實驗動物微生物學和寄生蟲學質(zhì)量控制

1、第五講 實驗動物微生物學和寄生蟲學質(zhì)量控制,學 習 內(nèi) 容,實驗動物微生物學、寄生蟲學質(zhì)量控制分類實驗動物的微生物學、寄生蟲學質(zhì)量監(jiān)測實驗動物主要疫病及人獸共患傳染病實驗動物防疫,第一節(jié) 按微生物和寄生蟲學質(zhì)量控制分類,以上根據(jù)國標GB14922.1-2001,GB14922.2-2001 大鼠和小鼠無普通級，犬和猴無清潔級及無菌級。,實驗動物質(zhì)量保障體系,第二節(jié) 實驗動物的微生物學、寄生蟲學質(zhì)量監(jiān)測,(一)實驗動物的微生

2、物、寄生蟲感染的危害1、影響實驗結(jié)果。如仙臺病毒感染引起小鼠肺鱗狀化病變；小鼠肝炎病毒感染引起血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶升高。2、影響動物生產(chǎn)。如鼠痘、兔出血熱病毒、犬細小病毒性腸炎的感染導致動物的大批死亡。3、威脅人類健康。如漢坦病毒、鉤端螺旋體感染人致病或致死。4、污染實驗材料。如用于疫苗生產(chǎn)的原材料SPF雞胚污染病毒，接種疫苗導致病原的擴散。5、寄生蟲對實驗動物的影響。 1）掠奪宿主的營養(yǎng)； 2）體外寄生蟲對動物的騷

3、擾； 3）對宿主機體產(chǎn)生機械性損傷; 4）對宿主產(chǎn)生毒性作用； 5) 對宿主生理、生化和免疫系統(tǒng)產(chǎn)生影響。（二）監(jiān)測意義1、保證實驗研究的順利進行和工作人員的身體健康。2、確保實驗數(shù)據(jù)的準確性和可重復性。,（三）監(jiān)測方法實驗動物的微生物、寄生蟲檢測具體操作方法詳見《國家標準實驗動物微生物學檢測方法》（GB/T 14926.1-14926.64）和《國家標準實驗動物寄生蟲學的檢測方法》(GB/T 18448.1～18448.

4、10 )。檢測方法歸納起來有病原學檢測和血清學檢測。細菌、真菌和寄生蟲以病原學檢測為主，血清學檢測為輔；但有些病原體也逐漸使用血清學方法檢測，如支原體、泰澤氏病原體、弓形體等。病毒的常規(guī)定期檢測以血清學為主，而疾病診斷則以病原學檢測為主。包括監(jiān)測項目的選定、采樣數(shù)量、檢測頻率、采樣方法、病毒、細菌、寄生蟲和真菌檢測方法。 1、監(jiān)測項目 我國經(jīng)過十多年來對各地實驗動物感染病原微生物、寄生蟲情況的調(diào)查，結(jié)合其他國家

5、的規(guī)定和經(jīng)驗，制定了我國嚙齒類、兔、犬、猴和雞的微生物學以及寄生蟲學等級標準。目前有關實驗動物的標準有28個。頒布年代主要在2001年，最近對標準又進行了部分修訂。,GB14925 實驗動物環(huán)境與設施 GB14923 實驗動物哺乳類實驗動物的遺傳質(zhì)量控制  GB14922.1 實驗動物寄生蟲學等級及

6、檢測 GB14922.2 實驗動物微生物學等級及檢測 GB14924.1 實驗動物配合飼料通用質(zhì)量標準  GB14924.2 實驗動物配合飼料衛(wèi)生標準 GB14924.3 實驗動物小鼠、大鼠配合飼料 GB14924.4

7、 實驗動物兔配合飼料 GB14924.5 實驗動物豚鼠配合飼料 GB14924.7 實驗動物犬配合飼料 GB14924.8 實驗動物猴配合飼料 GB14924.6 實驗動物地鼠配合飼料 GB/T 14927.1 實

8、驗動物近交系小鼠、大鼠生化標記檢測方法GB/T 14927.2 實驗動物近交系小鼠、大鼠皮膚移植法GB/T 14926.42～14926.43 實驗動物微生物學檢測方法（1）GB/T 14926.1～14926.6 實驗動物微生物學檢測方法（2）GB/T 14926.8～14926.17 GB/T 14926.4

9、1 GB/T 14926.44～14926.49GB/T 14926.50～14926.55 實驗動物微生物學檢測方法（3）GB/T 14926.18～14926.32 實驗動物檢測方法（4）GB/T 14926.56～14926.64 GB/T 18448.1～18448.10 實驗動物寄生蟲學檢測方法 GB/T 14924.9

10、 實驗動物配合飼料常規(guī)營養(yǎng)成分的測定 GB/T 14924.10 實驗動物配合飼料氨基酸的測定 GB/T 14924.12 實驗動物配合飼料礦物質(zhì)和微量元素的測定 GB/T 14924.11 實驗動物配合飼料維生素的測定GB/T 17998 SPF雞微生物學監(jiān)測總則,標準要求檢

11、測的項目分為必須檢測項目和必要時檢測項目。必須檢測項目：是指在進行實驗動物質(zhì)量評價時必須檢測的項目。必要時檢測項目：是指從國外引進實驗動物時；懷疑有本病流行時；申請實驗動物生產(chǎn)許可證和實驗動物質(zhì)量合格證時必須檢測的項目。我國的實驗動物微生物和寄生蟲檢測標準是我國實驗動物質(zhì)量要求的最低標準，各個地區(qū)和生產(chǎn)企業(yè)還可以根據(jù)當?shù)丶膊〉牧餍星闆r，或者提高企業(yè)產(chǎn)品制定相關標準，但要求不能低于國家標準要求。與國外標準相比較，我國的標準要求還是

