生物學(xué)特性形態(tài)與染色典型形態(tài)為細(xì)長(zhǎng)略帶彎

1、一、生物學(xué)特性 (一) 形態(tài)與染色 典型形態(tài)為細(xì)長(zhǎng)略帶彎曲的桿菌，有時(shí)可見分枝狀；因衰老和抗結(jié)核藥物的作用可出現(xiàn)多種形態(tài)，如球狀、串珠狀或絲狀。革蘭染色難以著色，但用5%石炭酸復(fù)紅加溫染色后，不易被3%鹽酸酒精脫色。若再用美藍(lán)復(fù)染，則分枝桿菌呈紅色，而其他細(xì)菌和背景呈蘭色。齊-尼染色法是常用的一種抗酸性染色法。該菌在體內(nèi)可形成L型，與細(xì)菌的耐藥性或復(fù)發(fā)有關(guān),結(jié)核分枝桿菌（抗酸染色×1000）,(二) 培養(yǎng)特性

2、 此菌最適生長(zhǎng)溫度為37℃，pH6.5-6.8。專性需氧，養(yǎng)要求較高，必須在含血清、卵黃、馬鈴薯、甘油以及含某些無機(jī)鹽類的特殊培養(yǎng)基上才能生長(zhǎng)良好生長(zhǎng)緩慢，14-18h分裂1次，在固體培養(yǎng)基上2-5w才出現(xiàn)肉眼可見的菌落 典型菌落為粗糙型，表面干燥呈顆粒狀，不透明，乳白色或淡黃色，如菜花樣。菌落粗糙可能與菌體內(nèi)含有高濃度的脂質(zhì)有關(guān)。液體培養(yǎng)時(shí)生成菌膜。如培養(yǎng)液中加入吐溫-80 可使細(xì)菌分散呈均勻生長(zhǎng)。有毒株在液體培養(yǎng)基中呈索

3、狀生長(zhǎng),（三）抵抗力 結(jié)核分枝桿菌因細(xì)胞壁含有大量脂類，故對(duì)理化因素抵抗力較強(qiáng)。耐干燥，在干燥的痰內(nèi)可存活6-8個(gè)月。含有結(jié)核分枝桿菌痰液的塵埃經(jīng)8-10d仍有傳染性。此菌對(duì)化學(xué)消毒劑的抵抗力也較一般細(xì)菌強(qiáng)，在3%HCl或6%H2SO4中不被殺死。因此常用于處理有雜菌污染的檢材，以便進(jìn)行分離培養(yǎng)。對(duì)濕熱敏感，60℃30min可殺死細(xì)菌；在70%-75%乙醇中數(shù)分鐘即被殺死 ，對(duì)紫外線敏感,(五) 變異性 結(jié)核分枝桿菌易發(fā)生形

4、態(tài)、菌落、毒力、免疫原性以及耐藥性的變異，BCG就是牛型結(jié)核分枝桿菌毒力變異株；結(jié)核的多耐菌逐漸增多，甚至引起爆發(fā)流行，耐要基因在染色體上，菌株發(fā)生耐藥后毒力亦減弱，尤其是耐異煙肼菌株,二 致病性 (一) 致病物質(zhì) 該菌不產(chǎn)生內(nèi)、外毒素以及侵襲酶。其毒力 可能與下述物質(zhì)有關(guān)：．  1 莢膜 主要成分為多糖，部分為脂質(zhì)和蛋 白質(zhì)。其作用   

5、 * 與吞噬細(xì)胞表面補(bǔ)體受體3結(jié)合,有助于細(xì) 菌的粘附與侵入    * 莢膜中多種酶可降解宿主組織中的大分子 物質(zhì)，供入侵細(xì)菌繁殖的需要    * 防止有害物質(zhì)進(jìn)入結(jié)核桿菌，還可抑制吞 噬體與溶酶體的融合,2.脂質(zhì) * 狀因子 存在于有毒力的結(jié)核分枝桿菌細(xì)胞壁中，使細(xì)菌在液體培養(yǎng)中能形成盤旋的索狀生長(zhǎng)現(xiàn)象。它的主要毒

