腫瘤免疫治療思考和對策

1、蘇州大學(xué) 張學(xué)光,腫瘤免疫治療：思考和對策,腫瘤免疫治療,主要通過相關(guān)的技術(shù)方法增強腫瘤抗原的免疫原性，進而誘導(dǎo)機體產(chǎn)生腫瘤特異性的細胞免疫應(yīng)答來消除腫瘤。腫瘤相關(guān)及特異性抗原的存在是腫瘤免疫治療的基礎(chǔ)，但因受到腫瘤細胞本身及外在多種因素的影響，怎樣誘導(dǎo)有效的腫瘤免疫應(yīng)答，是一個令人困擾的問題。,1.非特異性主動免疫療法 非特異性刺激因子 細胞因子2.特異性主動免疫療法 腫瘤疫苗： 包括處理的瘤細胞

2、、腫瘤抗原肽和人工 合成肽抗原作為疫苗、癌基因產(chǎn)物。 腫瘤抗原特異性DC疫苗,腫瘤的主動免疫治療,1、過繼性細胞免疫治療 LAK、TIL、CTL2、腫瘤的抗體導(dǎo)向治療 抗體偶聯(lián)物 雙特異性抗體3、特異性免疫治療 分子疫苗 腫瘤抗原特異性CTL細胞治療,腫瘤的被動免疫治療,影響宿主腫瘤免疫的因素,腫瘤細胞低表達MHC分子腫瘤細胞缺乏共刺激分子腫瘤抗原是沉默抗原或為低免疫原性腫瘤抗原

3、特異性CD4+T細胞克隆丟失腫瘤細胞產(chǎn)生大量抑制因子腫瘤細胞增殖超過免疫細胞對其殺傷能力,,,,,,,,第一信號,MHCⅠ,MHCⅡ,TCR,CD4+T,共刺激分子CD28,共刺激分子B7,腫瘤抗原,第二信號,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,第一信號,MHCⅠ,TCR,CD4+T,共刺激分子CD28,共刺激分子（沉默型/低免疫原）B7,腫瘤抗原,第二信號,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,MHCⅡ,

4、,,,,,激發(fā)有效T細胞介導(dǎo)的抗腫瘤反應(yīng)的物質(zhì)基礎(chǔ),腫瘤抗原多肽必需經(jīng)過抗原遞呈細胞（APC）加工處理后，形成MHC分子復(fù)合物，才能被TCR識別，產(chǎn)生抗原特異性激發(fā)信號；還需依賴于APC表達的共刺激分子與T細胞上表達的相應(yīng)分子結(jié)合后產(chǎn)生的共刺激信號。,一、樹突狀細胞在腫瘤免疫中的應(yīng)用,,樹突狀細胞（DC）是機體內(nèi)最重要的一群抗原提呈細胞，是機體免疫應(yīng)答的有力啟動者，以DC為物質(zhì)基礎(chǔ)的免疫療法是近年來新發(fā)展起來的一種新的生物治療手段。

5、,DC激發(fā)腫瘤特異性免疫應(yīng)答的三個環(huán)節(jié),1. 腫瘤特異性抗原的遞呈；2. 腫瘤特異性CTL細胞和非特異性殺傷細胞的活化；3. 效應(yīng)細胞向腫瘤部位的遷移和清除腫瘤的限制因素的識別。主要目的是誘導(dǎo)患者機體產(chǎn)生腫瘤特異性的、持久的免疫應(yīng)答。,主要治療策略,（1）直接輸注DCs，以激發(fā)機體免疫功能的主動免疫；（2）以經(jīng)自體DCs體外擴增、激活的T淋巴細胞（CTL）為物質(zhì)基礎(chǔ)的過繼免疫療法，使腫瘤患者產(chǎn)生有效、持久的抗腫瘤免疫效應(yīng)。,3.

6、DC體外擴增的方法,DC 在組織中含量甚微，細胞表面缺乏特征性的標志，不易與其它細胞分離。細胞來源的困難一度限制了對DC生物學(xué)特性等方面的深入研究。 在應(yīng)用中發(fā)現(xiàn)治療時使用的DC可能并不完全成熟，相當一部分回輸?shù)腄C是非功能性的幼稚DC，從而大大降低了治療效果；而如果僅僅應(yīng)用未成熟的DC往往只能導(dǎo)致機體的免疫耐受。 國內(nèi)外許多實驗室都致力于研究通過體外培養(yǎng)獲得大量高純度功能性成熟DC的方法,,,目前用于臨床和實

