實(shí)驗(yàn)時(shí)注意

1、骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BMSCs）的）的PERCOLL分離培養(yǎng)法分離培養(yǎng)法原代培養(yǎng)：原代培養(yǎng)：1.取體重150~200g的大鼠，1%的戊巴比妥鈉腹腔注射或乙醚吸入麻醉，頸椎脫臼處死，75%的酒精浸泡消毒5min。2.將大鼠腹部朝上，四肢用注射器針頭固定于泡沫板，呈“大”字形，用剪刀，鑷子將兩后肢皮膚剪開，換另一套剪刀、鑷子分離肌肉、肌腱，將股骨、脛骨剝離出來，放入裝有75%酒精的離心管或燒杯中，移入超凈臺(tái)。3.將脛骨、股骨

2、取出放入培養(yǎng)皿中加入10mlDMEM完全培養(yǎng)基，用潔凈的剪刀、鑷子進(jìn)一步剝離骨頭上的肌肉、肌腱組織。4.將剝離干凈的骨頭用少量PBS沖洗后，放入另一培養(yǎng)皿，加入12mlDMEM完全培養(yǎng)基，在培養(yǎng)基中剪斷骨干兩端，用2ml注射器吸取培養(yǎng)基插入一頭斷端將骨髓從另一頭沖出，反復(fù)吹打使骨髓分散，制成均勻的細(xì)胞懸液。5.另取干凈離心管A，加入10mlPERCOLL淋巴細(xì)胞分離液。將吹打均勻的細(xì)胞懸液沿傾斜30o緩緩加入，切記不能沖破PERCOLL