6、性是損傷細(xì)胞線粒體和抑制氧化磷酸化過程，且能抑制粒細(xì)胞的游走和引起慢性肉芽腫。 * 磷脂 能促使單核細(xì)胞增生，并使炎灶中的巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)為類上皮細(xì)胞，從而形成結(jié)核結(jié)節(jié),* 硫酸腦苷酯 是有毒株細(xì)胞壁的成分，能抑制溶酶體同吞噬體的結(jié)合，減緩了溶酶體酶對(duì)結(jié)核分枝桿菌的分解、殺傷作用，造成細(xì)菌在吞噬細(xì)胞內(nèi)長(zhǎng)期存活。 * 蠟質(zhì)D 是肽糖脂與分枝菌酸的復(fù)合物，能引起動(dòng)物的遲發(fā)型超敏反,3.蛋白質(zhì) 結(jié)核分枝桿菌含有多種蛋白質(zhì)成

7、分有抗原性 。結(jié)核菌素就是其中之一，與蠟質(zhì)結(jié)合能使機(jī)體致敏。引起組織壞死和全身中毒癥狀，并在形成結(jié)核結(jié)節(jié)中發(fā)揮一定作用,(二) 所致疾病 人型結(jié)核分枝桿菌主要通過呼吸道、消化道和受損傷的皮膚等多種途徑侵入易感機(jī)體，引起多種臟器組織的結(jié)核，其中以肺結(jié)核為最多見,（1）原發(fā)感染 結(jié)核分枝桿菌 侵入肺泡 被肺泡中吞噬細(xì)胞吞噬 在吞噬細(xì)胞內(nèi)繁殖 導(dǎo)致巨噬細(xì)胞裂解釋放出的細(xì)菌 釋放出大量細(xì)菌

8、在肺泡內(nèi)引起滲出性炎癥即為原發(fā)性灶。細(xì)菌隨淋巴管到達(dá)肺門淋巴結(jié)，引起淋巴結(jié)腫大稱原發(fā)綜合征 感染3-6周，機(jī)體產(chǎn)生特異性細(xì)胞免疫，同時(shí)也產(chǎn)生遲發(fā)超敏反應(yīng),,,,,,機(jī)體免疫力低下時(shí)，原發(fā)感染灶惡化，結(jié)核分枝桿菌經(jīng)氣管淋巴道或血流播散，形成全身性粟粒性結(jié)核 。 當(dāng)機(jī)體抵抗力強(qiáng)時(shí)，使感染灶形成結(jié)核結(jié)節(jié)。淋巴結(jié)病灶逐漸纖維化和鈣化，不治自愈。但病灶內(nèi)常有一定量的細(xì)菌長(zhǎng)期潛伏，不斷刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫。也可成為以后內(nèi)源性感染的來源,（

9、2）原發(fā)后感染 亦稱復(fù)活感染 已痊愈的原發(fā)感染可以復(fù)活，成為活動(dòng)性結(jié)核病。約有2／3的活動(dòng)性結(jié)核病是由復(fù)活感染所致,且多發(fā)生于25歲以上者；繼發(fā)感染亦可由外界新侵入的結(jié)核分枝桿菌引起 (外源性感染)，特征病灶多局限，一般不累及鄰近淋巴結(jié)，其被纖維素包裹干酪樣壞死灶可鈣化而痊愈，若干酪樣結(jié)節(jié)破潰，排入鄰近支氣管，則可形成空洞 成為開放型肺結(jié)核，痰中帶大量的結(jié)核桿菌，傳染性很強(qiáng),2 肺外感染 結(jié)核桿菌可經(jīng)血液循環(huán)引起肺

10、外感染，如腦、腎、結(jié)核，痰被咽入可引起腸結(jié)核、結(jié)核性腹膜炎等。一般認(rèn)為血中播散的大多是L細(xì)菌,(三) 免疫性人類對(duì)結(jié)核分枝桿菌的感染率甚高，但發(fā)病率不高。這表明人體對(duì)結(jié)核分枝桿菌有相當(dāng)強(qiáng)的免疫力。（1）結(jié)核的免疫為有菌免疫或稱傳染性免疫。這種免疫系指結(jié)核分枝桿菌(或BCG) 進(jìn)入機(jī)體后使機(jī)體對(duì)細(xì)菌再次入侵有免疫力；而當(dāng)細(xì)菌或其成分從體內(nèi)徹底消失后機(jī)體的免疫力也隨之消失。遺傳因素決定對(duì)結(jié)核病的易感染性， HLA-Bw15為易感個(gè)體。