7、驗研究的DC 大多是通過體外分離DC的前體細胞，在含有有關(guān)細胞因子的培養(yǎng)體系中誘導(dǎo)獲得。骨髓、臍血、外周血CD34+細胞或外周血單個核細胞均可作為體外培養(yǎng)DC的來源。適當?shù)募毎蜃优湮楹蛻?yīng)用順序?qū)C的培養(yǎng)具有重要作用。,腫瘤抗原特異性DCs的制備,細胞性腫瘤抗原體外沖擊DC：包括采用滅活的腫瘤細胞或凋亡的腫瘤細胞負載DC; 合成的腫瘤細胞抗原或抗原肽體外沖擊DC;腫瘤抗原提取物負載DC：目前常用的提取物包括腫瘤細胞碎片、酸性洗

8、脫肽及mRNA抽提物; 基因修飾的DC：包括腫瘤抗原編碼的基因及某些細胞因子（GM-CSF、IL-7、IL-12等）通過病毒導(dǎo)入DC。,二、細胞毒性T細胞在腫瘤免疫中的運用,,CTL抗凋亡能力測定 FLIP、Bcl-2、Bax51Cr釋放試驗 對相應(yīng)腫瘤細胞的殺傷作用 對自體PBMC的殺傷作用T細胞趨化實驗,A．病人選擇,①  已經(jīng)病理組織學(xué)確診為非小細胞

9、肺癌②  已失去手術(shù)機會或不愿接受手術(shù)治療③  住院病人④  臨床分期（TNM）：Ⅲ期及Ⅲ期以上 ⑤  年齡≤65歲⑥  預(yù)計生存期≥1.0年⑦  生存質(zhì)量評分≥60分⑧  心、肝、腎等臟器功能基本正常⑨  知情同意的志愿受試者,B．腫瘤治療,a）將病人隨機分為A、B、C三組，A組：對照組，行常規(guī)的正規(guī)放療或化療；B組：試驗組，正規(guī)化療

10、+腫瘤抗原特異性自體T細胞過繼免疫治療；C組：試驗組，正規(guī)放療+腫瘤抗原特異性自體T細胞過繼免疫治療；b) 腫瘤抗原特異性CTL輸注程序：在減瘤治療后，分3次回輸體外擴增的自體T淋巴細胞（1×109/次），即在最大程度降低機體的腫瘤負荷后，重建患者的細胞免疫功能。,C．療效評價,a)    二個療程后，按WHO的判定標準，評定療效l     

11、  CR（完全緩解）l       PR（部分緩解）l       MR（穩(wěn)定）l       NC或PD（無變化或進展）b)    生存質(zhì)量評分（Karnofsky的標準）根據(jù)腫瘤患者治療前后的精神、睡眠、食

12、欲、疲乏、疼痛、家庭理解與配合、同事的理解與配合、自身對癌癥的認識、對治療的態(tài)度、行為狀態(tài)、日?；顒忧闆r、面部的表情等進行等級綜合評分。 c） 臨床癥狀體征改變的分析。 d） 生存期、中位生存期的分析。e） 免疫功能狀況的分析① 采用免疫熒光標記法分析患者治療前后的T細胞及其亞群功能變化（CD3、CD4、CD8、CD25、CD28、CD4+/CD28+、CD8+/CD28+、CD4+-IFN-γ+、CD8+-IF

13、N-γ+、 CD4+-IL-10+、CD8+-IL-10+、CD56、CD40L、CD95L） ② 采用ELISA法分析患者治療前后的血清細胞因子水平變化（IL-2、sIL-2R、IL-10、IL-12、IFN-γ）③ 患者治療前后自體T淋巴細胞對相應(yīng)腫瘤細胞的殺傷效應(yīng)測定（51Cr釋放試驗）④ 肽-MHC四聚體的測定,三、免疫分子的分析及臨床意義,Dual Parameter Histograms,,,,,,,,,,,,,,,,

14、,,,,,,,,,,1,FSC Size,SSC granularity,,3,2,,Lymphs,Monos,Grans,,,25,抗體的基本結(jié)構(gòu)是一個Y型的多肽鏈，由兩條完全相同的重鏈和輕鏈組成。,抗體（Antibody,Ab）是血液和組織液中的一類糖蛋白，以γ球蛋白的形式存在血清中，也是B淋巴細胞識別抗原后增殖分化為漿細胞所產(chǎn)生的體液免疫應(yīng)答效應(yīng)分子，也被稱之免疫球蛋白（Immunoglobulin,Ig）。,雜交瘤技術(shù)的創(chuàng)立