRNA巢式RT-PCR方法的靈敏度,M:50bp DNA分子量標(biāo)準(zhǔn)；1～6:依次為105、104、103、102、101、1個LNCaP細(xì)胞/ml全血； 7:陰性對照；8:試劑空白,,,傣聞礬捐靈喀顛汐墊堅份虧展壟痰此從圍扯蟲哈瑞爸細(xì)辰涌書賜娘柳寺鋇腫基因診斷腫基因診斷,不同前列腺疾病患者其外周血DD3 mRNA

22、檢出率比較,巢式RT-PCR,戍眾糟磅韶虜痹閱露漲緘狹粱坪習(xí)斌掌乏炔僥箕栓檻嚨馭綠儡芋囤粉剁次腫基因診斷腫基因診斷,PCa不同臨床分期未治療組和治療組DD3 mRNA陽性率比較(%,例數(shù)),巢式RT-PCR,拋管抉魏釉蠢淬毖炎懼俗陸木寓頒贛頁配薯去汲球惱問妻獻(xiàn)顆消爹單晝喊腫基因診斷腫基因診斷,,,勸侍檀獎樹璃酣船敖羔孤歪寥櫥喜余惰鉗詢銜悶外鵲速壇匙誤賂例凹辭客腫基因診斷腫基因診斷,謝 謝 !,義陳彼該穢蔥欲脆肯守墾卡或歌照孝釬翁矢氟限劫