11、,（2）體液免疫 結(jié)核分枝桿菌感染機(jī)體后，可刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體。目前認(rèn)為抗體在抗結(jié)核免疫方面無保護(hù)作用。但高滴度的抗PPD抗體可做為結(jié)核病輔助診斷的手段 （3）細(xì)胞免疫 結(jié)核病的細(xì)胞免疫在抗感染免疫中起重要作用，即致敏淋巴細(xì)胞與抗原相遇，釋放淋巴因子(主要是IFN-γ)，作用于巨噬細(xì)胞，促使細(xì)胞內(nèi)溶酶體含量增加。其中酶的活性增高，吞噬能力增強(qiáng)。這種活化的巨噬細(xì)胞能消化、殺死被吞入的結(jié)核分枝桿菌 ,機(jī)體在對(duì)結(jié)核分枝桿菌產(chǎn)生細(xì)胞免疫的

12、同時(shí)，也產(chǎn)生遲發(fā)型超敏反應(yīng)。這種情況可用科霍現(xiàn)象來說明 科霍現(xiàn)象方法 將微量結(jié)核分枝桿菌注入易感豚鼠皮下,10-14d后注射部位潰爛、壞死；同時(shí)附近淋巴結(jié)腫大，干酪樣病變，形成慢性潰瘍很難愈合。 若將同樣劑量的菌皮下注射于曾經(jīng)感染過結(jié)核的豚鼠，經(jīng)24-8h后在接種的局部迅速發(fā)生淺潰爛。但能較快愈合，不擴(kuò)散到附近淋巴結(jié)和全身,郭霍現(xiàn)象解釋 原發(fā)感染因無免疫反應(yīng)和超敏反應(yīng)，故結(jié)核分枝桿菌迅速擴(kuò)散全身； 而再

13、感染者因有超敏反應(yīng)產(chǎn)生，局部反應(yīng)迅速而強(qiáng)烈，壞死部位很快脫落，而病變則很快愈合不擴(kuò)散。這又是免疫的表現(xiàn)。 一般認(rèn)為，這種免疫性與遲發(fā)型超敏反應(yīng)都是細(xì)胞免疫性的表現(xiàn),結(jié)核菌素試驗(yàn) 是一種用結(jié)核菌素進(jìn)行皮膚試驗(yàn)來測(cè)定機(jī)體對(duì)結(jié)核分枝桿菌是否能引起超敏反應(yīng)的一種試驗(yàn)1.結(jié)核菌素試劑：有兩種 ，一種為舊結(jié)核菌素(OT)，系結(jié)核分枝桿菌接種于甘油肉湯中培養(yǎng)4-8w，100℃加熱1h，過濾。濾液在80℃下濃縮至原體積的1／10。其中主要

14、成分是舊結(jié)核菌素，即結(jié)核分枝桿菌蛋白。將其稀釋2 000倍，使每0.1ml含5u。,另一種為純蛋白衍生物 (PPD)： PPD有兩種：用人結(jié)核分枝桿菌制成的PPD-C 用卡介苗制成的BCG-PPD 每0.1ml含5個(gè)單位 2.方法 取PPD或OT5各單位注射于前臂掌側(cè)皮下，經(jīng)48-72h檢查反應(yīng)情況。應(yīng)特別注意局部有無硬結(jié)，不能單獨(dú)以紅暈為標(biāo)準(zhǔn)

15、,3.結(jié)果分析 ① 陽性注射部位硬結(jié)、紅腫直徑≥0.5cm,這表明機(jī)體曾感染過結(jié)核，出現(xiàn)超敏反應(yīng)，但不表示正患結(jié)核病 ② 強(qiáng)陽性硬結(jié)直徑＞1.5cm以上，表明可能有活動(dòng)性結(jié)核，應(yīng)進(jìn)一步檢查 ③ 紅腫、硬結(jié)直徑＜0.5cm，為陰性，說明無結(jié)核感染，但應(yīng)考慮下述情況：如受試者正處于原發(fā)感染的早期，或正患嚴(yán)重結(jié)核病 (如全身性結(jié)核或；老年人或獲得性細(xì)胞免疫低下的人,4.應(yīng)用 ① 選擇BCG接種對(duì)象及

