常見(jiàn)病毒鑒定

1、第十八章 常見(jiàn)病毒鑒定,本 章 內(nèi) 容,肝炎病毒,反轉(zhuǎn)錄病毒,皰疹病毒,腸道病毒,朊粒及其他病毒,學(xué)習(xí)目標(biāo)及重點(diǎn),學(xué)習(xí)目標(biāo)： 掌握流感病毒、肝炎病毒、人類免疫缺陷病毒、腸道病毒的主要生物學(xué)特點(diǎn),各病毒的傳播途徑、臨床檢驗(yàn)和防治原則區(qū)別乙型肝炎病毒常見(jiàn)抗原抗體的組成及其臨床意義五種肝炎病毒常用鑒定方法解釋流感病毒變異和流行的關(guān)系了解朊粒的生物學(xué)特征本章重點(diǎn)：★流感病毒、肝炎病毒、人類免疫缺陷病毒、腸道病毒的生物學(xué)特性和致病性

2、★常見(jiàn)病毒的檢驗(yàn)方法,第一節(jié) 呼吸道病毒,呼吸道病毒一詞并非是病毒分類學(xué)上的名稱，而是指主要以呼吸道為侵入門戶，首先在呼吸道粘膜上皮細(xì)胞中增殖引起呼吸道以及全身感染，造成呼吸道及其他器官損害的病毒的總稱。,第一節(jié) 呼吸道病毒,一、流感病毒流行性感冒病毒（influenza virus），簡(jiǎn)稱流感病毒，是流感的病原體 甲（A）: 抗原性易發(fā)生變異，多次引起世界性大流行 乙（B）: 對(duì)人類致病性較低 丙（C）: 只引起人類不明顯的

3、或輕微的上呼吸道感染，很少造成流行（一）生物學(xué)特性1.形態(tài)結(jié)構(gòu) （1）形態(tài),（2）結(jié)構(gòu),核衣殼,,,第一節(jié) 呼吸道病毒,2.分型與變異分型：根據(jù)NP和MP的不同流感病毒分為甲（A）、乙（B）、丙（C）三型。甲型流感病毒根據(jù)其表面HA和NA抗原性的不同，又分為若干亞型。變異：最主要的是抗原性變異:HA和NA抗原漂移（antigenic drift）抗原轉(zhuǎn)變（antigenic shift）,第一節(jié) 呼吸道病毒

4、,3.培養(yǎng)特性：在雞胚羊膜腔和尿囊腔中增殖 紅細(xì)胞吸附試驗(yàn)（hemoadsorption test） 易感動(dòng)物為雪貂4.抵抗力：抵抗力較弱不耐熱，56℃ 30分鐘可滅活病毒室溫下很快喪失傳染性,第一節(jié) 呼吸道病毒,（二）微生物學(xué)檢驗(yàn)1.標(biāo)本：血清、咽漱液2.鑒定：電鏡觀察ELISA檢查患者咽漱液中的抗原用單克隆抗體經(jīng)免疫酶法PCR技術(shù)、核酸雜交等方法檢出病毒或進(jìn)行分型,第一節(jié) 呼吸道病毒,（三）臨床意義傳染源

5、：患者、隱性感染者、被感染的動(dòng)物傳播途徑：飛沫，經(jīng)呼吸道進(jìn)入體內(nèi)致病機(jī)理：呼吸道上皮細(xì)胞感染增殖，病毒不入血，毒素樣物質(zhì)進(jìn)入血液 癥狀：上呼吸道癥狀、發(fā)熱、頭痛、全身酸痛,第一節(jié) 呼吸道病毒,二、風(fēng)疹病毒（一）生物學(xué)特性1．形態(tài)結(jié)構(gòu)： 單股正鏈RNA病毒 有包膜，核衣殼為二十面體對(duì)稱 一個(gè)血清型 人是唯一宿主2．抵抗力：

6、 抵抗力較弱 不耐熱，56℃ 30分鐘可滅活病毒 對(duì)紫外線、乙醚、氯化銫、去氧膽酸等均敏感,,,第一節(jié) 呼吸道病毒,（二）微生物學(xué)檢驗(yàn)1．標(biāo)本：鼻咽分泌物、皮疹液、尿液，腦脊液、血液、骨髓等2．鑒定 病毒培養(yǎng) （CPE） 免疫學(xué)檢測(cè) 紅細(xì)胞凝集抑制試驗(yàn) 中和試驗(yàn) 補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)

