人體機能學實驗胃腸道運動觀察概述

1、人體機能學實驗,有機磷酸酯類中毒和解救及膽堿酯酶活性測定,201550708 及廷宇,1. 實驗?zāi)康?（1）觀察有機磷酸酯類中毒的癥狀及阿托品和解磷定的解救效果（2）學習膽堿酯酶活性的測定方法，觀察中毒前后及用不同藥物解救后膽堿酯酶活性的變化,有機磷酸酯中毒原理,,,有機磷酸酯類進入人體后，其含磷基團中親電性的磷與但見酶酯解部位絲氨酸羥基中的親和性氧進行共價鍵結(jié)合，生成磷酰化膽堿酯酶復(fù)合物。該復(fù)合物使膽堿酯酶活性難以恢復(fù)，從而使乙

2、酰膽堿大量積聚，產(chǎn)生中毒癥狀。早期用膽堿酯酶復(fù)活藥可部分恢復(fù)膽堿酯酶的活性，若搶救不當或中毒時間過長，膽堿酯酶一旦老化，再用膽堿酯酶復(fù)活藥也作用不大。所以，一旦中毒，必須迅速搶救并盡早使用膽堿酯酶復(fù)活藥,阿托品、解磷定解救原理,阿托品 抗膽堿藥阿托品的作用機制為競爭性拮抗乙酰膽堿或擬膽堿藥對M受體的激動作用，對M樣癥狀有效。,磷?；憠A酯酶,復(fù)活的膽堿酯酶,磷酰化碘解磷定,復(fù)合物,復(fù)活的膽堿酯酶,,,實驗材料,實驗動物：家兔

3、，2.5-3.0kg，雌雄均可。實驗藥品5%敵百蟲 0.1%硫酸阿托品2.5%解磷定 1%肝素10%草酸鉀 0.007M氯化乙酰膽堿，1M鹽酸羥胺，3.5N氫氧化鈉，4N鹽酸，0.37M三氯化鐵，磷酸緩沖液（pH7.2）,,實驗器材：嬰兒秤，測瞳尺，注射器（2ml、5ml、10ml、20ml），頭夾，濾紙，干棉球，比色杯，燒杯，試管架，10m

4、l試管，微量移液器，漏斗，采血瓶，試管刷等。 超級恒溫水浴，722型分光光度計,實驗方法,1. 取家兔，稱重，分組，觀察： 活動情況 呼吸（呼吸頻率、有無呼吸困難、呼吸道分泌物） 瞳孔大小（測瞳尺測量直徑，注意光線的影響） 唾液分泌：是否正常

5、大小便：有無失禁 肌張力：是否正常 肌震顫：有無 采取正常家兔心臟血樣：1.0ml放入1號采血瓶 （注射器肝素抗凝；采血瓶草酸鉀抗凝）,,2. 復(fù)制急性有機磷酸酯類中毒模型： 耳緣靜脈注射敵百蟲1.5ml/kg，10-15分鐘出現(xiàn)中毒癥狀 觀察中毒癥狀，方法體

6、同上 采取中毒后家兔心臟血樣1.0ml放入2號采血瓶 注意：采血時間在15-20分鐘內(nèi)或中毒癥狀明顯時進行，勿遲亦勿早,,3. 有機磷酸酯類中毒解救： 甲組：阿托品1.0ml/kg 乙組：解磷定4.0ml/kg 10-15分鐘癥狀緩解 采取解救后家兔心臟血樣1.0ml放入3號采血瓶

7、 注意：采血時間為藥物解救后的20分鐘左右為宜 （注射器肝素抗凝；采血瓶草酸鉀抗凝）,4. 膽堿酯酶活性測定：膽堿酯酶活性測定步驟見表1.表1 家兔血漿膽堿酯酶活性測定方法,,操作注意事項：1）每加入一種試劑都要混勻，加血樣時要將3個小瓶中的血樣2）第二次水浴30min時用鹽酸羥胺和氫氧化鈉等容量混合配制堿性羥胺（用前20min配制）3）加入各種試劑的順序不能顛倒4）過濾要充分，濾液

8、澄清透明5）加樣結(jié)束后各試管的容量相同,,722分光光度計比色測定蒸餾水調(diào)零A3+（A2﹣A1）﹣A樣為分解的Ach理論上所產(chǎn)生的光密度值選擇λ=480nm測出光密度A1～A6計算酶活性值、活性百分數(shù)ChE活性酶活性百分數(shù),說明：A3﹣A1為加入的7µM Ach的光密度值對照Ⅰ、對照Ⅱ、對照Ⅲ為無血零點管、有血零點管、標準Ach管,膽堿酯酶活性測定的原理操作方法及注意事項,（三）膽堿酯酶活性測定的原理

9、 在一定的溫度、pH值和時間的條件下，水解乙酰膽堿的量和AChE活性成正比。因此，在一定量的血液中，加入一定量的Ach，在一定條件下反應(yīng)一定時間，測定剩余Ach的量，即可推算出水解的Ach的量，從而推算出膽堿酯酶的活性。 測定剩余Ach的反應(yīng)：,,鹽酸羥胺與氫氧化鈉反應(yīng)釋放出游離羥胺 NH2OH·HCl+NaOH →NH2OH+NaCl+H2O剩余Ach與游離羥胺作用，生成羥