16、測(cè)定接種效果。結(jié)核菌素反應(yīng)陰性者應(yīng)接種BCG ② 結(jié)核菌素試驗(yàn)對(duì)嬰幼兒可作診斷結(jié)核病之用 ③ 可在未接種BCG的人群中作結(jié)核分枝桿菌感染的流行病學(xué)調(diào)查 ④ 可借用其測(cè)定腫瘤病人的細(xì)胞免疫功能。,三、微生物學(xué)檢查法 標(biāo)本：根據(jù)感染部位不同，采取不同標(biāo)本，如喀痰、便、尿、膿汁、胸水、腹水和腦脊液(CSF)等,(一) 涂片染色鏡檢 直接涂片染色鏡檢 取標(biāo)本直接涂片進(jìn)行抗酸染色、鏡檢，如找到抗酸桿菌可初步診

17、斷。如果標(biāo)本中含的結(jié)核分枝桿菌量少 (在105／ml以下進(jìn)) 直接涂片法常不易檢出，將石炭酸復(fù)紅染色過夜，用0.5%鹽酸乙醇脫色30s，大多數(shù)分枝桿菌L型也可找著色,（二）濃縮集菌法 將標(biāo)本直接離心沉淀集菌 如無雜菌的腦脊液、胸水、腹水等標(biāo)本 將痰液、支氣管灌洗液等有雜菌的標(biāo)本，用4%NaOH或3%HCl處理，溶解標(biāo)本中的粘稠性有機(jī)物和雜菌，使痰液中被包裹的細(xì)菌釋放出來，也可除去雜菌。然后用離心法或用汽油、二甲苯

18、等漂浮法集菌，使細(xì)菌濃縮集中后再涂片作抗酸染色,(三) 分離培養(yǎng) 在培養(yǎng)前應(yīng)標(biāo)本以適當(dāng)方法作預(yù)處理。后再接種于固體培養(yǎng)基上。常用的固體培養(yǎng)基有羅氏培養(yǎng)基及青霉素血液瓊脂培養(yǎng)基。37℃培養(yǎng)，每周觀察1次，一般2-4周長(zhǎng)出菌落，液體培養(yǎng)基1-2周在管底見有顆粒生長(zhǎng)。并可進(jìn)一步作涂片鏡檢、生化反應(yīng)和藥敏試驗(yàn)來鑒定,(四) 動(dòng)物接種 一般將標(biāo)本注射于豚鼠腹股溝皮嚇，3-4w后出現(xiàn)局部淋巴結(jié)腫大、消瘦，結(jié)核菌素試驗(yàn)轉(zhuǎn)為陽性。剖檢時(shí)可

19、看到淋巴結(jié)、肝、脾、腎、肺等臟器的典型結(jié)核病變，由病變處可查到抗酸桿菌或經(jīng)培養(yǎng)有結(jié)核分枝桿菌生長(zhǎng) 動(dòng)物接種可用于結(jié)核分枝桿菌的分離和毒力測(cè)定。本法敏感可靠。但手續(xù)較繁瑣，不能列為常規(guī)檢查 另外還可用PCR等方法作快速診斷，必要時(shí)作L型培養(yǎng),,四、防治原則 (一) 預(yù)防 除對(duì)結(jié)核患者早期發(fā)現(xiàn)、隔離和治療外，BCG接種是預(yù)防結(jié)核病的有效措施之一 在我國接種的主要對(duì)象是兒童。6個(gè)月以內(nèi)健康嬰兒可直接接種；較大

20、兒童須先做結(jié)核菌素試驗(yàn)；反應(yīng)陰性者再接種。一般在接種后6-8w如結(jié)核菌素試驗(yàn)轉(zhuǎn)為陽性，則表示接種者已產(chǎn)生免疫力；陰性者應(yīng)復(fù)種。陽性反應(yīng)可維持5年左右,(二) 治療 目前常用的抗結(jié)核藥物可分為兩類： 1 第一線抗結(jié)核藥物包括異煙肼、利福平、 乙胺丁醇和鏈霉素。它們的療效好、且毒性較小，能有效地治療大部分結(jié)核病人 2 第二線抗結(jié)核藥物有對(duì)氨水楊酸、吡嗪酰胺、乙硫異煙胺和環(huán)絲氨酸等。吡嗪酰胺 (安米平)可進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)殺死結(jié)

