多靶點pcrispr載體改良版(單子葉植物用)使用方法2014-10-26(p)副本_第1頁
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文檔簡介

1、1CRISPRCas9basedgenomeeditingtechnologyACRISPRCas9vectsystemfmultiplextargetingofgenesitesinmonocotplants亞熱帶農(nóng)業(yè)生物資源保護與利用國家重點實驗室華南農(nóng)業(yè)大學生命科學學院劉耀光課題組（ygliu@scau.）1.CRISPRCas9核酸酶切靶序列原理圖核酸酶切靶序列原理圖3注：這些質粒保存在E.coliTOP10F’(LacIq)菌

2、株繁殖，以使ccdB(大腸桿菌致死基因)能夠被LacIq產(chǎn)生高水平阻礙蛋白抑制其表達。GCGCGGTGTCATCTATGTTACTAGATCGGGAGCACCGGTAAGGCGCGCCGTAGTGCTCGAGAGACCTCTGAAG(ccdBs657bp)GAGCGTGGGTCTCGCGGTATCATTGGCGCGCCTCTCGAGCTAGCGGCCGCATGCATCGATCTCCTACATCGTATAAATTAGCCTATACGAAG

3、TTATTGCATCTATGTCGGGPCRSequencingprimer(SPR原命名SP1):PCRSequencingprimer(SPML原命名SP2)IBLBsaIBsaIBRINotICCCGACATAGATGCAATAACTTC3pCas9NLSIRBLBBsaI(BR)P35:HPTNotIpBR322ipBR322bnKanrNLSNotIpYLCRISPRCas9MH(~16.5kb)(NuclearLocaliz

4、ationSignal)BsaI(BL)PubiccdBsTnospCas9NLSIRBLBBsaI(BR)P35:BarpVS1repliconNotIpBR322ipBR322bnKanrNLSNotIpYLCRISPRCas9MB(~16.5kb)BsaI(BL)ccdBsPubiTnospVS1replicon3.3.基因組靶位點選擇和雙鏈接頭設計基因組靶位點選擇和雙鏈接頭設計3.1靶位點選擇靶位點選擇（1）在目標區(qū)如果能夠找到

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