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1、必考點(diǎn)31 微生物的利用與傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)的應(yīng)用,專題十三 生物技術(shù)實(shí)踐,,依綱排查,,1.微生物的利用(1)常用的微生物的分離與測(cè)定方法有哪些?(2)培養(yǎng)基的種類及配制的一般流程是什么?(3)微生物篩選的基本原理是什么?計(jì)數(shù)的常用方法有哪些?2.傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)及運(yùn)用發(fā)酵加工食品的基本方法果酒、果醋、腐乳、泡菜制作的基本原理及一般操作流程分別是什么?,,核心提煉夯實(shí)基礎(chǔ) 突破要點(diǎn),題組突破剖析題型 提煉方法,欄目索
2、引,,考點(diǎn)整合 體系重建,1.理清微生物培養(yǎng)的“5”種基本技術(shù),核心提煉,(1)培養(yǎng)基的制備:計(jì)算→ →溶化→ →倒平板。(2)無(wú)菌技術(shù):主要包括 和 。(3)倒平板操作:待培養(yǎng)基冷卻至 左右時(shí),在 附近倒平板。(4)平板劃線操作:平板劃線法是通過(guò)接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面的操作,將聚集的菌種
3、 分散到培養(yǎng)基的表面。注意劃線的方法(如圖)。,稱量,滅菌,消毒,滅菌,50 ℃,酒精燈火焰,連續(xù)劃線,逐步稀釋,(5)稀釋涂布平板法:先將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面,進(jìn)行培養(yǎng)。在稀釋度足夠高的菌液里,聚集在一起的微生物將被分散成單個(gè)細(xì)胞,從而能在培養(yǎng)基表面形成 。,單個(gè)的菌落,2.把握“2”種微生物的分離與計(jì)數(shù)方法,(1)選擇培養(yǎng)基類型①篩選尿素分解菌:用以
4、 為唯一氮源的培養(yǎng)基。②篩選纖維素分解菌:用富含 、添加剛果紅的培養(yǎng)基培養(yǎng)。(2)微生物計(jì)數(shù)的“2”大方法① ;②顯微計(jì)數(shù)法。,纖維素,稀釋涂布平板法,尿素,(3)微生物的“2”大鑒定方法,3.理清“4”種傳統(tǒng)發(fā)酵食品的技術(shù),需氧,需氧,無(wú)氧,1.微生物利用的相關(guān)判斷(1)某研究小組從有機(jī)廢水中分離微生物用于廢水處理。接種后的培養(yǎng)皿須放在光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(2013·江蘇,18C)( )
5、(2)純化菌種時(shí),為了得到單菌落,常采用的接種方法有平板劃線法和稀釋涂布平板法(2011·新課標(biāo),39(2)改編)( ),,題組一 聚焦微生物的利用,題組突破,×,√,(3)在瓊脂固體培養(yǎng)基上長(zhǎng)出的單個(gè)菌落含有多種細(xì)菌(2011·重慶,2A)( )(4)檢測(cè)土壤中細(xì)菌總數(shù)實(shí)驗(yàn)操作中,確定對(duì)照組無(wú)菌后,選擇菌落數(shù)在300以上的實(shí)驗(yàn)組平板進(jìn)行計(jì)數(shù)(2009·安徽,6D)( )(5)培養(yǎng)微生物
6、的培養(yǎng)基分裝到培養(yǎng)皿后進(jìn)行滅菌(2013·江蘇,18A改編)( ),×,×,×,2.(2015·江蘇,19)做“微生物的分離與培養(yǎng)”實(shí)驗(yàn)時(shí),下列敘述正確的是( )A.高壓滅菌加熱結(jié)束時(shí),打開(kāi)放氣閥使壓力表指針回到零后, 開(kāi)啟鍋蓋B.倒平板時(shí),應(yīng)將打開(kāi)的皿蓋放到一邊,以免培養(yǎng)基濺到皿 蓋上C.為了防止污染,接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌后應(yīng)趁熱快速挑取菌落D.用記號(hào)筆標(biāo)記培養(yǎng)