21、核分枝桿菌，在短程化療中應(yīng)用。但此類藥物或因療效較差，或因毒性較大，主要用于對(duì)一線抗結(jié)核藥產(chǎn)生抗藥性或 由于耐菌 株增多，強(qiáng)調(diào)聯(lián)合用藥,第2節(jié) 麻風(fēng)分枝桿菌  麻風(fēng)分枝桿菌是麻風(fēng)病的病原菌。麻風(fēng)是一種慢性傳染病，流行很廣。主要表現(xiàn)為皮膚、粘膜和神經(jīng)末梢的損害。晚期可侵犯深部組織和器官，形成肉芽腫。麻風(fēng)病在世界各地均有流行。據(jù)WHO 1994年統(tǒng)計(jì)，全世界1993年仍有約310萬麻風(fēng)病例。根據(jù)中國性病麻

22、風(fēng)病控制中心監(jiān)測(cè)室統(tǒng)計(jì)，麻風(fēng)病在我國的現(xiàn)病人數(shù)已由1957年的大約40萬減少到1997年現(xiàn)病例4050人。 1997年新發(fā)現(xiàn)病例1800人，現(xiàn)有病例主要集中在偏僻山區(qū)，草原牧區(qū)以及貧困落后地區(qū),1 麻風(fēng)分枝桿菌為細(xì)長(zhǎng)、略帶彎曲呈束狀排列的抗酸菌，迄今仍不能人工培養(yǎng) 2 只有人感染麻風(fēng)。細(xì)菌隨病人鼻分泌物、痰、汗液、乳汁、精液或陰道分泌物排出，通過直接接觸或由飛沫傳播 3 潛伏期長(zhǎng)，一般是6個(gè)月至5年。發(fā)病慢、病程長(zhǎng) ，可

23、復(fù)發(fā),3 麻風(fēng)分枝桿菌檢查可刮取麻風(fēng)病人鼻粘膜或皮膚病變檢材做涂片，用抗酸性染色法檢查有無排列成束的抗酸桿菌。麻風(fēng)病理活體組織切片檢查也是較好的診斷方法  4 目前尚無特異性預(yù)防方法。曾試用BCG來預(yù)防麻風(fēng)，收到一定效果。治療主要用砜類，如氨基砜、二乙酰氨苯砜等。利福平也有抑制麻風(fēng)分枝桿菌的作用,第15章 動(dòng)物源性細(xì)菌 動(dòng)物源性細(xì)菌是人畜共患病原菌，所引起的病稱人畜共患病，其中絕大多數(shù)是以動(dòng)物作為傳染源的稱為動(dòng)物源

24、性疾病 由于人類直接接觸病畜或其污染物及動(dòng)物叮咬等途徑感染而致病，這些病主要發(fā)生在畜牧區(qū)或自然疫源。動(dòng)物源性細(xì)菌主要有布魯菌、鼠疫耶氏菌和炭疽芽孢桿菌,第一節(jié) 布魯斯菌屬 布魯斯菌屬簡(jiǎn)稱布氏菌屬 為一類G－短小桿菌，是牛、羊、豬等動(dòng)物的病原菌，引起母畜流產(chǎn)。人類與病畜或帶菌動(dòng)物接觸，或食用染菌肉類、乳制品，可發(fā)生感染，稱布魯斯菌病或布氏菌病 本菌屬有4個(gè)生物種、13個(gè)生物型，使人致病的在我國主要有羊布魯斯菌

25、、牛布魯斯菌 、豬布魯斯菌 和犬布魯斯菌。其中以羊布魯斯菌最常見,一 生物學(xué)性狀 (一) 形態(tài)與染色 初次分離呈G－小球桿狀， 多次傳代，牛 和豬布魯斯菌可變成桿狀。無芽胞,無鞭毛,光滑型菌有微莢膜,（二) 培養(yǎng)特性 本菌為需氧菌。牛布魯斯菌初次分離時(shí)要在5% -10%CO2環(huán)境下始能生長(zhǎng) 營養(yǎng)要求高，在普通培養(yǎng)基 生長(zhǎng)較遲緩，加入血清或肝浸液等可促進(jìn)生長(zhǎng)。經(jīng)37℃培養(yǎng)48h可長(zhǎng)出微小、透明、無色的光滑菌