7、 酶或熒光素標(biāo)記單克隆抗體 病毒核酸檢測(cè)：PCR或核酸雜交技術(shù),,,第一節(jié) 呼吸道病毒,（三）臨床意義兒童是主要易感者、病后可終身免疫呼吸道傳播局部淋巴節(jié)增殖后經(jīng)病毒血癥散播全身可垂直傳播導(dǎo)致胎兒先天性感染,第一節(jié) 呼吸道病毒,三、其他呼吸道病毒（一）SARS冠狀病毒1．生物學(xué)特性：（1）形態(tài)結(jié)構(gòu) 不規(guī)則球形，核酸為非節(jié)段單正鏈RNA 直徑60

8、-220nm，有包膜 刺突糖蛋白S、小包膜糖蛋白E、膜糖蛋白M（2）變異性：重組率高、容易發(fā)生變異,,第一節(jié) 呼吸道病毒,2.微生物學(xué)檢驗(yàn)（1）標(biāo)本：鼻咽拭子、咽漱液、糞便等（2）鑒定：電鏡技術(shù)病毒培養(yǎng)：CPE免疫學(xué)檢測(cè)：IgM、IgGRT-PCR基因芯片,第一節(jié) 呼吸道病毒,3.臨床意義（1）傳播途徑：嚴(yán)重急性呼吸綜合征，飛沫、接觸傳播（2）臨床表現(xiàn)可垂直傳播導(dǎo)致胎兒先天性感染

9、（3）致病和免疫免疫病理?yè)p傷是SARS致病的主要機(jī)制（4）預(yù)防治療,第一節(jié) 呼吸道病毒,三、其他呼吸道病毒（二）麻疹病毒1．生物學(xué)特性：（1）形態(tài)結(jié)構(gòu) 球形，核心為完整非節(jié)段單股負(fù)鏈RNA 有包膜、衣殼螺旋對(duì)稱 不容易重組、不容易發(fā)生變異、只有一個(gè)血清型（2）抵抗力：較弱，對(duì)一般消毒劑、紫外線、脂溶劑均敏感,,第一節(jié) 呼吸道病毒,2.微生物學(xué)檢驗(yàn)（1）

10、標(biāo)本：鼻咽拭子、鼻咽洗液、痰、血和尿等，雙份血清（2）鑒定：電鏡觀察包涵體病毒培養(yǎng)：免疫學(xué)檢測(cè)：雙份血清檢測(cè)抗體RT-PCR,第一節(jié) 呼吸道病毒,3.臨床意義（1）傳染源傳播途徑：患者是唯一的傳染源，主要經(jīng)過(guò)飛沫傳播（2）臨床表現(xiàn)以皮丘疹、發(fā)熱及呼吸道癥狀為特征（3）致病和免疫麻疹病后可獲得牢固免疫力，極少發(fā)生再感染,第一節(jié) 呼吸道病毒,三、其他呼吸道病毒（三）腮腺炎病毒1．生物學(xué)特性：（1）形態(tài)結(jié)構(gòu) 球形

11、，核心為單股負(fù)鏈RNA 有包膜、衣殼螺旋對(duì)稱 只有一個(gè)血清型（2）抵抗力：較弱，紫外線、脂溶劑均敏感,,第一節(jié) 呼吸道病毒,2.微生物學(xué)檢驗(yàn)（1）標(biāo)本：發(fā)病早期唾液、腦脊液、雙份血清（2）鑒定：病毒分離培養(yǎng)：免疫學(xué)檢測(cè)：雙份血清檢測(cè)抗體RT-PCR,第一節(jié) 呼吸道病毒,3.臨床意義（1）傳染源傳播途徑：人是唯一宿主，通過(guò)飛沫或唾液污染的食品、玩具進(jìn)行傳播（