7、皿中菌落時(shí),應(yīng)標(biāo)記在皿底上,解析 A項(xiàng)錯(cuò),高壓滅菌加熱結(jié)束后,讓其自然冷卻后再慢慢打開(kāi)排氣閥以排除余氣,然后才能開(kāi)蓋取物;B項(xiàng)錯(cuò),倒平板時(shí)左手拿培養(yǎng)皿,右手拿錐形瓶,左手將培養(yǎng)皿打開(kāi)一條稍大于瓶口的縫隙,倒入培養(yǎng)基后立即蓋上培養(yǎng)皿皿蓋;C項(xiàng)錯(cuò),接種環(huán)灼燒滅菌之后,應(yīng)待其冷卻后才能伸入菌液,以免溫度太高殺死菌種;D項(xiàng)對(duì),在微生物的培養(yǎng)中,一般將培養(yǎng)皿倒置,在皿底上用記號(hào)筆做標(biāo)記。答案 D,3.(2014·新課標(biāo)Ⅱ,39)
8、為了調(diào)查某河流的水質(zhì)狀況,某研究小組測(cè)定了該河流水樣中的細(xì)菌含量,并進(jìn)行了細(xì)菌分離等工作?;卮鹣铝袉?wèn)題:(1)該小組采用稀釋涂布平板法檢測(cè)水樣中的細(xì)菌含量。在涂布接種前,隨機(jī)取若干滅菌后的空白平板先行培養(yǎng)了一段時(shí)間,這樣做的目的是__________________________________;然后,將1 mL水樣稀釋100倍,在3個(gè)平板上用涂布法分別接入0.1 mL稀釋液;經(jīng)適當(dāng)培養(yǎng)后,3個(gè)平板上的菌落數(shù)分別為39、38和37。
9、據(jù)此可得出每升水樣中的活菌數(shù)為_(kāi)_______。,解析 為了檢測(cè)培養(yǎng)基平板滅菌是否合格,可在涂布接種前,隨機(jī)取滅菌后的空白平板先行培養(yǎng)一段時(shí)間。0.1 mL稀釋液中平均有(39+38+37)/3=38個(gè)活菌,則每毫升稀釋液中活菌的數(shù)目為38/0.1=380,則稀釋前每毫升水樣中活菌數(shù)目為380×100=3.8×104,則每升水樣中活菌數(shù)目為3.8×104×1 000=3.8×107。答
10、案 檢測(cè)培養(yǎng)基平板滅菌是否合格 3.8×107,(2)該小組采用平板劃線法分離水樣中的細(xì)菌。操作時(shí),接種環(huán)通過(guò)_____滅菌,在第二次及以后劃線時(shí),總是從上一次劃線的末端開(kāi)始劃線。這樣做的目的是_______________________________________。解析 接種環(huán)、接種針等金屬用具可直接在酒精燈火焰的充分燃燒層灼燒,以達(dá)到迅速?gòu)氐诇缇哪康?。在第二次及以后的劃線時(shí),總是從上一次劃線的末端開(kāi)始劃線
11、,其目的是將聚集的菌體逐步稀釋以便獲得單個(gè)菌落。,灼燒,將聚集的,菌體逐步稀釋以便獲得單個(gè)菌落,(3)示意圖A和B中,__表示的是用稀釋涂布平板法接種培養(yǎng)后得到的結(jié)果。,解析 比較圖A和圖B可以看出:A培養(yǎng)基中細(xì)菌的分布呈線性,是用平板劃線法接種培養(yǎng)后得到的結(jié)果;B培養(yǎng)基中細(xì)菌均勻分布,是用稀釋涂布平板法接種培養(yǎng)后得到的結(jié)果。,B,(4)該小組將得到的菌株接種到液體培養(yǎng)基中并混勻,一部分進(jìn)行靜置培養(yǎng),另一部分進(jìn)行振蕩培養(yǎng)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)
