橘皮多糖的提取

1、桔子皮多糖的提取一丶實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?）學(xué)習(xí)從植物中提取多糖及多糖含量測定的方法。（2）了解換算因子的計(jì)算并掌握標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作。二丶儀器與藥品材料：新鮮的桔子皮試劑：石油醚；無水乙醇；濃硫酸；三氯甲烷；正丁醇；標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液（0.04mgmL)；苯酚溶液（5%）儀器：電熱恒溫水浴箱；電熱鼓風(fēng)干燥箱；高速中藥粉碎機(jī)；電子天平；200分光光度計(jì)；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器；循環(huán)水式多用真空泵三丶實(shí)驗(yàn)步驟（1）桔子皮多糖的提取過程稱取50.00g樣品粉末，置于50

2、0mL圓底燒瓶中，加入500mL80%的乙醇，回流2h，脫去表面脂肪、抽濾、風(fēng)干，重復(fù)1次。脫脂后的樣品，在恒溫水浴中熱水浸提2h，過濾后.濾渣在相同條件下重復(fù)浸提1次。將兩次浸提液減壓過濾，去除濾渣，合并兩次濾液。將合并濾液在真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中濃縮至小體積，得粗多糖。往粗多糖里加入11的石油醚，去色素。揮干溶劑后，用Sevag試劑(氯仿∶正丁醇=4∶1)除蛋白，連續(xù)操作多次，直到完全脫除蛋白為止。在脫蛋白后的多糖溶液中加入3倍95%乙醇

3、，沉淀用乙醇、丙酮及乙醚反復(fù)洗滌，經(jīng)抽濾、真空干燥后得到精制多糖。（2）換算因子的測定精密稱取干燥至恒重的精制桔子皮多糖20mg，置于小燒杯中，加入適量的蒸餾水，水浴加熱使其溶解，冷卻后轉(zhuǎn)入500mL容量瓶中，定容至刻度，搖勻，作多糖儲備液。吸取多糖儲備液0.4mL于帶塞試管中，加蒸餾水至2.0mL，按測定標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法測其吸光度，按下面公式計(jì)算換算因子f。m為稱取的多糖質(zhì)量(mg)，C為多糖中葡萄糖的質(zhì)量濃度(μgmL)，D為多糖的稀

4、釋倍數(shù)，做平衡實(shí)驗(yàn)4次，求其平均值。DCmf??（3）標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作取葡萄糖于105℃干燥至恒質(zhì)量，精確稱取20mg，加蒸餾水溶解，定容至500mL。分別吸取0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL、1.2mL、1.4mL、1.6mL的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液，置于10mL試管中，各加水補(bǔ)足至2mL加入體積分?jǐn)?shù)為5%的苯酚1m，搖勻，迅速滴加濃硫酸5mL靜止10min搖勻，室溫放置20min后于490nm測吸光度，以2.0mL水按

5、同樣顯色操作作為空白，以蒸餾水為空白，葡萄糖質(zhì)量濃度C（μgml）為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。以吸光度(A)對葡萄糖質(zhì)量濃度(C)作回歸處理，得回歸方程:A=0.0098C0.063相關(guān)系數(shù)r=0.990，n=8。桔子皮多糖的提取綜述摘要：將桔子皮烘干，粉碎，先用80%的乙醇溶液于80℃回流2個小時，除去單糖和低聚糖，再用石油醚脫脂、Sevag法除蛋白得到淺黃色桔子皮多糖，經(jīng)提純后得到灰白色桔子皮多糖。通過正交實(shí)驗(yàn)法研究了浸

6、提溫度、浸提時間、料水比三因素對桔子皮多糖提取的影響。初步篩選出桔子皮多糖最佳提取條件為，料水比1∶35，浸提溫度90℃，浸提時間120min。用硫酸—苯酚法對桔子皮多糖含量進(jìn)行測定，結(jié)果表明；.桔子皮多糖換算因子為3.15，桔子皮多糖平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2.36%，桔子皮多糖測定相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為2.14%。關(guān)鍵詞：桔子皮；多糖；提??；分析桔子皮，在我國的傳統(tǒng)醫(yī)藥中又叫陳皮，系蕓香科植物橘樹的成熟果實(shí)之干燥果皮，味苦、辛，性溫。歸肺、

7、脾經(jīng)。功能理氣化痰、健胃除濕、降低血壓等，主要用于治療胸腔脹滿，食少吐瀉，咳嗽痰多等癥，因此是一種很好的中藥材。桔子皮除含有多糖外，還含有大量的對人體有益的維生素B和C，香精油，芳香油，麝香草酚等有機(jī)物。桔子皮中的多糖被制成保健品和食品著色添加劑肯定具有重要的開發(fā)價值。有關(guān)桔子皮中色素、類黃酮、果膠等物質(zhì)的研究很多，而對桔子皮多糖的有關(guān)研究則少見報道。多糖類物質(zhì)是生命代謝不可缺少的重要物質(zhì)，它是由多個單糖或其衍生物聚合而成的大分子活性化

8、合物。對多糖的研究，最早是在20世紀(jì)40年代，但其作為廣譜免疫促進(jìn)劑而引起人們的極大重視則是在60年代，經(jīng)過40余年的不斷發(fā)展，人們對多糖這一類重要生命物質(zhì)產(chǎn)生了新的認(rèn)識，使這一學(xué)科成為目前生命科學(xué)中研究最活躍的領(lǐng)域之一。自20世紀(jì)60年代多糖的生理活性功能被發(fā)現(xiàn)后，有關(guān)多糖的研究日益受到世界各國的重視。近年來發(fā)現(xiàn)植物多糖具有抗病毒、增強(qiáng)免疫力、抗腫瘤、延緩衰老、降血糖、抗凝血等多種功效[1]，而且多糖作為藥物其毒性極小。據(jù)Franz等

9、[2]報道，已有近百種植物的多糖被分離提取鑒定出來。這類多糖來源廣泛且沒有細(xì)胞毒性，應(yīng)用于生物體毒副作用小，因此對植物多糖的研究已成為醫(yī)藥界的熱門領(lǐng)域。所以多糖物質(zhì)的研究將成為繼蛋白質(zhì)和核酸之后的探索生命奧秘的第三里程碑[3]。目前，多糖的主要提取分離方法有水提取法、微波輔助提取法和索氏提取法。吉林大學(xué)生命科學(xué)院孟凡欣等采用了水提法提取了刺五加中的刺五加多糖[4]，廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)研究所的唐小俊等也使用該技術(shù)提取了荔枝中的荔枝多

10、糖[5]；微波輔助提取法是近年來發(fā)展起來的一項(xiàng)提取多糖的技術(shù)，國內(nèi)外學(xué)者先后運(yùn)用該技術(shù)提取了辣椒中的辣椒素、大蒜中的大蒜辣素、蘋果中的果膠、銀杏中的黃酮苷、甜菜及甘蔗中的糖分[6]，葡萄中糖苷類風(fēng)味物質(zhì)[7]真菌中的總脂肪酸和麥角醇[8]；也是一種較常用的方法，四川理工學(xué)院生物工程系的游建明采用索氏提取法提取了生姜中的生姜黃酮[9]。塔里木大學(xué)農(nóng)業(yè)工程學(xué)院的候旭杰等采用該技術(shù)提取了野生巴楚蘑菇中的野生巴楚蘑菇多糖[10]。馬釗發(fā)明了洋蔥