12、偏高， 主要表現(xiàn)在條件致病菌檢測方面。,SPF級動物監(jiān)測項目,我國實驗動物質(zhì)量要求的最低標準，其它行業(yè)、地方標準不能低于國家標準要求。,2、采樣數(shù)量我國國家標準規(guī)定：選擇成年動物用于檢測。取樣數(shù)量：每個小鼠、大鼠、地鼠、豚鼠和兔生產(chǎn)繁殖單元；以及每個犬、猴生產(chǎn)繁殖群體，根據(jù)動物多少，取樣數(shù)量見表。,3、檢測頻率普通級動物：每三個月至少檢測動物一次。清潔級動物：每三個月至少檢測動物一次。無特定病原體動物：每三個月至少檢測

13、動物一次。無菌動物：每年檢測動物一次。每2-4周檢查一次動物的生活環(huán)境標本和糞便標本。 一般來說，一旦病原體入侵動物群體引起感染，初期分離病原體較容易，隨后抗體的檢出率上升，2-3個月后可因某些個體抗體水平的降低以及新出生的非感染個體的增加等原因，抗體檢出率下降。,4、采樣方法可用隨機抽樣法或哨兵動物法。隨機抽樣法采樣時，宜在動物群中不同方位隨機采取成年動物，選擇至少4個不同的位置采集樣品（例如四角和中央）。哨兵動物

14、法將經(jīng)過檢測符合質(zhì)量要求的同種系實驗動物即哨兵動物放入群內(nèi)，不時調(diào)換位置，飼養(yǎng)一定時間后解剖檢查抗體或病原。采樣樣品從采樣點到檢測實驗室運輸途中應保證動物的安全和避免污染。一般來說，無論病原學或血清學檢測，檢測結(jié)果陽性者表示該群動物有該病原體感染的存在。但作為疾病病原體的確定，還需要進一步分析。如果檢測結(jié)果陰性，一般來說可作為無此病原體存在的依據(jù)。但檢測結(jié)果亦受多種因素的影響。如:取材數(shù)量、 感染率的高低、取材頻率、取材對象(動

15、物年齡、疾病的 早晚期等)、方法學的選擇(病原學或血清學檢測)、方法 學的敏感性等，均與檢測結(jié)果密切相關。,5、檢測方法-病毒檢測 包括血清學檢測和病原學檢測。（1） 血清學檢測：適用于各級各類實驗動物的經(jīng)常性檢測和疫情普查。常用的方法有:酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)、免疫熒光試驗(IFA)、免疫酶染色試驗(IEA)、血凝試驗(HA)、血凝抑制試驗(HI)、病毒中和試驗、補體結(jié)合試驗、瓊脂擴散實驗等。（2） 病

16、原學檢測：適用于動物群中有疾病流行，需要檢出病毒或確認病毒存在的情況。檢測方法有:病毒分離與鑒定，病毒顆粒、抗原或核酸的檢出，潛在病毒的激活，抗體產(chǎn)生試驗等。例如:采用免疫組化的方法在光鏡下檢查病變組織中的特異性抗原；采用 HA方法檢查患病動物排泄物或組織懸液中的血凝素抗原;采用電鏡技術(shù)或免疫電鏡技術(shù)檢查組織或排泄物中的病毒顆粒;采用聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)檢查病毒的蛋白質(zhì);采用 核酸分子雜交技術(shù)或聚合酶鏈反應(PCR)檢出

17、組織或排泄物中的病 毒核酸。,檢測方法-細菌檢測 最常用的方法是病原菌的分離與培養(yǎng)或進行動物接種。部分病原菌，如:布氏桿菌、支原體等，可采取血清學方法。對于泰澤氏病原體，由于不能在人工培養(yǎng)基上生長，因此宜采用血清學檢測方法，動物誘導實驗進行組織壓片、鏡檢的方法進行檢查，并結(jié)合病理檢查結(jié)果最后做出診斷。檢測方法-真菌檢測 目前主要采用沙氏培養(yǎng)基分離培養(yǎng)。皮膚真菌通常在25℃培養(yǎng)，深部真菌通常在

18、37℃培養(yǎng)。不同的真菌具有一定的菌落特點，結(jié)合鏡下染色檢查可進行種屬鑒定，有時，還需借助于生化反應結(jié)果和免疫學方法進行最后診斷。檢測方法-寄生蟲檢測（1）體外寄生蟲：如肉眼觀察法、透明膠紙粘取法、拔毛取樣法、皮屑刮取法、黑背景檢查法、解剖鏡下通體檢查法等，主要適用于檢查蚤、虱、螨等節(jié)肢動物。（2）體內(nèi)寄生蟲：主要檢查蠕蟲和原蟲，可用直接涂片法(糞便、血液、臟器、腸內(nèi)容物)、飽和鹽水漂浮法或沉淀法、透明膠紙肛門周圍粘取法、 組織

19、或器官剖面壓印法、病變組織切片或壓片法、尿液的離心法 (如檢查鼠膀胱線蟲)等。,我省近5年實驗動物微生物、寄生蟲感染狀況,國外小鼠病毒感染情況,國外小鼠細菌感染情況,國外小鼠的寄生蟲感染情況,國外大鼠病毒感染情況,國外大鼠細菌感染情況,國外大鼠的寄生蟲感染情況,實驗動物常見的寄生蟲,線蟲 螨,螨

