硅膠柱的制備

1、硅膠的預處理我們以濃鹽酸浸泡硅膠14小時，然后用蒸餾水洗滌硅膠4次后，將起進行減壓抽濾，后不斷加蒸餾水沖洗。在1小時之后，抽濾的水呈中性，但仍然含有氯離子。經(jīng)過4小時不斷的沖洗才使得抽濾液中基本不含氯離子。晾干一周后，在110℃烘箱中活化2小時。活化后的硅膠加石油醚浸泡并攪拌均勻。在裝柱時，宜使用口徑較大的玻璃漏斗置于層析柱上部，注入12高的石油醚，打開下部活塞，然后盡量均勻地將硅膠傾入漏斗，這樣可以防止層析柱中形成斷層(這一步是實驗的

2、關鍵步驟)。裝柱裝柱子（添硅膠）時，有兩種方法：即濕法裝柱和干法裝柱，二者各有優(yōu)劣。不論干法還是濕法，硅膠（固定相）的上表面一定要平整，并且硅膠（固定相）的高度一般為15cm左右，太短了可能分離效果不好，太長了也會由于擴散或拖尾導致分離效果不好。濕法裝柱是先把硅膠用適當?shù)娜軇┌鑴蚝?，再填入柱子中，然后再加壓用淋洗劑“走柱子“，本法最大的?yōu)點是一般柱子裝的比較結實，沒有氣泡。干法裝柱則是直接往柱子里填入硅膠，然后再輕輕敲打柱子兩側，至硅膠

3、界面不再下降為止，然后再填入硅膠至合適高度，最后再用油泵直接抽，這樣就會使得柱子裝的很結實。接著是用淋洗劑“走柱子“，一般淋洗劑是采用TLC分析得到的展開劑的比例再稀釋一倍后的溶劑。通常上面加壓，下面再用油泵抽，這樣可以加快速度。干法裝柱較方便，但最大的缺陷在于“走柱子“時，由于溶劑和硅膠之間的吸附放熱（可以用手摸柱子明顯感覺到），容易產生氣泡，這一點在使用低沸點的淋洗劑時如乙醚，二氯甲烷更為明顯。雖然產生的氣泡在加壓的情況下不易察覺，

4、但是，一旦撤去壓力，如在上樣、加溶劑等操作的時候，氣泡就會釋放出來，嚴重時，整個柱子變花，樣品不可能平整地通過，當然也就談不上分離了。解決的辦法是：第一、硅膠一定要天結實；第二、一定要用較多的溶劑“走柱子“，一定要到柱子的下端不再發(fā)燙，恢復到室溫后再撤去壓力。也有介紹在硅膠的最上層填上一小層石英砂，防止添加溶劑的時候，使得樣品層不再整齊。但我的感覺是如果小心上樣，添加溶劑，則沒有這個必要。上樣也有干法和濕法之分：干法就是把待分離的樣品用

5、少量溶劑溶解后，在加入少量硅膠，拌勻后再旋去溶劑。如此得到的粉末再小心加到柱子的頂層。干法上樣較麻煩，但可以保證樣品層很平整。濕法上樣就是用少量溶劑（最好就是展開劑，如果展開劑的溶解度不好，則可以用一極性較大的溶劑，但必須少量）將樣品溶解后，再用膠頭滴管轉移得到的溶液，沿著層析柱內壁均勻加入。然后用少量薌洗滌后，再加入。濕法較方便，熟手一般采用此法推薦一種將硅膠柱裝得均勻推薦一種將硅膠柱裝得均勻又密實的方法又密實的方法非常實用非常實用硅

6、膠柱裝不好主要出現(xiàn)的問題有疏密不均勻和不夠密實假如是比較大的柱在溶劑進入硅膠柱后極易造成硅膠柱體出現(xiàn)斷裂影響分離效果.解決辦法是先在層析柱下面的溶液出口處接上真空泵連接管開啟真空泵將預備好的硅膠倒入空層析柱中.硅膠倒入的速度不要太快加完硅膠后要抖動柱子以使頂部的硅膠形成平面待硅膠不再向下收縮為止[u]關掉層析柱出口處的閥或封閉真空泵連接管在硅膠柱內氣壓平衡后[u]取掉真空管即可.也可以先把硅膠全部裝入柱中再抽真空但這樣效果要差些.我一直

