高效液相色譜原理和操作詳解

1、高效液相色譜我國(guó)藥典收載高效液相色譜法項(xiàng)目和數(shù)量比較表：數(shù)量方法項(xiàng)目1985年版1990年版1995年版2000年版鑒別934150檢查1240160HPLC法含量測(cè)定760117387鑒于HPLC應(yīng)用在藥品分析中越來越多，因此每一個(gè)藥品分析人員應(yīng)該掌握并應(yīng)用HPLC。I概論..................................................................................

2、............................................................2一、液相色譜理論發(fā)展簡(jiǎn)況一、液相色譜理論發(fā)展簡(jiǎn)況............................................................................................................2二、二、HPLC的特點(diǎn)和優(yōu)點(diǎn)的特點(diǎn)和優(yōu)點(diǎn)......

3、..........................................................................................................2三、色譜法分類三、色譜法分類...................................................................................................

4、.............................3四、色譜分離原理四、色譜分離原理............................................................................................................................3II基本概念和理論........................................

5、.................................................................................5一、基本概念和術(shù)語一、基本概念和術(shù)語........................................................................................................................

6、5二、塔板理論二、塔板理論....................................................................................................................................8三、速率理論三、速率理論（又稱隨機(jī)模型理論）....................................................

7、........................................9IIIHPLC系統(tǒng)..............................................................................................................................10一、輸液泵一、輸液泵................................

8、......................................................................................................11二、進(jìn)樣器二、進(jìn)樣器..........................................................................................................

9、............................13三、色譜柱三、色譜柱......................................................................................................................................14四、檢測(cè)器四、檢測(cè)器..................................

10、....................................................................................................17五、數(shù)據(jù)處理和計(jì)算機(jī)控制系統(tǒng)五、數(shù)據(jù)處理和計(jì)算機(jī)控制系統(tǒng)..........................................................................................

11、........20六、恒溫裝置六、恒溫裝置..................................................................................................................................20IV固定相和流動(dòng)相.........................................................

12、............................................................20一、基質(zhì)（擔(dān)體）一、基質(zhì)（擔(dān)體）..........................................................................................................................20二、化學(xué)鍵合固定相二、化學(xué)鍵合固定相

13、......................................................................................................................22三、流動(dòng)相三、流動(dòng)相..........................................................................................

14、............................................231流動(dòng)相的性質(zhì)要求............................................................................................................232流動(dòng)相的選擇................................................

15、....................................................................243流動(dòng)相的pH值.................................................................................................................244流動(dòng)相的脫氣....................

16、................................................................................................255流動(dòng)相的濾過...................................................................................................................

17、.256流動(dòng)相的貯存....................................................................................................................267鹵代有機(jī)溶劑應(yīng)特別注意的問題.............................................................................

18、.......268HPLC用水........................................................................................................................26樣品量少，容易回收——樣品經(jīng)過色譜柱后不被破壞，可以收集單一組分或做制備。三、色譜法分類三、色譜法分類按兩相的物理狀態(tài)可分為：氣相色譜法(GC)和液相色譜法(LC)

19、。氣相色譜法適用于分離揮發(fā)性化合物。GC根據(jù)固定相不同又可分為氣固色譜法(GSC)和氣液色譜法(GLC)，其中以GLC應(yīng)用最廣。液相色譜法適用于分離低揮發(fā)性或非揮發(fā)性、熱穩(wěn)定性差的物質(zhì)。LC同樣可分為液固色譜法(LSC)和液液色譜法(LLC)。此外還有超臨界流體色譜法(SFC)，它以超臨界流體（界于氣體和液體之間的一種物相）為流動(dòng)相（常用CO2），因其擴(kuò)散系數(shù)大，能很快達(dá)到平衡，故分析時(shí)間短，特別適用于手性化合物的拆分。按原理分為吸附色

20、譜法(AC)、分配色譜法(DC)、離子交換色譜法(IEC)、排阻色譜法(EC，又稱分子篩、凝膠過濾(GFC)、凝膠滲透色譜法(GPC）和親和色譜法。（此外還有電泳。）按操作形式可分為紙色譜法(PC)、薄層色譜法(TLC)、柱色譜法。四、色譜分離原理四、色譜分離原理高效液相色譜法按分離機(jī)制的不同分為液固吸附色譜法、液液分配色譜法（正相與反相）、離子交換色譜法、離子對(duì)色譜法及分子排阻色譜法。1液固色譜法液固色譜法使用固體吸附劑，被分離組分在

21、色譜柱上分離原理是根據(jù)固定相對(duì)組分吸附力大小不同而分離。分離過程是一個(gè)吸附－解吸附吸附－解吸附的平衡過程。常用的吸附劑為硅膠或氧化鋁，粒度5~10μm。適用于分離分子量200~1000的組分，大多數(shù)用于非離子型化合物，離子型化合物易產(chǎn)生拖尾。常用于分離同分異構(gòu)體。2液液色譜法液液色譜法使用將特定的液態(tài)物質(zhì)涂于擔(dān)體表面，或化學(xué)鍵合于擔(dān)體表面而形成的固定相，分離原理是根據(jù)被分離的組分在流動(dòng)相和固定相中溶解度不同而分離。分離過程是一個(gè)分配平衡

22、分配平衡過程。涂布式固定相應(yīng)具有良好的惰性；流動(dòng)相必須預(yù)先用固定相飽和，以減少固定相從擔(dān)體表面流失；溫度的變化和不同批號(hào)流動(dòng)相的區(qū)別常引起柱子的變化；另外在流動(dòng)相中存在的固定相也使樣品的分離和收集復(fù)雜化。由于涂布式固定相很難避免固定液流失，現(xiàn)在已很少采用?，F(xiàn)在多采用的是化學(xué)鍵合固定相，如C18、C8、氨基柱、氰基柱和苯基柱。液液色譜法按固定相和流動(dòng)相的極性不同可分為正相色譜法(NPC)和反相色譜法(RPC)。正相色譜法正相色譜法采用極性