20、 蜱,,,第三節(jié) 實驗動物主要疫病和人畜共患傳染病,流行性出血熱 淋巴細胞性脈絡叢腦膜炎 猴B病毒病和免疫缺陷病 狂犬病（同上節(jié)，省略） 弓形體 鉤端螺旋體病 結(jié)核分支桿菌病,重要的人獸共患病,,動物烈性傳染病,鼠痘 小鼠肝炎病毒 仙臺病毒 兔出血熱,,流行性出血熱,流行性出血熱（Epidemic Hemorrhagic Fever，EHF）是由流行性出血熱病毒（

21、EHFV）引起的以發(fā)熱、出血和腎臟損害為主要臨床表現(xiàn)的烈性傳染病。1981年，WHO統(tǒng)一命名為腎綜合征出血熱（Hemorrhagic Fever With Renal Syndrome，HFRS）。病原 HFRS是由布尼亞病毒科，漢坦病毒屬的漢坦病毒引起。該病毒對脂溶劑敏感，乙醚、氯仿、丙酮、去氧膽酸鹽等均可滅活，PH5.0以下，60℃，1h可使其全部殺死，紫外線照射30分鐘也能滅活病毒。流行病學 HFRS屬自然疫源性疾病，嚙齒類動

22、物為主要宿主。人類感染主要是接觸帶毒動物以及排泄物，吸入型感染。實驗大鼠感染主要是與帶毒野鼠接觸，感染后長期向外排毒，從而危及人類健康。我國20世紀后期多次發(fā)生人類感染流行性出血熱病毒，特別是實驗人員感染較多，在多個省市均有發(fā)生。臨床癥狀及病理 人感染表現(xiàn)高熱、出血性腎臟損傷。實驗大鼠和野鼠感染不表現(xiàn)臨床癥狀，無病理變化。據(jù)報道，在乳小鼠、乳長爪沙鼠的動物模型中，能觀察到病變組織的廣泛充血、出血、滲出、壞死等，其中腎臟最為嚴重。潛伏期

23、14d。診斷 定期的血清學檢測。特異性抗體檢測，間接免疫熒光試驗是經(jīng)典檢測方法。其他血清學方法還包括免疫酶染色法、ELISA試驗、血凝抑制試驗和空斑減少試驗等。病原檢測也是腎綜合癥出血熱病毒常用的診斷方法，鼠肺冰凍切片免疫熒光檢測是經(jīng)典的病原檢測方法，近年來，熒光定量PCR技術(shù)也常用于大鼠腎綜合癥出血 熱病毒的檢測。預防與控制 防止野鼠進入設施；實驗大、小鼠群定期進行血清學檢測； 加強實驗室管理，防止飼料、墊料等被野鼠污

24、染。飼養(yǎng)人員和實驗人員應 加強防護措施，定期體檢。,淋巴細胞性脈絡叢腦膜炎,由淋巴細胞脈絡叢腦膜炎病毒（LCMV）引起的一種急性傳染病，也感染人。感染后目前還無法治療。主要侵害中樞神經(jīng)系統(tǒng)，呈現(xiàn)腦脊髓炎癥狀。病原 LCMV屬砂粒病毒科、砂粒病毒屬。該病毒對乙醚和去污劑敏感，不耐熱，56℃20min即可滅活。0.1％甲醛、紫外線也可將其滅活。流行病學 小鼠、大鼠、豚鼠、倉鼠、人都易感。小鼠可持續(xù)帶毒，而且病毒可存在感染小鼠的所有

25、器官，包括唾液腺，因此，感染小鼠可經(jīng)唾液、鼻分泌物和尿液向外排毒，并且可通過子宮、乳汁傳給子代，據(jù)報道普通小鼠抗體陽性率為3%。臨床癥狀和病理變化 小鼠感染LCMV依年齡、感染途徑及其他因素的不同，可表現(xiàn)為腦型、內(nèi)臟型和遲發(fā)型三種類型。小鼠帶毒后可表現(xiàn)為無癥狀的帶毒者。人感染后可引起流感樣癥狀或腦膜炎。對實驗的干擾 抑制體液和細胞免疫應答（能在B、T淋巴細胞和巨噬細胞中大量復制）；在腫瘤學研究中，常引起移植腫瘤污染。診斷 （1）病

26、毒分離與鑒定：可將病鼠的腦、肝等臟器制成勻漿接種于易感成年小鼠腦內(nèi)，小鼠通常在接種后4～5天發(fā)病，病鼠震顫、痙攣，隨即死亡。取病死小鼠的腦組織制成冰凍切片，采用免疫熒光技術(shù)檢查腦細胞中的LCMV抗原。（2）血清學試驗：ELISA試驗等。預防與控制 首先防止野鼠進入動物房。發(fā)現(xiàn)小鼠已被感染，應將小鼠全部 淘汰，房舍徹底消毒后，重新引種，建立新種群。若為非常珍貴的品系，可 篩選無病毒血癥及抗體陰性的種鼠。LCMV可經(jīng)胎盤垂直傳

27、播，因此，通過剖 腹產(chǎn)凈化鼠群需要注意選擇不帶LCMV的母鼠方能有效。,猴皰疹病毒1型感染（B病毒）,由猴B病毒又稱皰疹病毒引起的人和猴共患的一種傳染病。猴是B病毒的自然宿主，感染率可達10-60％。人類接觸性感染，主要表現(xiàn)腦脊髓炎癥狀，多數(shù)病人發(fā)生死亡。病原 猴B病毒又稱為猴皰疹病毒1型（Ceropithecine herpesvirus 1）。屬于皰疹病毒科，皰疹病毒亞科，單純皰疹病毒屬。在35種非人靈長類皰疹病毒中，只有B