12、2）臨床表現(xiàn)本病潛伏期約2～3周，病毒侵入呼吸道上皮細(xì)胞和局部淋巴結(jié)內(nèi)增殖后，進(jìn)入血流，然后經(jīng)血流侵入腮腺及其它腺體器官如睪丸、卵巢、胰腺等。臨床表現(xiàn)主要為一側(cè)或雙側(cè)腮腺腫大，伴發(fā)熱、乏力、肌肉疼痛等。青春期感染者易并發(fā)睪丸炎或卵巢炎，并發(fā)睪丸炎者可導(dǎo)致男性不育癥，腮腺炎也是導(dǎo)致兒童期獲得性耳聾的常見(jiàn)原因。（3）免疫腮腺炎病后一般可獲得終身免疫。,第一節(jié) 呼吸道病毒,三、其他呼吸道病毒,第一節(jié) 呼吸道病毒,三、其他呼吸道病毒,第一

13、節(jié) 呼吸道病毒,第二節(jié) 肝炎病毒,肝炎病毒是指引起病毒性肝炎的病原體。人類肝炎病毒有甲型、乙型、丙型、丁型和戊型和庚型病毒之分。,第二節(jié) 肝炎病毒,一、甲型肝炎病毒（一）生物學(xué)特性 1.形態(tài)結(jié)構(gòu) 屬小RNA病毒科,線性單正鏈RNA，直徑約為27nm，呈球形，二十面體立體對(duì)稱、無(wú)包膜,HAV電鏡圖,第二節(jié) 肝炎病毒,2.抵抗力耐受乙醚、氯仿等脂溶劑 耐酸：在pH3的酸性環(huán)境中穩(wěn)定不耐熱：100℃ 5 min可使之滅活在海

14、水、淡水、毛蚶、泥沙中存活數(shù)天至數(shù)月,第二節(jié) 肝炎病毒,3.培養(yǎng)特性易感動(dòng)物：黑猩猩，狨猴，鷹面猴，短尾猴允許性細(xì)胞：Vero、恒河猴胚腎細(xì)胞（FRHK-4）、人肝癌細(xì)胞株（PLC/PRF/S）等 在培養(yǎng)細(xì)胞中生長(zhǎng)緩慢，無(wú)CPE,第二節(jié) 肝炎病毒,（二）微生物學(xué)檢驗(yàn)HAV-IgM檢測(cè)：早期、快速診斷最可靠的血清學(xué)指標(biāo) HAV-IgG檢測(cè)：主要用于了解既往感染史、疫苗免疫、效果評(píng)價(jià)或流行病學(xué)調(diào)查分離培養(yǎng)：原代肝細(xì)胞或恒河猴胚腎

15、傳代株細(xì)胞對(duì)HAV敏感，生長(zhǎng)緩慢，不引起細(xì)胞裂解,第二節(jié) 肝炎病毒,（三）臨床意義傳染源：主要性患者和亞臨感染者傳播途徑：糞－口途徑傳播,第二節(jié) 肝炎病毒,二、乙型肝炎病毒,第二節(jié) 肝炎病毒,二、乙型肝炎病毒（一）生物學(xué)特性 1．形態(tài)與結(jié)構(gòu),①小球形顆粒:直徑22nm；②管形顆粒:直徑22nm，長(zhǎng)度在50～700nm之間；③大球形顆粒:即Dane顆粒，直徑42nm。,第二節(jié) 肝炎病毒,第二節(jié) 肝炎病毒,即完整的HBV顆粒，也

16、稱Dane顆粒，直徑約42nm，分為包膜和核心兩部分。包膜含HBsAg、糖蛋白和細(xì)胞脂肪，核心含核心蛋白（即乙型肝炎核心抗原，HBcAg）、環(huán)狀雙股HBV-DNA和HBV-DNA多聚酶。,第二節(jié) 肝炎病毒,小球形顆粒：直徑約22nm。管狀顆粒：直徑約22nm，長(zhǎng)度100～500nm。這兩種顆粒均由與病毒包膜相同的脂蛋白（即乙型肝炎表面抗原，HBsAg）組成，不含核酸，一般無(wú)傳染性。,2.基因組從感染HBV病人的血清中及感染肝臟提純的

17、病毒核心中分離出環(huán)狀雙股DNA，約3200bp，HBVDNA負(fù)鏈有四個(gè)開(kāi)放區(qū)，分別稱為S、C、P及X，能編碼全部已知的HBV蛋白質(zhì)。S基因能編碼主要表面蛋白。C區(qū)基因包括前C基因和C基因，分別編碼HBeAg和HBcAg。P區(qū)最長(zhǎng)，編碼病毒體DNA多聚酶。X區(qū)可能編碼有154個(gè)氨基酸的堿性多肽。,第二節(jié) 肝炎病毒,3.抗原組成（1）表面抗原HBsAg存在于三型顆粒中,是HBV感染的主要標(biāo)志pres1和preS2抗原的檢作為病毒復(fù)制的