12、:振蕩培養(yǎng)的細(xì)菌比靜置培養(yǎng)的細(xì)菌生長(zhǎng)速度快。分析其原因是:振蕩培養(yǎng)能提高培養(yǎng)液中_______的含量,同時(shí)可使菌體與培養(yǎng)液充分接觸,提高_(dá)________的利用率。解析 振蕩培養(yǎng)可以提高培養(yǎng)液中溶解氧的含量,還可以使菌體與培養(yǎng)液充分接觸,提高了營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的利用率,因此振蕩培養(yǎng)的細(xì)菌比靜置培養(yǎng)的細(xì)菌生長(zhǎng)速度快。,溶解氧,營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),4.莠去津是一種含氮農(nóng)藥,在土壤中不易降解,為修復(fù)被其污染的土壤,可按下面程序選育能降解莠去津的細(xì)菌(目
13、的菌)。請(qǐng)據(jù)圖回答(已知莠去津在水中溶解度低,含過(guò)量莠去津的固體培養(yǎng)基不透明):,(1)由圖推斷,從A瓶到C瓶液體培養(yǎng)的過(guò)程稱為_(kāi)_______,目的是____________________________________________。解析 圖中從A瓶到C瓶液體培養(yǎng)過(guò)程為選擇培養(yǎng),目的是初步選擇能降解莠去津的細(xì)菌(目的菌)并增加其數(shù)量。,選擇培養(yǎng),初步選擇能降解莠去津的細(xì)菌(目的菌)并增加其數(shù)量,(2)在將C瓶菌種接種到固體培養(yǎng)
14、基之前通常要進(jìn)行________,將菌種接種到固體培養(yǎng)基的方法有平板劃線法和_____________法,從圖中看本實(shí)驗(yàn)采用的是_____ (填“前者”或“后者”)。解析 將菌種接種到固體培養(yǎng)基的方法有平板劃線法和稀釋涂布平板法兩種,由圖中固體培養(yǎng)基上的菌落分布比較均勻可知,該接種方法是稀釋涂布平板法,包括梯度稀釋操作和涂布平板操作。,梯度稀釋,稀釋涂布平板,后者,(3)一段時(shí)間后,培養(yǎng)基出現(xiàn)無(wú)透明圈和有透明圈兩種菌落,我們篩選的
15、目的菌是________菌落中的細(xì)菌,該菌落生長(zhǎng)所需的氮元素主要來(lái)源于_______。解析 根據(jù)題目信息“莠去津在水中溶解度低,含過(guò)量莠去津的固體培養(yǎng)基不透明”可知,能夠降解莠去津的目的菌可分解莠去津,使菌落周圍出現(xiàn)透明圈,因此選擇菌落周圍存在透明圈的細(xì)菌。由于培養(yǎng)基中只有莠去津一種氮源,因此分解莠去津的微生物所需的氮源主要由莠去津提供。,有透明圈,莠去津,(4)為弄清固體培養(yǎng)基中的非目的菌來(lái)自C瓶菌種還是培養(yǎng)基,應(yīng)如何設(shè)置對(duì)照
16、組?_________________________________________________________。解析 為弄清固體培養(yǎng)基中的非目的菌來(lái)自C瓶菌種還是培養(yǎng)基,應(yīng)設(shè)置滅菌后不接種菌種的空白培養(yǎng)基,與實(shí)驗(yàn)組放在相同條件下培養(yǎng),若培養(yǎng)基上無(wú)菌落出現(xiàn),則非目的菌一定來(lái)自C瓶菌種,若培養(yǎng)基上出現(xiàn)菌落,則說(shuō)明非目的菌可能來(lái)自培養(yǎng)基。,配制的培養(yǎng)基滅菌后不接種 菌種,與實(shí)驗(yàn)組放在相同條件下培養(yǎng),,易錯(cuò)警示,,細(xì)菌
17、培養(yǎng)和計(jì)數(shù)方法的易失分點(diǎn),(1)稀釋涂布平板法:分離細(xì)菌,也能計(jì)數(shù)(結(jié)果偏小)。(2)平板劃線法:只能純化細(xì)菌,不能計(jì)數(shù)。(3)顯微計(jì)數(shù)法:不能區(qū)分細(xì)菌死活(結(jié)果偏大)。,5.傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)的相關(guān)判斷(1)醋酸菌在無(wú)氧條件下利用乙醇產(chǎn)生醋酸(2014·廣東,4A)( )(2)酵母菌在無(wú)氧條件下利用葡萄汁產(chǎn)生酒精(2014·廣東,4B)( )(3)泡菜腌制利用了乳酸菌的乳酸發(fā)酵(2014·廣東,4