7、采用此法裝柱效果很好.謝謝!用在樹脂柱上可以嗎？沒有真空泵怎么辦啊？呵呵“““我一般直接裝，用洗耳球猛敲柱子，決對放心，不會敲破的。裝填的效果也不錯。還得要贊一下，LZ太牛B了，這樣的方法也想出來，值得學習。佩服！這樣很好的，我一直就是這么裝的，科學院系統(tǒng)都著樣的同“加壓柱”類似這樣裝柱是很方便，可是也會出現(xiàn)問題，就是“太實”了，可能導致流動相速度太慢（加相同壓力比較）。1。稱量。200300目硅膠，稱3070倍于上樣量；如果極難分，也

8、可以用100倍量的硅膠H。干硅膠的視密度在0.4左右，所以要稱40g硅膠，用燒杯量100ml也可以。2。攪成勻漿。加入干硅膠體積一倍的溶劑用玻璃棒充分攪拌。如果洗脫劑是石油醚乙酸乙酯丙酮體系，就用石油醚拌；如果洗脫劑是氯仿醇體系，就用氯仿拌。如果不能攪成勻漿，說明溶劑中含水量太大，尤其是乙酸乙酯丙酮，如果不與水配伍走分配色譜的話，必須預先用無水硫酸鈉久置干燥。氯仿用無水氯化鈣干燥，以除去1%的醇。如果樣品對酸敏感，不能用氯仿體系過柱。3

9、。裝柱。將柱底用棉花塞緊，不必用海沙，加入約13體積石油醚（氯仿），裝上蓄液球，打開柱下活塞，將勻漿一次傾入蓄液球內。隨著沉降，會有一些硅膠沾在蓄液球內，用石油醚（氯仿）將其沖入柱中。4。壓實。沉降完成后，加入更多的石油醚，用雙聯(lián)球或氣泵加壓，直至流速恒定。柱床約被壓縮至910體積。無論走常壓柱或加壓柱，都應進行這一步，可使分離度提高很多，且可以避免過柱時由于柱床萎縮產生開裂。5。上樣。干法濕法都可以。海沙是沒必要的。上樣后，加入一些洗

10、脫劑，再將一團脫脂棉塞至接近硅膠表面。然后就可以放心地加入大量洗脫劑，而不會沖壞硅膠表面。6。過柱和收集。柱層析實際上是在擴散和分離之間的權衡。太低的洗脫強度并不好，推薦用梯度洗脫。收集的例子：10mg上樣量，1g硅膠H，0.5ml收一餾分；12g上樣量，50g硅膠（200300目），2050ml收一餾分。7。檢測。要更多地使用專用噴顯劑，如果僅用紫外燈，會損失較多產品，紫外的靈敏度一般比噴顯劑底12個數(shù)量級。8。送譜。收集的產品旋干，

11、在送譜前通常需要重結晶。如果樣品太少或為液體，可過一小凝膠柱，作為送譜前的最后純化手段?？沙渥V1.5ppm左右所謂的“硅膠”峰。1.先根據(jù)TLC方法篩選好洗脫劑，使兩相鄰物質Rf值之差最大化2.將柱子必須裝平整、均勻3.考慮有限柱填料的吸附量4.可考慮用剃度法分開并洗脫關于柱子的尺寸，應該是粗長的最好。柱子長了，相應的塔板數(shù)就高。柱子粗了，上樣后樣品的原點就?。ǚ从吃谥由暇褪菢悠穼颖容^?。?，這樣相對的減小了分離的難度。試想如果柱子

12、十厘米，而樣品就有二厘米，那么分離的難度可想而知，恐怕要用很低極性的溶劑慢慢沖了。而如果樣品層只有0.5厘米，那么各組分就比較容易得到完全分離了。當然采用粗大的柱子要犧牲比較多的硅膠和溶劑了，不過這些成本相對于產品來說也許就不算什么了（有些不環(huán)保的說，不過溶劑回收重蒸后也就減小了部分浪費）。現(xiàn)在見到的柱子徑高比一般在1：5～10，書中寫硅膠量是樣品量的30～40倍，具體的選擇要具體分析。如果所需組分和雜質分的比較開（是指在所需組分rf在