煙草廢棄物抑菌止血有效部位的篩選及其制備.pdf

1、目的：煙草是我國重要的經(jīng)濟(jì)作物之一，在帶來巨大經(jīng)濟(jì)效益的同時(shí)，也在其生產(chǎn)及加工過程中產(chǎn)生了大量廢棄物。目前國內(nèi)外對煙草廢棄物的研究主要集中于茄尼醇、蛋白質(zhì)和煙堿的提取，而對煙草廢棄物的藥理活性研究卻鮮有報(bào)道。根據(jù)傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)的記載及民間應(yīng)用煙草止血的經(jīng)驗(yàn)，本文在活性追蹤下尋找煙草廢棄物中具有抑菌止血雙重藥效的有效部位，并對其進(jìn)行分離、純化、結(jié)構(gòu)鑒定以及制備，為開拓?zé)煵輳U棄物新的利用途徑、開發(fā)具有潛在利用價(jià)值的活性物質(zhì)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，以達(dá)到煙草

2、廢棄物資源最大利用化的目的。
　　方法：
　?。?）抑菌有效部位的篩選：使用濾紙片法、96孔板微量肉湯稀釋法和最小殺菌濃度測定不同提取部位對犬小孢子菌、石膏樣小孢子菌等10種菌的抑菌效果，篩選煙草廢棄物抑菌活性有效部位。
　?。?）止血有效部位的篩選：本文采用經(jīng)典凝血板法和試管法篩選煙草廢棄物的有效部位。通過玻片法、毛細(xì)管法和小鼠斷尾法測定初篩部位對凝血時(shí)間和出血時(shí)間的影響，計(jì)算縮短率，確定止血活性部位。
　　（

3、3）抑菌止血有效部位的提取、分離及結(jié)構(gòu)鑒定：采用系統(tǒng)提取分離法結(jié)合MCI柱色譜、Sephadex LH-20凝膠柱色譜、半制備液相色譜等手段，利用質(zhì)譜、核磁共振分析方法對煙草廢棄物抑菌止血有效部位的化學(xué)成分進(jìn)行分離、純化和鑒定。
　?。?）抑菌止血有效部位的制備：以酚酸得率為評價(jià)指標(biāo)，采用生物酶提取方法結(jié)合大孔樹脂富集純化工藝制備煙草廢棄物抑菌止血有效部位。
　　結(jié)果：
　?。?）煙草廢棄物的不同提取部位的抑菌作用差異

4、較大，酸性乙酸乙酯部位抑菌效果最好，且抗菌譜最廣，對痢疾桿菌、鏈球菌、白色念珠菌、犬小孢子菌、紅色毛癬菌、石膏樣小孢子、黑曲霉菌的最小抑菌濃度分別為1.56、1.56、3.12、6.25、6.25、6.25、50mg· mL-1，最小殺菌濃度分別為3.12、3.12、6.25、25、12.5、50、100mg· mL-1。
　?。?）煙草廢棄物不同提取部位的止血作用差異較大，凝/止血實(shí)驗(yàn)表明：與空白對照組比較，酸性乙酸乙酯部位的高

5、、中劑量組可顯著縮短小鼠的凝/止血(P＜0.01)，酸性乙酸乙酯部位低劑量組可明顯縮短小鼠體內(nèi)凝血時(shí)間(P＜0.05)。故將酸性乙酸乙酯部位視為最佳止血部位。
　?。?）從煙草廢棄物抑菌止血部位中鑒定了11個(gè)化合物的結(jié)構(gòu)，分別為β-谷甾醇、莨菪亭、槲皮素、7-Hydroxy-6,6′-dimethoxy-3,7′-O-bis-coumarin、豆甾醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、沒食子酸、咖啡酸、綠原酸、山奈酚-3-O-蕓香糖苷

6、、對羥基苯甲酸和蘆丁。其中綠原酸、莨菪亭、蘆丁是該部位的主要成分。
　?。?）煙草廢棄物抑菌止血有效部位的生物酶法最佳提取工藝為：纖維素酶的用量為0.5％，溶液pH為4，提取溫度為50℃，提取時(shí)間為4 h，固液比為1:15。探索并確定了利用XDA-1型樹脂富集純化的最優(yōu)工藝參數(shù)為：吸附流速為4BV/h，上樣液pH值為3，上樣濃度為2mg·mL-1，洗脫劑為6BV的30%乙醇。經(jīng)此工藝純化的煙草廢棄物樣品，綠原酸的純度為37.9g/