28、病毒對人有致病性。B病毒對乙醚、脫氧膽酸鹽、氯仿等脂溶劑敏感，對熱敏感，56℃ 30min即可滅活。紫外線也可將其滅活。流行病學 B病毒可感染猴、兔、豚鼠、小鼠。野生猴B病毒抗體陽性率遠高于自繁猴。病毒主要經(jīng)性交、咬傷或帶毒唾液經(jīng)損傷的皮膚或粘膜直接傳播，也可以通過污染物間接傳播。B病毒可由感染處經(jīng)外周神經(jīng)傳到中樞神經(jīng)系統(tǒng)，形成潛伏感染。病毒還可長期潛伏于上呼吸道或泌尿生殖器官附近神經(jīng)節(jié)及組織器官，可經(jīng)唾液、尿液、精液間歇性排毒。隨著

29、年齡增長，B病毒的感染率增加。臨床癥狀和病理變化 猴感染B病毒后，初期在舌表面和口腔粘膜與皮膚交界的唇緣有皰疹，最后形成潰瘍表面，有纖維素性壞死痂皮，7-14天自愈。人感染該病毒后癥狀非常嚴重，主要呈上行性脊髓炎或腦脊髓炎。診斷 血清抗體的檢測方法是主要的診斷方法，多用ELISA、免疫熒光檢測方法。由于猴B病毒對人的危害性較大，病原分離的診斷方法一般不提倡。近年來病毒核酸檢測方法應用于猴B病毒感染的病原檢測，可以檢測到低于10個拷貝

30、的病毒DNA。預防與控制 定期檢疫，淘汰陽性猴，建立B病毒陰性的隔離區(qū)。與猴接觸的 管理人員或?qū)嶒炄藛T要重視自身防護工作，一旦抓傷要立即用肥皂水洗凈傷 口，再用碘酒消毒，并隔離觀察3周，出現(xiàn)臨床癥狀，及時對癥治療。,猴免疫缺陷病毒感染,由猴逆轉(zhuǎn)D型病毒（Simian retrovirus D, SRV）、猴免疫缺陷病毒（ Simian immunodeficiency virus, SIV）、猴T細胞趨向性病毒1型（Sim

31、ian T lymphotropic, STLV-1）、泡沫病毒（Simian foamy virus,SFV）引起的免疫缺陷病毒病。猴感染后主要表現(xiàn)為亞臨床攜帶，免疫抑制、腫瘤的形成。目前，泡沫病毒還未列入檢測。病原 猴SIV病毒屬于逆轉(zhuǎn)錄病毒科，慢病毒亞科。該病毒與人的HIV病毒的遺傳同源性較高，在AIDS疾病的病原調(diào)查中，推測HIV病毒可能是從猿類免疫缺陷病毒SIV進化而來的。猴SRV病毒屬于逆轉(zhuǎn)錄病毒科，腫瘤病毒亞科，D型腫

32、瘤病毒屬，具有多種血清型SRV/D1，2，3，4，5型。STLV-1病毒屬于逆轉(zhuǎn)錄病毒科，腫瘤病毒亞科，C型腫瘤病毒屬。該病毒與人的HTLV-1在生物學和基因?qū)W上具有很多相似的特性，它們有90-95%的核酸序列同系，在傳染的地理分布和地方性流行病的概況上，兩種病毒也有相關性，所以兩者的關聯(lián)性值得探討和研究。SFV病毒屬于逆轉(zhuǎn)錄病毒科，泡沫病毒亞科，泡沫病毒屬。SFV是有 囊膜的單股正鏈RNA病毒，在感染細胞培養(yǎng)中形成巨大、多核、

33、大量 空泡，類似“泡沫”而被命名。泡沫病毒有11個血清型，1-3、9、10可 從舊大陸猴和新大陸猴中獲得，4、6可從新大陸猴中獲得，11可從 猩猩中獲得。,流行病學 亞洲的獼猴自然感染SIV很少，但是將不同物種上分離的SIV病毒接種到獼猴上，能表現(xiàn)出AIDS的疾病特征。有報道在從事SIV感染恒河猴的模型研究的工作人員中，有3名工作人員意外接觸病毒感染。能從實驗人員體內(nèi)成功地檢測相應抗體，但不引起病癥。亞洲的獼猴屬是猴SR

34、V病毒的主要宿主，血清檢測顯示亞洲猴感染SRV的感染率比其它逆轉(zhuǎn)錄病毒要高?？尚纬傻胤叫愿腥荆膊“Y狀主要表現(xiàn)為亞臨床快速致死，免疫抑制，機會感染以及腫瘤形成，類似AIDS疾病。這種疾病癥狀正在逐漸轉(zhuǎn)向無癥狀感染，產(chǎn)生高抗體。猴可通過血、尿、唾液、奶、眼淚排出病毒，感染其它動物。STLV-1感染多種舊大陸靈長類，引起的病癥是T-細胞白血病或T-淋巴瘤，與人的T-細胞白血病的癥狀相似。猴感染STLV-1的年齡較大，自然感染的途徑是通過交

35、配和母子垂直傳播。目前還沒有人類感染的報道。SFV病毒具有較高的感染性，猴群感染率大于80%。 SFV病毒能感染淋巴組織和非淋巴組織，在口腔粘膜細胞、上皮細胞內(nèi)大量繁殖。通過唾液傳播到其它動物和人。動物的感染不通過性傳播途徑，咬傷或者被舔推測是被感染的主要途徑。對人的感染已有報道，感染人群主要是與非人靈長類密切接觸的人群，包括獸醫(yī)、動物飼養(yǎng)員、屠宰人員以及動物園管理人員。診斷 血清抗體檢測方法是常用的猴逆轉(zhuǎn)錄病毒感染的診斷方法，主要

