如何通過實驗室技術(shù)鑒定臨床有意義

1、如何通過實驗室技術(shù) 鑒定臨床有意義的血型抗體， 確保安全輸血,莫秋紅南寧輸血醫(yī)學(xué)研究所,,,南寧輸血醫(yī)學(xué)研究,,,南寧輸血醫(yī)學(xué)研究,南寧輸血醫(yī)學(xué)研究,臨床有意義的抗體,臨床有意義的抗體：使紅細胞壽命縮短，短時間內(nèi)大量紅細胞破壞，引起病人發(fā)生不良反應(yīng)，如溶血性輸血反應(yīng)、新生兒溶血病。在37℃中和間接抗球蛋白試驗（IAT）中有反應(yīng)。,南寧輸血醫(yī)學(xué)研究,臨床有意義的抗體,自身抗體—溫自身抗體型、

2、冷自身抗體型同種抗體—ABO、Rh等抗體,南寧輸血醫(yī)學(xué)研究,臨床有意義的血型抗體,英國血液學(xué)標準委員會British Committee for Standards in Haematology BCSH Secretary, British Society for Haematology,Milkins .et al,2012,Guidelines for pre-transfusion compatibility proce

3、dures in blood transfusion laboratories,,,,,,,,南寧輸血醫(yī)學(xué)研究,臨床有意義的血型抗體,通常認為在25℃以下不反應(yīng)的抗體，是沒有臨床意義的抗體，如抗-P1是常見冷抗體, 但也有極少抗-P1在37℃反應(yīng),并引起嚴重的急性或遲發(fā)性輸血反應(yīng)?？贵w沒有臨床意義是相對的。,南寧輸血醫(yī)學(xué)研究,易產(chǎn)生同種抗體的病人,反復(fù)輸血的病人，如地中海貧血，再生障礙性貧血，陣發(fā)性夜間血紅蛋白尿（PNH）,骨髓增生異

4、常綜合癥（MDS）等。具有妊娠史的病人。,南寧輸血醫(yī)學(xué)研究,抗體篩查和抗體鑒定,目的原理試劑和材料實驗方法結(jié)果的解釋抗原鑒定,南寧輸血醫(yī)學(xué)研究,抗體篩查和抗體鑒定,目的發(fā)現(xiàn)有臨床意義的血型抗體，為患者提供相應(yīng)抗原陰性的血液，減少或避免同種抗體引起的輸血反應(yīng)。,南寧輸血醫(yī)學(xué)研究,抗體篩查和抗體鑒定,原理運用已知血型抗原的O型紅細胞, 檢測病人血清中的未知抗體。,南寧輸血醫(yī)學(xué)研究,試劑和材料,篩選細胞 通常由2或3個人份O型

5、紅細胞組成，要求DAT陰性，單人份/瓶，2-5%的紅細胞懸，配有反應(yīng)格局表。 譜細胞（Panel red cell) 是由不少于8人份O型紅細胞配套組成的紅細胞試劑，要求DAT陰性，單人份/瓶，2-5%的紅細胞懸液,配有反應(yīng)格局表。,南寧輸血醫(yī)學(xué)研究,試劑和材料,篩選細胞和譜細胞包含抗原要求：1, 8-16種不同常見抗原：D,C,c,E,e,K,k,Fya,Fyb,Jka,Jkb,M,N,S,s,P1,Lea,Leb2,至少

6、含有一個純合子表達的抗原：Fya,Fyb, Jka,Jkb,S,s,3, Dia,Dib,南寧輸血醫(yī)學(xué)研究,試劑和材料,鹽水、白蛋白、低離子介質(zhì)（LISS）、酶、聚乙烯乙二醇（PEG） 、聚凝胺（Polybrene）、抗球蛋白等試劑和微柱凝膠卡等，可按抗體的血清學(xué)特征和實驗的具體條件選擇。,南寧輸血醫(yī)學(xué)研究,實驗方法,試管技術(shù)（鹽水、白蛋白、Liss、酶、和PEG、抗球蛋白、凝聚胺）微柱凝膠技術(shù)Solid-phase system

7、s(SP) 固相凝集技術(shù) Erythroctye-magnetized technology(EMT) 紅細胞磁化技術(shù),南寧輸血醫(yī)學(xué)研究,實驗方法的比較,微柱凝膠技術(shù)，靈敏度高，優(yōu)于試管的IAT ，不用洗滌細胞，操作簡單，可實現(xiàn)自動化；但是對于假陽性和非臨床意義的抗體檢測率也高，并且價格昂貴。試管IAT技術(shù)的特異性最好( Weisbach et al.,2006)，并且價格便宜；缺點是操作繁瑣，耗時長。,南寧輸血醫(yī)學(xué)研究,,微柱凝