18、指標(biāo)抗-preS2抗體陽(yáng)性常見(jiàn)于急性乙肝的恢復(fù)期，表示病毒正在或已經(jīng)被清除抗-HBs保護(hù)性抗體（中和抗體）乙肝痊愈（臨床）或免疫成功（接種疫苗）的標(biāo)志,第二節(jié) 肝炎病毒,（2）核心抗原HBcAg僅存在于Dane顆粒中，刺激機(jī)體產(chǎn)生抗HBc（IgG、IgM）可在感染的肝細(xì)胞核心部位的表面存在，表明病毒在復(fù)制到血液中即被降解為HBeAg，一般血清學(xué)方法檢測(cè)不到HBcAg，而只能檢測(cè)到抗-HBc抗-HBc 對(duì)機(jī)體無(wú)保護(hù)作用

19、抗HBc-IgM：是HBV近期感染或慢性感染者病毒活動(dòng)的標(biāo)志抗HBc-IgG：持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)凡有過(guò) HBV感染者均可陽(yáng)性，并可終身伴隨,第二節(jié) 肝炎病毒,（3）e抗原HBeAg 僅存在于Dane顆粒中，HBeAg是HBcAg的降解產(chǎn)物，游離存在于血液中，為病毒復(fù)制及強(qiáng)傳染性的指標(biāo)，產(chǎn)生抗－HBe，是預(yù)后良好的征象抗-HBe隨著HBeAg的消失而出現(xiàn)抗-HBe的出現(xiàn)標(biāo)志著病毒復(fù)制減少、傳染性降低保護(hù)作用,第二節(jié) 肝炎病毒,（4

20、）PreS1、PreS2與HBV-DNA成正比是病毒復(fù)制的指標(biāo) 抗-PreS1、抗-PreS2在恢復(fù)期的早期出現(xiàn)陽(yáng)性提示病毒正在或已經(jīng)被清除是預(yù)后良好的指標(biāo),第二節(jié) 肝炎病毒,第二節(jié) 肝炎病毒,4.培養(yǎng)特性動(dòng)物接種：黑猩猩、鴨,第二節(jié) 肝炎病毒,5.抵抗力具有頑強(qiáng)的抵抗力：它對(duì)低溫、干燥、紫外線、對(duì)一般濃度的化學(xué)消毒劑，都能夠耐受；常用的消毒劑，如酒精、來(lái)蘇兒、碘酒等對(duì)它根本不起作用，不能殺死它們，所以家里有了乙肝病人就

21、不要用這些消毒劑來(lái)消毒，但是HBV怕高熱，如加熱到100度，只要10分鐘就可使其失去傳染性。HBV對(duì)0.5%過(guò)氧乙酸非常敏感，5%次氯酸鈉也可用來(lái)殺滅HBV。,（二）微生物學(xué)檢驗(yàn)1.標(biāo)本：血清2.鑒定HBV抗原、抗體檢測(cè)血清HBV-DNA檢測(cè)血清DNA多聚酶檢測(cè),第二節(jié) 肝炎病毒,（三）臨床意義傳染源：患者或無(wú)癥狀HBsAg攜帶者傳播途徑：血液、血制品、母嬰傳播、性傳播乙型肝炎的臨床表現(xiàn)呈多樣性，可由無(wú)癥狀攜帶至急性肝炎

22、、慢性肝炎、重癥肝炎等。病毒不僅存在于肝內(nèi)，也存在于脾臟和血細(xì)胞等。一般認(rèn)為，病毒在細(xì)胞內(nèi)增殖對(duì)肝細(xì)胞的直接破壞作用不大，而機(jī)體對(duì)肝臟的免疫病理?yè)p害才是引起肝炎發(fā)生的主要原因,第二節(jié) 肝炎病毒,三、丙型肝炎病毒（一）生物學(xué)特性,第二節(jié) 肝炎病毒,1.形態(tài)結(jié)構(gòu) 球形，單正鏈RNA 有包膜 2.抵抗力：對(duì)有機(jī)溶劑敏感,,1.標(biāo)本：血清或血漿2.鑒定：檢測(cè)病毒抗體：用ELISA法檢測(cè)抗-HCV檢測(cè)病毒