36、包括 ELISA、免疫熒光、免疫印跡等檢測方法。目前熒光定量PCR的檢測方法也常 被用于逆轉(zhuǎn)錄病毒的病原診斷中。防治 目前無有效的治療手段，應做好猴群的檢疫隔離工作。,弓形體,由剛地弓形體引起的一種世界范圍內(nèi)分布的人獸共患原蟲病。弓形體的終末宿主是貓。人和大多數(shù)動物通常呈隱性感染。豬、犬、貓等可呈顯性感染，隔離飼養(yǎng)的實驗動物少見感染。病原弓形體在整個生活史中可出現(xiàn)5個形態(tài)階段：速殖子、包囊、裂殖體、配子體和卵囊。流行病

37、學 本病傳染源主要是患病動物和帶蟲動物，人類、實驗動物及其他畜禽對弓形體都有易感性。實驗動物中以小鼠、地鼠最敏感，豚鼠、兔也能人工感染。此病主要經(jīng)口、胎盤、皮膚、粘膜感染。秋冬季和早春易發(fā)。生活史弓形體的整個發(fā)育過程需兩個宿主，小鼠、大鼠、豚鼠、地鼠、犬和猴為中間宿主，貓為終末宿主。弓形蟲在終末宿主的腸上皮細胞內(nèi)完成有性生殖隨糞便排出卵囊，在體外完成孢子化過程成為侵襲性卵囊，中間宿主動物吞食侵襲性卵囊后，在其體內(nèi)進行無性生殖，主要經(jīng)消

38、化道感染。臨床癥狀和病理變化 不同動物受侵害的部位不同，表現(xiàn)出不同的癥狀。大、小鼠感染后無臨床癥狀，但組織切片上可見灶性腦炎，幼齡鼠可出現(xiàn)角弓反射，排便、排尿紊亂。豚鼠主要表現(xiàn)為肝、脾腫大，局灶性壞死。貓急性感染后癥狀是昏睡、厭食、發(fā)熱、呼吸困難、黃疸和淋巴結(jié)病。慢性病例出現(xiàn)昏迷、貧血、流產(chǎn)、呼吸困難、下痢和神經(jīng)紊亂。診斷 通過病變臟器涂片檢查蟲體，動物接種進行病原學診斷。也可采用 血清學診斷，如間接血凝試驗、間接熒光試驗、酶

39、聯(lián)免疫吸附試驗等方法。防治 防止實驗動物的飼料、飲水被貓糞污染；避免與野鼠接觸。,鉤端螺旋體病,鉤端螺旋體病（Leptospirosis）是一種人獸共患傳染病。其病原體是多種鉤端螺旋體，而最常見的是波摩那型鉤端螺旋體。病原 鉤端螺旋體個體非常纖細，長6～20μm，寬0.1～0.2μm，具有細密而規(guī)則的螺旋。流行病學 各種家畜和野生的哺乳動物以及人等均可感染，鼠類最易感。病畜和帶菌動物是傳染源，病原體在腎小管中生長繁殖，從尿液排出后

40、，污染周圍的水源、土壤，經(jīng)過損傷的皮膚、粘膜及消化道而感染。本病多發(fā)生于夏秋季節(jié)，以氣候溫暖、潮濕多雨、鼠類繁多的地區(qū)發(fā)病較多。實驗動物的感染通常是與帶菌野鼠接觸。臨床癥狀和病理變化 人感染鉤端螺旋體所致疾病的臨床癥狀主要為發(fā)熱、貧血、黃疸、出血、血紅蛋白尿以及粘膜和皮膚壞死。許多動物均可感染本菌，多發(fā)生于幼齡動物，且大多呈一過性臨床反應。診斷 病原檢查、血清學診斷包括炭粉凝集試驗、乳膠凝集試驗、酶聯(lián)免疫吸附試驗和微囊凝集試驗。防

41、治 首先杜絕傳染源。要消滅實驗動物場周圍的鼠類，減少接觸 鼠類和污染水的機會。其次，污染的場地及水源，可用漂白粉或2％ 氫氧化鈉液消毒。另外，在本病常發(fā)地區(qū)，應注射鉤端螺旋體多價菌 苗進行免疫。,結(jié)核病,結(jié)核病是由分支桿菌(Mycobacterum sp.)引起的人和動物共患的一種烈性傳染病。在實驗動物中猴、犬、豚鼠、兔和貓等均可感染，以猴發(fā)病率最高。病原 猴感染的分支桿菌主要有結(jié)核分支桿菌（Mycobacterium t

42、uberculosis）、牛型結(jié)核分支桿菌（M. bovis），以及非結(jié)核性分支桿菌（atypical mycobacteria），最常見的是結(jié)核分支桿菌。結(jié)核分支桿菌屬分支桿菌屬，是革蘭氏陰性桿菌，菌體細長帶有彎曲，兩端鈍圓，長1～4μm，寬0.3～0.6μm，單個或并行相聚排列，有時呈分支狀。無鞭毛、無芽胞，菌體內(nèi)有明顯的顆粒。流行病學 結(jié)核病人及結(jié)核病患畜為本病的傳染源，尤其開放性結(jié)核患者，能通過多種途徑向外界散播病原。獼猴可以

43、經(jīng)消化道及呼吸道感染。結(jié)核病患猴可通過痰液、糞、尿等排出大量結(jié)核桿菌，被這種排泄物污染的塵埃就成為主要的傳播媒介。臨床癥狀和病理變化 獼猴一旦感染結(jié)核病，很快發(fā)展成進行性疾病，很少像人一樣出現(xiàn)慢性抑制性癥狀。新大陸猴比舊大陸猴對結(jié)核病有抵抗。籠養(yǎng)猴一般看不到臨床癥狀，嚴重患病猴可見咳嗽、消瘦，呼吸困難，聽診有啰音，體溫升高不明顯，X線透視可見明顯的結(jié)核陰影，淋巴結(jié)腫大、脾腫大和肝腫大。有的皮膚產(chǎn)生結(jié)核性結(jié)節(jié)，有滲出物流出。結(jié)核分支桿菌