18、C)( ),題組二 聚焦傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)的應(yīng)用,,×,√,√,(4)腐乳制作利用了毛霉等微生物的蛋白酶和脂肪酶(2014·廣東,4D)( )(5)某研究性學(xué)習(xí)小組以櫻桃番茄為材料進(jìn)行果酒、果醋發(fā)酵實(shí)驗(yàn)。先供氧進(jìn)行果醋發(fā)酵,然后隔絕空氣進(jìn)行果酒發(fā)酵(2012·江蘇,14B改編)( )(6)在制作果醋時(shí),如果條件適宜,醋酸菌可將葡萄汁中的糖分解成醋酸(2012·江蘇,21B改編)( )(7)
19、在制作腐乳時(shí),將長(zhǎng)滿毛霉的豆腐裝瓶腌制時(shí),底層和近瓶口處需加大用鹽量(2012·江蘇,21D改編)( )(8)在家庭中用鮮葡萄制作果酒時(shí),讓發(fā)酵裝置接受光照并放在 45 ℃處(2010·北京,1AD改編)( ),√,×,√,×,×,6.(2015·江蘇,17)關(guān)于“腐乳的制作”實(shí)驗(yàn),下列敘述錯(cuò)誤的是( )A.將腐乳坯堆積起來(lái)會(huì)導(dǎo)致堆內(nèi)溫度升高,影響毛霉生長(zhǎng)B.腐乳坯
20、若被細(xì)菌污染,則腐乳坯表面會(huì)出現(xiàn)黏性物C.勤向腐乳坯表面噴水,有利于毛霉菌絲的生長(zhǎng)D.裝壇階段加入料酒,可有效防止雜菌污染解析 A項(xiàng)對(duì),將腐乳坯堆積起來(lái)會(huì)導(dǎo)致微生物大量繁殖,堆內(nèi)溫度升高,影響毛霉生長(zhǎng);,B項(xiàng)對(duì),正常情況下,毛霉等菌種會(huì)使豆腐表面長(zhǎng)出一層菌絲,被細(xì)菌污染,腐乳坯表面會(huì)出現(xiàn)黏性物;C項(xiàng)錯(cuò),適于做腐乳的豆腐含水量為70%左右,適于毛霉菌絲生長(zhǎng),再加水不利于腐乳成型;D項(xiàng)對(duì),加入料酒,可抑制雜菌生長(zhǎng)。答案 C,7.
21、圖1是果酒和果醋制作的實(shí)驗(yàn)流程,圖2是某同學(xué)設(shè)計(jì)的果酒和果醋的發(fā)酵裝置。根據(jù)圖示回答下列問(wèn)題:,(1)完成圖1中的實(shí)驗(yàn)流程。解析 酒精發(fā)酵后可進(jìn)行醋酸發(fā)酵。答案 醋酸發(fā)酵,(2)沖洗的主要目的是_________,沖洗應(yīng)特別注意不能__________,以防止菌種的流失。解析 沖洗的主要目的是洗去浮塵,不能反復(fù)沖洗,以防止菌種流失。(3)圖2裝置中的充氣口在_______時(shí)關(guān)閉,在________時(shí)連接充氣泵,并連續(xù)不斷地向
22、內(nèi)____________。,洗去浮塵,反復(fù)沖洗,解析 酵母菌是兼性厭氧型微生物,有氧時(shí):C6H12O6+6O2→6CO2+6H2O;缺氧時(shí):C6H12O6→2C2H5OH+2CO2,因此在制作果酒時(shí),應(yīng)在缺氧的環(huán)境中進(jìn)行。醋酸菌是好氧細(xì)菌,能夠利用糖在有氧時(shí)生成醋酸,即C6H12O6+2O2→2CH3COOH+2CO2+2H2O;在糖源不足時(shí),將乙醇變?yōu)橐胰?,再將乙醛變?yōu)榇姿幔磻?yīng)簡(jiǎn)式為C2H5OH+O2→CH3COOH+H2O。
23、答案 果酒發(fā)酵 醋酸發(fā)酵 泵入無(wú)菌空氣(氧氣),(4)排氣口在果酒發(fā)酵時(shí)排出的氣體是________產(chǎn)生的____,在果醋發(fā)酵時(shí)排出的是______________________。解析 在果酒制作過(guò)程中排氣口排出的是CO2,而在果醋制作過(guò)程中因醋酸菌是好氧細(xì)菌,需要連續(xù)泵入空氣,因此排氣口排出的既有CO2,又有含氧量較低的空氣。,酵母菌,CO2,(含氧量少的)空氣和CO2,(5)寫(xiě)出與(4)題有關(guān)的反應(yīng)方程式:_____