8、膠技術(shù),南寧輸血醫(yī)學(xué)研究,實驗方法的比較,58 個AABB免疫血液學(xué)參比實驗室常用的主要的方法中，49個實驗室用試管法，7個用凝膠法，2個用固相法。對于參比實驗室，試管凝集法是檢測臨床有意義的抗體首選的方法。利用多種實驗技術(shù)，相互補充。 （Haywood.et al. 2011.Determination of optimal method for antibody identificaton in a reference l

9、aboratory）,南寧輸血醫(yī)學(xué)研究,結(jié)果的解釋,陰性排除法,通過查看無反應(yīng)的紅細胞的抗原譜，可排除一些特異性抗體，同時可以估計有可能存在的抗體,以防有臨床意義的抗體漏檢，因為一個陽性反應(yīng)格局可能是兩種或多種抗體共同存在的格局。,南寧輸血醫(yī)學(xué)研究,抗原鑒定,病人血清中檢測出一種抗體或多種抗體，紅細胞上應(yīng)該不攜帶相應(yīng)的抗原。如病人血清中含有抗-M，紅細胞上應(yīng)不帶有M抗原。 用血型結(jié)果，可排除一些抗體,并核對抗體鑒定的結(jié)果。,南寧輸

10、血醫(yī)學(xué)研究,流程,抗體篩查,,,,抗體篩查,抗體鑒定,抗原鑒定,,,抗體特異性,,,陽性,陰性排除,,,,明確,臨床意義,有,,相應(yīng)抗原陰性的血液,,判斷,南寧輸血醫(yī)學(xué)研究,案例1,病人血型：CCDEe 獻血者血型ccDEE,或ccDEe,南寧輸血醫(yī)學(xué)研究,抗體篩查的假陰性,假陰性：交叉配血不合或發(fā)生溶血性輸血反應(yīng)，抗體篩查的結(jié)果為陰性。,南寧輸血醫(yī)學(xué)研究,假陰性原因,1，人員操作過程、記錄錯誤、標本錯誤；2 ，低頻抗原

11、，紅細胞不含有某些抗原；3，陳舊，抗原性減弱；4，弱抗體，如抗-Jka， (Jka+Jkb-)細胞w+，(Jka+Jkb+)細胞，無反應(yīng)；5，補體抗體，需要新鮮的血清；6，實驗方法的靈感度不夠高。,南寧輸血醫(yī)學(xué)研究,復(fù)雜的反應(yīng)格局（1）,1,所有的細胞都凝集，強弱一致原因:自身免疫性抗體；針對高頻抗原的抗體或抗-HI；實驗方法的特異性低（如）LISS、PEG、酶的非特異性抗體。,,南寧輸血醫(yī)學(xué)研究,解決方法（1）,1,

12、所有的細胞都凝集，強弱一致方法:自身對照；自身和DAT陰性，可能是高頻抗原的抗體，如抗-HI，常見于非O型的病人，排除方法：血漿與病人血型相同的細胞不反應(yīng)或弱反應(yīng)（A型、B型反定型細胞）；非LISS、 PEG、酶的IAT實驗方法。,南寧輸血醫(yī)學(xué)研究,復(fù)雜的反應(yīng)格局（2）,2,反應(yīng)格局不符合任何一個單一抗體的格局，凝集強弱不一原因1，2種或以上的混合抗體；2，抗原強弱不一，純合子和雜合子；3， 細胞過于陳舊，抗原減弱；

13、4， 實驗方法的靈敏度不高。,南寧輸血醫(yī)學(xué)研究,解決方法（2）,2,反應(yīng)格局不符合任何一個單一抗體的格局，強弱不一樣方法1，選擇某一抗體的抗原陰性，其他抗體的抗 原陽性的譜細胞來排除其他抗體；2，多個血型系統(tǒng)的抗原鑒定,排除一些抗體；3，多套譜細胞；,南寧輸血醫(yī)學(xué)研究,解決方法（2）,2,反應(yīng)格局不符合任何一個單一抗體的格局，強弱不一樣方法4，選擇新鮮的譜細胞5，利用抗體的血清學(xué)特征（如酶，pH值，溫度，劑量效應(yīng)