44、和牛型結(jié)核分支桿菌在感染猴的肺、淋巴結(jié)、脾、肝等器官都能形成彌散性的黃白色干酪樣病灶。診斷 主要通過結(jié)核菌素試驗，X線透視，紅細胞沉降率測定和細菌學檢驗、 病理診斷等。防治 對結(jié)核菌素檢測陽性的實驗動物立即捕殺淘汰，并對同群飼養(yǎng)動物 進行隔離檢疫；或?qū)嶒瀯游锝臃N卡介苗，一般無治療價值。,鼠痘,鼠痘是由鼠痘病毒（Mouse Pox Virus）感染實驗小鼠引起的一種烈性傳染病。本病多呈暴發(fā)性流行，致死率較高，危害極大。臨

45、床表現(xiàn)為全身或局部皮膚痘疹，四肢、尾和頭部腫脹、潰爛、壞死甚至腳趾脫落為特征，故又稱為傳染性脫腳病。病原 屬于痘病毒科，脊椎動物痘病毒亞科，正痘病毒屬。鼠痘病毒對干燥、低溫抵抗力較強，在潮濕環(huán)境下60℃10分鐘即可滅活。氧化劑、次氯酸鹽和氯化錳能滅活病毒。0.2%甲醛可破壞病毒的傳染性。流行病學 本病的傳染源主要是病鼠和隱性帶毒鼠，經(jīng)皮膚病灶和糞尿向外排毒，污染周圍環(huán)境。病毒可經(jīng)皮膚傷口侵入機體，也可經(jīng)呼吸道和消化道感染。被感染的動

46、物于10天左右皮膚損傷部位出現(xiàn)特征性病變?？祻托∈罂赏ㄟ^糞便長期排毒，成為主要傳染源。近年來，由于腫瘤的接種移植，可將鼠痘病毒直接接種給實驗小鼠。臨床癥狀和病理變化 臨床上分為三種病型。急性致死型：多見于初次發(fā)生此病的鼠群，常于4～12小時死亡 。病理變化可見肝壞死嚴重，脾、腸也可見到壞死灶。亞急性型～慢性經(jīng)過型：可見典型的缺腳畸形癥狀，病理變化可見脾臟腫大和淋巴結(jié)腫大，皮膚炎性水腫、壞死 。無癥狀耐過型：動物外觀健康無病變，但在小鼠

47、體內(nèi)有病毒增殖，成為帶毒動物。診斷 鼠痘可通過臨床癥狀、病理學變化、血清學檢驗、病毒分離或在組織中檢查病毒抗原等方法進行診斷。組織病理學診斷，確認特征性壞死病變，發(fā)現(xiàn) 嗜酸性包涵體及電鏡下見到痘病毒即可做出診斷。防治 對鼠痘沒有治療辦法。一旦鼠群被污染，容易發(fā)生持續(xù)性感染、隱性 感染，很難清除，所以將鼠群全部淘汰，污染的飼養(yǎng)室、器具及感染鼠接觸 過的實驗用具等均需用甲醛、次氯酸鈉等滅菌消毒或高壓滅菌消毒。,,對實驗

48、的干擾： 對與免疫有關實驗研究的影響，可嚴重影響體液和細胞介導的免疫應答；引起小鼠自發(fā)性自體免疫疾??；抑制吞噬細胞的吞噬能力； 對移植免疫的影響可加速同種異系，甚至同系小鼠間皮膚移植的排斥； 對致瘤作用研究的干擾，被感染后的組織易被誤診為浸潤性肺癌；能抑制某些化學藥致瘤作用。,小鼠肝炎病毒,由小鼠肝炎病毒（Mouse Hepatitis Virus，MHV）引起實驗小鼠的一種傳染性較高的疾病，臨床表現(xiàn)為肝炎、腦炎和腸炎。病原 小

49、鼠肝炎病毒屬冠狀病毒科、冠狀病毒屬。該毒株對酸穩(wěn)定，不同毒株對熱的穩(wěn)定性不同，其中低毒力毒株和對熱穩(wěn)定的毒株是實驗鼠群最嚴重的污染物。流行病學 MHV自然感染只發(fā)生于小鼠，通常呈隱性或亞臨床感染，但具高度傳染性。MHV的自然傳染是經(jīng)口和呼吸道途徑，感染的小鼠經(jīng)糞便、鼻咽滲出液、甚至尿液向環(huán)境中排出病毒，直接接觸感染小鼠或污染的糞便和墊料等是主要的傳播途徑 。不同品系的小鼠對MHV的易感性不同，BALB/c及ICR小鼠較易感。臨床癥狀

50、和病理特征 臨床上通常分急性型和神經(jīng)型。急性型，小鼠表現(xiàn)精神沉郁、食欲廢絕、被毛粗亂、營養(yǎng)不良、腹瀉、脫水和消瘦等癥狀。神經(jīng)型，發(fā)病鼠兩后肢松弛性麻痹，結(jié)膜炎，全身抽搐，轉(zhuǎn)圈運動，2～4天內(nèi)死亡。剖檢以肝臟病變?yōu)橹鳎闻K表面散在出血點和灰黃色壞死點，也可伴有黃疸，帶血的腹腔滲出液和腸道的出血。嗜神經(jīng)毒株感染時，可產(chǎn)生中樞神經(jīng)系統(tǒng)的病變，主要為脫髓鞘性腦脊髓炎。 診斷 根據(jù)臨床癥狀和病理變化可做出初步診斷。確診需進行病毒 分離鑒定