24、_____________________________________________________。(6)若果汁中含有醋酸菌,在果酒發(fā)酵旺盛時(shí),醋酸菌能否將果汁中的糖發(fā)酵為醋酸?并說(shuō)明原因。________________________________________________________________________________。解析 醋酸菌發(fā)酵的條件是氧氣充足,在果酒發(fā)酵旺盛時(shí)的缺氧環(huán)境下能抑
25、制醋酸菌生長(zhǎng),所以醋酸菌不能將果汁中的糖類發(fā)酵為醋酸。,C6H12O6―→2C2H5OH+2CO2、C2H5OH+O2 ―→ CH3COOH+H2O,不能。因?yàn)楣瓢l(fā)酵時(shí)的缺氧環(huán)境能抑制醋酸菌的生長(zhǎng),且醋酸菌的發(fā)酵條件是氧氣充足,(7)在酒精發(fā)酵時(shí)瓶?jī)?nèi)溫度一般應(yīng)控制在_________。醋酸發(fā)酵時(shí)溫度一般應(yīng)控制在__________。解析 醋酸菌和酵母菌正常生長(zhǎng)都需要一定的溫度,在適宜溫度時(shí)可得到較多代謝產(chǎn)物。(8)果酒制作完成
26、后,可以用_________來(lái)檢測(cè)酒精的生成,在酸性條件下,酒精與之反應(yīng)呈現(xiàn)_____色。解析 在酸性條件下,酒精與重鉻酸鉀發(fā)生顏色反應(yīng)呈現(xiàn)灰綠色。,18~25 ℃,30~35 ℃,重鉻酸鉀,灰綠,8.(2015·廣東,29)泡菜是我國(guó)的傳統(tǒng)食品之一,但制作過(guò)程中產(chǎn)生的亞硝酸鹽對(duì)人體健康有潛在危害,某興趣小組準(zhǔn)備參加“科技創(chuàng)新大賽”,查閱資料得到下圖。,(1)制作泡菜時(shí),泡菜壇一般用水密封,目的是__________
27、_____________。乳酸菌發(fā)酵第一階段的產(chǎn)物有_______________________。解析 用水密封是為了隔絕空氣,因?yàn)槿樗峋菂捬跣臀⑸?;乳酸菌無(wú)氧呼吸第一階段產(chǎn)生丙酮酸和[H]。,隔絕空氣,,制造無(wú)氧環(huán)境,丙酮酸和,[H](少量ATP),(2)據(jù)上圖,與第3天相比,第8天后的泡菜更適于食用,因?yàn)楹笳達(dá)______________;pH呈下降趨勢(shì),原因是__________________________。解
28、析 8天后亞硝酸鹽含量更低,有利于人們的健康,而且泡菜的口感更好。pH呈下降趨勢(shì),是因?yàn)槿樗峋鸁o(wú)氧呼吸積累了大量乳酸。,亞硝酸鹽含量低,乳酸菌,無(wú)氧呼吸產(chǎn)生了乳酸,(3)該小組得到一株“優(yōu)選”乳酸菌(亞硝酸鹽還原酶活力比普通乳酸菌高5倍),擬參照資料的實(shí)驗(yàn)方案和食鹽濃度(4%~10%),探究與普通乳酸菌相比用“優(yōu)選”乳酸菌制作泡菜過(guò)程中亞硝酸鹽含量的高低,并確定其最適條件。請(qǐng)你設(shè)計(jì)一個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果記錄表,并推測(cè)實(shí)驗(yàn)結(jié)論。解析 設(shè)
29、計(jì)的記錄表中要包含乳酸菌類型、食鹽濃度和發(fā)酵時(shí)間等自變量,因變量為亞硝酸鹽的含量。通過(guò)相互對(duì)照確定用“優(yōu)選”乳酸菌制作泡菜過(guò)程中亞硝酸鹽含量的高低,并確定最適發(fā)酵條件。,答案 實(shí)驗(yàn)結(jié)果記錄表如下,推測(cè)實(shí)驗(yàn)結(jié)論:與普通乳酸菌相比,“優(yōu)選”乳酸菌制作泡菜時(shí),相同條件下產(chǎn)生的亞硝酸鹽含量低。,,易錯(cuò)警示,,果酒、果醋、腐乳及泡菜制作過(guò)程中的注意事項(xiàng),(1)果酒和果醋的制作要注意溫度、氣體和發(fā)酵時(shí)間的控制。(2)腐乳制作中鹽、酒和各種香辛料
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