26、落。有毒株形成S菌落,（三）生化反應(yīng) 本屬細(xì)菌大多數(shù)能分解尿素和產(chǎn)H2S，根據(jù)H2S產(chǎn)生多少和在堿性染料中的生長(zhǎng)情況，可鑒別牛、羊和豬3種布魯斯菌 。,(四) 抗原構(gòu)造與分型 布魯斯菌屬含有二種抗原物質(zhì)。一種是M抗原 (羊布魯斯菌菌體抗原)，另一種是A抗原 (牛布魯斯菌菌體抗原)。兩種抗原在3種菌中含量不同。兩種抗原M∶A的比例為 羊布魯斯菌 20∶1 牛布魯斯菌 1∶20 豬布魯斯菌 1

27、∶2 本菌還含有L表面抗原，與沙門菌Vi抗原相似,(五) 抵抗力 本菌抵抗力較強(qiáng)。在土壤、皮毛、肉和乳制品及水中可生存數(shù)周至數(shù)月。但在濕熱60℃10min死亡；直射日光下10-20min死亡；3%來蘇兒中數(shù)分鐘死亡 ,二、致病性與免疫性 (一) 致病因素 *內(nèi)毒素 是主要致病物質(zhì) *侵襲力 透明質(zhì)酸酶、莢膜等具有較強(qiáng)的侵襲力。使細(xì)菌能通過完整的皮膚、粘膜進(jìn)入體內(nèi)，并在臟器內(nèi)大量生長(zhǎng)繁殖和快速擴(kuò)散入血流

28、 *此外，布魯斯菌引起的遲發(fā)型超敏反應(yīng)與致病性有關(guān),(二) 所致疾病 感染途徑：呼吸道、消化道和皮膚粘摸直接接觸感染 所致疾?。翰剪斁?病原體隨胎畜、羊水等大量排出；隱性感染動(dòng)物也可經(jīng)乳汁、糞、尿等長(zhǎng)期排菌 人類對(duì)布魯斯菌易感，人通過接觸病畜及其分泌物或接觸被污染的畜產(chǎn)品，細(xì)菌可通過消化道和呼吸道粘膜、皮膚及眼結(jié)膜等途徑傳染于人,發(fā)病過程 細(xì)菌侵入機(jī)體,被吞噬細(xì)胞吞噬，在吞噬細(xì)胞內(nèi)繁殖隨淋巴流到達(dá)淋巴結(jié)

29、生長(zhǎng)繁殖。經(jīng)1-6w潛伏期后侵入血流，出現(xiàn)菌血癥。由于內(nèi)毒素的作用患者出現(xiàn)發(fā)熱、出汗、關(guān)節(jié)痛和全身乏力等癥狀。部分細(xì)菌進(jìn)入肝、脾、骨髓等臟器細(xì)胞，發(fā)熱也漸消退。細(xì)菌在細(xì)胞內(nèi)繁殖到一定程度時(shí)，再次進(jìn)入血流，又出現(xiàn)菌血癥，體溫再次上升。如此反復(fù)呈波浪式熱型。故臨床上稱為波浪熱,布氏病人——肝、脾腫大,(三) 免疫性 一般認(rèn)為布魯斯菌感染后形成的免疫是有菌免疫。但近年來學(xué)者認(rèn)為，隨著病程的延續(xù)，機(jī)體免疫力增強(qiáng)，病菌可被不斷消滅，而最終變

30、為無菌免疫。 病后產(chǎn)生的抗體主要是IgG和IgM，有調(diào)理作用。但由于本菌是細(xì)胞內(nèi)寄生，抗體不易直接發(fā)揮作用。故布魯斯菌以細(xì)胞免疫為主。感染后可引起IV型超敏反應(yīng)。病程中免疫保護(hù)和病理損害往往交織存在,三、微生物學(xué)檢查法 布魯斯菌病的臨床癥狀復(fù)雜，又多不典型，故微生物學(xué)檢查比較重要  (一) 病原菌分離 急性期取血液，慢性期取骨髓。通常接種于雙相肝浸液培養(yǎng)基。置5%-10%CO2環(huán)境中37℃培養(yǎng)。每日傾斜培養(yǎng)物一次，使

31、液體浸濕斜面。大多數(shù)陽性培養(yǎng)物在4-7d長(zhǎng)出菌落；如30d無菌生長(zhǎng)可報(bào)告為陰性。若有細(xì)菌生長(zhǎng)，可根據(jù)涂片鏡檢、CO2需要、H2S產(chǎn)生、染料抑菌試驗(yàn)、血清凝集等以確定型別,,(二) 血清學(xué)診斷 1 凝集試驗(yàn)：患者在發(fā)病1-7d后，血清中出現(xiàn)凝集抗體，癥狀出現(xiàn)后效價(jià)急劇上升，可達(dá)1∶640-1∶1280。轉(zhuǎn)為慢性時(shí)效價(jià)降至一般水平，并可持續(xù)很長(zhǎng)時(shí)間 有時(shí)效價(jià)再度上升，應(yīng)考慮再次感染或復(fù)發(fā)。一般血清效價(jià)1∶200-1∶400為