51、、電鏡檢查和血清學診斷，血清學診斷ELISA和IFA方法 為常用方法。預防 在未感染鼠群，應加強飼養(yǎng)管理和環(huán)境消毒，嚴禁病毒侵入， 所有引進的動物必須來自無MHV的鼠群，鼠群一旦感染，必須淘汰整個鼠群。,對實驗研究的干擾：1、引起小鼠致死性肝炎、腦炎和腸炎2、改變機體的各種免疫應答參數(shù)（產(chǎn)生高水平的IL-6、IFN-gamma和低水平的IL-2和IL-l0）。3、是許多酶系統(tǒng)發(fā)生改變，增高某些肝酶活性（異檸檬酸脫氫酶

52、，葡萄糖-6-磷酸脫氫酶和肝谷-草轉(zhuǎn)氨酶）而抑制另一些肝臟的酶（P-450, NADAH，肝氧化酶琥珀酸脫氫酶）。4、裸鼠感染可嚴重影響腫瘤免疫學的研究。,仙臺病毒,小鼠仙臺病毒（Mouse Sendai Virus）感染是最難控制的病毒感染之一，感染可分為兩種類型，急性型多見于斷乳小鼠，主要表現(xiàn)呼吸道癥狀；多數(shù)情況下呈隱性感染型，可對實驗研究產(chǎn)生嚴重干擾。病原 仙臺病毒屬副粘病毒科副粘病毒屬。病毒對乙醚及熱敏感，pH3條件下極易滅

53、活。流行病學 自然條件下仙臺病毒可感染小鼠、大鼠、倉鼠和豚鼠。在未感染過仙臺病毒的易感鼠群，新生乳鼠和未成年小鼠最為易感。不同品系小鼠對仙臺病毒的易感性不同（NIH、129/ReJ 、DBA等較易感）。主要的傳播和擴散方式是直接接觸感染和空氣傳播。臨床癥狀和病理變化 急性型：常不表現(xiàn)臨床癥狀，短時間內(nèi)自愈或轉(zhuǎn)變?yōu)榈胤叫粤餍?。慢性型：常呈地方性流行，病毒在鼠群中長期存在。大體解剖觀察：主要可見呼吸道和局部淋巴結(jié)病變。診斷 根據(jù)臨床癥

54、狀和病理變化可做出初步診斷，確診需進行雞胚尿囊腔培養(yǎng)病毒分離鑒定和血清學診斷。血清學診斷以ELISA和IFA實驗敏感性和特異性好。防治 在未感染鼠群，應加強飼養(yǎng)管理和環(huán)境消毒，嚴禁病毒侵入，所有引進的動物必須來自無仙臺病毒的鼠群。定期進行血清學檢測，及時發(fā)現(xiàn)感染鼠。一旦感染，淘汰感染鼠群。對實驗的感染作用 1、嚴重影響機體體液與細胞免疫應答2、影響干擾實驗性致瘤作用 3、影響胚胎的發(fā)育，對鼠類生殖繁育造成影響,兔出血癥,兔出血

55、癥（Rabbit Hemorrhagic Disease）是由兔出血癥病毒（RHDV）引起的兔的一種烈性傳染病，又稱“兔瘟”，主要特征是病兔突然死亡，臨死興奮，掙扎、抽搐、慘叫。病原 兔出血癥病毒屬細小病毒科，細小病毒屬。病毒對氯仿和乙醚不敏感，能耐酸，病毒對紫外線和干燥等不良環(huán)境的抵抗力較強。1%氫氧化鈉4小時、1%～2%甲醛、1%漂白粉3小時才被滅活。流行病學 本病只發(fā)生于兔，傳染源主要是病兔和帶毒兔，可通過直接接觸感染，也可通

56、過排泄物、分泌物等污染的飼料、飲水、用具、注射針頭、剪毛剪及人員來往等間接傳播。自然條件下，空氣傳播是主要的傳播方式，人工感染經(jīng)多途徑接種均可引起發(fā)病。臨床癥狀和病理變化 臨床分為三種病型。急性型：感染兔迅速死亡，無任何癥狀，有時鼻腔流出血樣液體。亞急性型：病兔食欲驟減，精神很差，體溫高達41℃以上，呼吸困難，鼻流出血性分泌物。慢性型：多見于3月齡小兔，病兔精神欠佳，病程較長，有最后衰弱而死，或耐過而恢復，成為帶毒者。剖檢可見各臟器廣

57、泛性充血和出血為本病的特征性病理變化（氣管、喉頭、肺、肝、腎、脾等）。診斷 根據(jù)流行特點，臨床癥狀和病理變化可做出初步診斷。 確診需進行病毒分離鑒定 。對于存活兔亦可檢查抗體。防治 健康兔可接種疫苗進行保護；發(fā)現(xiàn)病兔及時淘汰，定期進行免疫監(jiān)測。,小結(jié)：微生物感染對人,動物和實驗的影響直接影響：（1）引起人畜共患病，影響工作人員的身體健康。（2）引起動物傳染病，影響均衡生產(chǎn)，影響動物健康和質(zhì)量。（3）嚴重干擾實驗結(jié)果的可

58、靠性、準確性、重復性。（4）污染環(huán)境間接影響：（1）引用不正確的實驗結(jié)果可能會導致臨床的錯誤治療。（2）用不健康的動物材料制成生物制品可擴散疾病。（3）重復實驗可造成新的人力、物力、才力的浪費。 因此，要保證工作人員的身體健康，實驗結(jié)果的準確和一些實驗的特殊要求，必須對實驗動物進行微生物控制，這是不斷提高實驗水平的需要，也是實驗動物科學發(fā)展的必然趨勢。,第四節(jié) 實驗動物防疫,（一）實驗動物的防疫原則