32、陽性診斷標(biāo)準(zhǔn)。測(cè)特異IgM可鑒別急性還是慢性感染,2 抗球蛋白試驗(yàn)（Coombs試驗(yàn)）：一般用于血清凝集試驗(yàn)陰性、卻有明顯布魯斯菌病癥狀的病例。該試驗(yàn)檢測(cè)的是血清中不完全抗體，比凝集反應(yīng)更靈敏，陽性出現(xiàn)早，消失晚，急性期和慢性期陽性檢出率都較高 3 CF主要是測(cè)定IgG型抗體，出現(xiàn)較晚，一般發(fā)病3W后出現(xiàn)。在體內(nèi)存在的時(shí)間長(zhǎng)，特異性高，以1∶10為陽性。對(duì)診斷慢性布魯斯菌病意義較大。,（三）皮膚試驗(yàn) 即布魯

33、斯菌素皮膚超敏反應(yīng)試驗(yàn)，取布魯菌素或不魯菌蛋白提取物0.1ml作前臂皮內(nèi)注射，24-48h后觀察結(jié)果。紅腫浸潤的直徑在1-2cm者弱陽性，2-3cm者為陽性，4-6cm者為強(qiáng)陽性。若紅腫在6-8h內(nèi)消退者為假陽性 皮試陽性可診斷慢性或曾患過布魯斯菌病,四、防治原則  預(yù)防措施主要是控制和消滅牲畜布魯斯菌病，切斷傳播途徑和免疫接種三相主要措施 對(duì)疫區(qū)人畜可接種減毒活菌苗，有效期約一年。急性病人用抗

34、生素治療，慢性患者可用特異性菌苗脫敏治療 ,第二節(jié) 耶爾森菌屬 耶爾森菌屬 細(xì)菌屬于腸桿菌科，包括有鼠疫耶爾森菌、小腸結(jié)腸炎耶爾森菌和假結(jié)核耶爾森菌。 它們的共同特征是：菌體短小、呈多形性、G－、不形成芽胞，過氧化氫酶陽性、氧化酶陰性。許多動(dòng)物是它們的自然宿主。本屬細(xì)菌通常先引起嚙齒動(dòng)物、家畜和鳥類等動(dòng)物感染，人類通過接觸動(dòng)物、被節(jié)肢動(dòng)物叮咬和污染食物等途徑感染,,一、鼠疫耶爾森菌 鼠疫耶爾森菌是鼠疫的

35、病原菌。鼠疫是一種自然疫源性的烈性傳染病，歷史上曾有三次世界大流行。本世紀(jì)初，在我國東北地區(qū)曾發(fā)生過舉世矚目的大流行。日本侵略軍曾在哈爾濱市郊建立細(xì)菌工廠，用鼠疫耶爾森菌制造細(xì)菌武器，進(jìn)行滅絕人性的細(xì)菌戰(zhàn)。1989-1998年全世界報(bào)告的人間鼠疫病例共5440例，死亡681例，病死率11.0%。因此，鼠疫依然威脅著人類,（一） 生物學(xué)性狀 1．形態(tài)與染色 本菌為卵圓形G－短粗桿菌，有莢膜，無鞭毛，無芽胞，兩端濃染，在陳舊培養(yǎng)

36、物或生長(zhǎng)在含3%NaCl的肉湯中時(shí)呈明顯多形態(tài) ，如球形、桿狀、棒形或啞鈴形等，有時(shí)亦可見到著色極淺的細(xì)菌輪廓，稱菌影,2．培養(yǎng)特性 鼠疫耶爾森菌營養(yǎng)要求不高，生長(zhǎng)最適溫度為26-28℃，pH為 7.2-7.4。在普通瓊脂培養(yǎng)基上培養(yǎng)48h后可長(zhǎng)成周邊菲薄、中央隆起的菌落。在肉湯培養(yǎng)基中最初為混濁生長(zhǎng)，逐漸形成絮狀沉淀，48h后形成菌膜，繼續(xù)靜置培養(yǎng)4-5d后，可見絲狀物從液面薄膜下垂，呈“鐘乳石”狀，此特征具有鑒別意義,3

37、．抗原構(gòu)造 抗原構(gòu)造復(fù)雜，至少有18種，重要的有： ①F1抗原 為鼠疫耶爾森菌的莢膜抗原， 是一種不耐熱的糖蛋白，具有抗吞噬、激活補(bǔ)體的作用，其特異性高，相應(yīng)抗體有抗感染作用 ②V和W抗原 W抗原位于菌體表面，是一種脂蛋白；V抗原是存在于細(xì)胞漿中的可溶性蛋白，它們具有形成肉芽腫性損害和在吞噬細(xì)胞內(nèi)存活的能力，且具有免疫抑制作用,③ 外膜蛋白 這些蛋白在使細(xì)菌突破宿主的防御機(jī)制、引起宿主發(fā)病、導(dǎo)致死亡方面有重要作

38、用 ④ 鼠毒素 是一種外毒素，1μg即可使鼠死亡，它可以阻斷動(dòng)物β腎上腺素能神經(jīng)和引起心臟損害，但對(duì)人的感染作用不清 ⑤ 內(nèi)毒素 引起發(fā)燒休克、DIC等,4．抵抗力 鼠疫耶爾森菌對(duì)理化因素抵抗力較弱。在濕熱70-80℃經(jīng)10min或100℃1min細(xì)菌死亡，5%來蘇或石炭酸、0.1%-0.2%升汞在20min內(nèi)可將痰中病菌殺死。在蚤糞和土壤中能存活半年至1年以上。,（二）致病性與免疫性 本菌貯存宿主為嚙齒類

39、動(dòng)物 (野鼠、家鼠、黃鼠、旱獺)，傳播媒介主要是鼠蚤。鼠疫的傳播方式是“鼠→蚤→人”。一般在人類鼠疫流行前，先在鼠類中流行。在蚤吸感染鼠血液的同時(shí)，細(xì)菌進(jìn)入蚤體，于前胃中增殖。帶菌蚤叮咬人吸血時(shí)，先將前胃內(nèi)容物從口吻注入人體后再吸血，從而將細(xì)菌傳播給人。臨床常見的病型有：,1.腺鼠疫 主要為嚴(yán)重的急性淋巴結(jié)炎。一般為單側(cè)，多在腹股溝 (70%)，其次在腋下及頸部。引起腫脹、水泡，繼而發(fā)生壞死與膿皰  2.敗血癥型鼠疫 多繼發(fā)

40、于腺鼠疫或肺鼠疫以后，此型最為嚴(yán)重，患者體溫升高可達(dá)39 -40℃，可發(fā)生DIC、皮膚粘膜出血點(diǎn)與廣泛淤斑，致死后皮膚常呈黑紫色，故有“黑死病”之稱。并能伴發(fā)支氣管炎、腦膜炎等癥狀，多迅速惡化而死亡 ,3.肺鼠疫 原發(fā)性鼠疫多由呼吸道感染，也可由腺鼠疫、敗血癥型鼠疫繼發(fā)而來。飛沫感染易呈暴發(fā)性流行。病人多高熱寒戰(zhàn)、咳嗽、胸痛、喀血，痰中帶有大量細(xì)菌。呼吸困難、中毒癥狀嚴(yán)重、全身衰竭。多于2-4d內(nèi)死亡，病死率極高 免疫性：鼠疫

41、病后可獲得牢固的免疫力，很少再感染，主要為對(duì)F1抗原、V和W抗原的抗體發(fā)揮防御作用,（三）微生物學(xué)檢查法 鼠疫耶爾森菌引起的鼠疫為法定甲類烈性傳染病，其傳染性極強(qiáng) 鼠疫 ，須在指定的具有嚴(yán)密防護(hù)措施的專門實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，并按嚴(yán)格操作規(guī)程進(jìn)行 標(biāo)本根據(jù)病型不同可分別取血液、喀痰、淋巴結(jié)穿刺液等 直接涂片染色鏡檢，用美藍(lán)染液?jiǎn)稳净蚋锾m染色，鏡檢觀察形態(tài)和染色特性；分離培養(yǎng)；必要時(shí)可作動(dòng)物試驗(yàn),（四）防治原則 滅鼠滅蚤是切