59、要嚴格遵守國家頒布實施的實驗動物飼養(yǎng)管理條例、法規(guī)。工作中注意以下幾點：1．隔離飼養(yǎng)：不同種動物要分開飼養(yǎng)，嚴禁混養(yǎng)在一起。防止交叉感染。2．引進動物要嚴格檢疫：依據(jù)國家檢測標準進行，嚴格檢疫。要從具有質(zhì)量合格證的單位引進動物。3．堅持衛(wèi)生消毒制度：杜絕各種病原微生物的侵入和繁殖。要定期對動物房舍和飼養(yǎng)用具進行消毒。4．人員健康檢查：飼養(yǎng)管理人員要定期進行健康檢查，有人畜共患病者，應調(diào)離與動物接觸的工作崗位。5．動物質(zhì)量檢查：

60、保種單位、生產(chǎn)單位要對飼養(yǎng)的動物定期進行質(zhì)量檢查，發(fā)現(xiàn)問題及時更新種群。6．動物免疫制度：對國家標準要求必須實施預防接種的實驗動物 要定期進行免疫接種。7．隔離和無害化處理：嚴格防止野生動物進入實驗動物室，對 死亡動物進行無害化處理。,（二）實驗動物傳染病流行的基本環(huán)節(jié) 實驗動物飼養(yǎng)在人為控制的飼養(yǎng)環(huán)境設施中，較易防止傳染病的發(fā)生，但某些開放環(huán)境則要加強動物的衛(wèi)生防疫，以免發(fā)生人獸共患病和動物的傳染病，保證飼

61、養(yǎng)、實驗人員和動物的安全。實驗動物傳染病流行有三個基本環(huán)節(jié)。1.傳染源：主要是患病動物（潛伏期、發(fā)病期和恢復期動物）和攜帶病原體動物、野鼠等。實驗動物的分泌物及排泄物污染的設施、墊料、飼料、飲水、空氣、用具等都是病原體傳播媒介。2.傳播途徑：（1）直接傳染直接接觸傳染包括水平傳播、垂直傳播（2）間接傳播：通過媒介傳播。包括非生物性傳播如空氣飛沫、塵埃等。生物性傳播包括節(jié)肢動物（蒼蠅、蚊子等）；野生動物如野生嚙齒類動物等；患病的實驗

62、動物；飼養(yǎng)、實驗人員不注意衛(wèi)生防疫傳染病原體。3.易感動物:要做好實驗動物的衛(wèi)生防疫，就要徹底控制 以上三個流行環(huán)節(jié)。,動物傳染病防制的具體措施如下：1、根據(jù)不同等級的實驗動物分別制定科學的飼養(yǎng)管理和衛(wèi)生防疫制度，并嚴格執(zhí)行。2、根據(jù)不同等級的實驗動物的要求建立合理的環(huán)境設施，嚴格區(qū)分實驗動物繁育區(qū)與動物實驗區(qū)，且各種動物要分開飼養(yǎng)，以防交叉感染。3、堅持平時的各項衛(wèi)生消毒滅菌制度，對實驗動物的房舍、用具等定期進行消毒或滅菌

63、，杜絕各種微生物的侵入。4、自繁自養(yǎng)自用，引進的動物只有確認健康后才能與原設施內(nèi)動物合群或投入使用；不得從疫區(qū)引進動物。5、外環(huán)境定期進行殺鼠滅蠅的工作，防止野生動物和昆蟲進入動物飼養(yǎng)室或動物實驗室。6、工作人員定期進行健康檢查，患有傳染性疾病的人員不能從事實驗動物工作。7、發(fā)現(xiàn)疫情及時上報，迅速隔離患病動物，危害性大的疫病采取封鎖、撲殺等綜合性措施，將患病動物進行焚燒，污染的環(huán)境及用具應進行徹底嚴密的消毒或滅菌。8、開展經(jīng)常

64、性的衛(wèi)生檢疫，發(fā)現(xiàn)疫情，及時采取相應的防治措施。,實驗動物的衛(wèi)生防疫與隔離措施1. 平時的預防措施（1）飼養(yǎng)人員應嚴格按照不同等級實驗動物的飼養(yǎng)管理和衛(wèi)生防疫制度和操作規(guī)程，認真做好各項記錄，發(fā)現(xiàn)情況，及時報告。（2）實驗動物設施周圍應無傳染源，不得飼養(yǎng)非實驗用家畜家禽，防止昆蟲及野生動物侵入。（3）堅持平時衛(wèi)生消毒制度，降低環(huán)境設施中的病原體含量。（4）各類動物應分室飼養(yǎng)，以防交叉感染。飼養(yǎng)室嚴禁非飼養(yǎng)人員出入和各類人員互串

65、，購買或領用動物者不得進入飼養(yǎng)室內(nèi)。（5）飼料和墊料庫房應保持干燥、通風、無蟲、無鼠，飼料應達到相應的國家標準。（6）飼養(yǎng)人員和獸醫(yī)技術(shù)人員應每年進行健康檢查，患有傳染性疾病的人員不得從事實驗動物工作。,2. 發(fā)生疫病時的撲滅措施（1）及時發(fā)現(xiàn)、診斷和向上級管理和防疫部門上報疫情，并通知鄰近單位做好預防工作。（2）迅速隔離患病動物，污染的環(huán)境和器具緊急消毒。實驗期間的動物應停止實驗觀察或淘汰。（3）若發(fā)生危害性大的疫病，如鼠痘