23、RNA：因HCV在血液中含量很少，常用敏感的RT-PCR法,（二）微生物學(xué)檢驗(yàn),（三）臨床意義1.主要通過(guò)輸血和血制品傳播，其他如性接觸傳播、母嬰傳播2.是引起輸血后慢性肝炎和肝硬化的主要原因3.HCV感染極易轉(zhuǎn)為慢性4.無(wú)癥狀HCV攜帶者和慢性丙肝者多見(jiàn)5.人群普遍易感，HCV感染的母親所生嬰兒感染率高6.誘發(fā)肝外損傷：腎小球腎炎 7.無(wú)有效疫苗，免疫力不牢固,第二節(jié) 肝炎病毒,四、丁型肝炎病毒（一）生物學(xué)特性HDV

24、是一種缺陷病毒由HBsAg構(gòu)成其外殼，HDV定位于肝細(xì)胞核內(nèi)，在血液中由HBsAg包被形成35-37nm顆粒，單負(fù)鏈環(huán)狀RNA，已知的最小的動(dòng)物病毒,HDV結(jié)構(gòu)模式圖,第二節(jié) 肝炎病毒,（二）微生物學(xué)檢驗(yàn)1.HDAg是HDV感染的直接標(biāo)志2.抗-HD抗體檢測(cè) 抗HDV-IgM：是HDV早期感染標(biāo)志 抗HDV-IgG：是HDV既往感染的標(biāo)志 慢性HDV感染時(shí)，兩種抗體可長(zhǎng)期共存3.HDV-RNA H

25、DV RNA是HDV存在及復(fù)制的一個(gè)有用指標(biāo),第二節(jié) 肝炎病毒,（三）臨床意義感染HBsAg陽(yáng)性的病人共同感染 (coinfection)：與HBV同時(shí)感染重疊感染 (superinfection)：在慢性乙型肝炎或HBsAg攜帶者的基礎(chǔ)上再感染HDV,第二節(jié) 肝炎病毒,五、戊型肝炎病毒（一）生物學(xué)特性 屬杯狀病毒科，球形，無(wú)包膜，直徑32～34nm，單正鏈RNA一個(gè)血清型,第二節(jié) 肝炎病毒,（二）微生物學(xué)檢驗(yàn)檢測(cè)HEV：電鏡

26、或免疫電鏡觀察檢測(cè)抗-HEV 抗HEV-IgM：是近期內(nèi)HEV感染的標(biāo)志，有早期診斷價(jià)值 抗HEV-IgG：HEV感染后可長(zhǎng)期存在，可用于流行病學(xué)調(diào)查 HEV RNA,第二節(jié) 肝炎病毒,（三）臨床意義主要通過(guò)糞-口途徑傳播，患者多見(jiàn)于20～40歲成年人，潛伏期為2～9w，多數(shù)患者于病后6w即好轉(zhuǎn)或痊愈。少數(shù)患者可表現(xiàn)為重癥肝炎，甚至可導(dǎo)致死亡。孕婦感染時(shí)，發(fā)病率高，病情嚴(yán)重，常發(fā)生流產(chǎn)或死產(chǎn)HEV致病機(jī)制尚不明了

27、，可能是病毒本身作用及機(jī)體免疫應(yīng)答造成肝細(xì)胞損傷病后有一定免疫力,第二節(jié) 肝炎病毒,六、其他肝炎相關(guān)病毒1.庚型肝炎病毒 屬黃病毒科，為單股正鏈RNA。主要通過(guò)輸血等非腸道途徑傳播，呈全球分布，我國(guó)主要在非甲至戊型肝炎病人、獻(xiàn)血員、血透病人、器官移植患者及肝癌患者中存在2.TT型肝炎病毒是從一例日本輸血后非甲至庚型肝炎病人（TT）血液中發(fā)現(xiàn)的一類新型DNA病毒，屬細(xì)小DNA病毒科，通過(guò)血液和血制品傳播，也可經(jīng)消化道傳播,第二節(jié) 肝

28、炎病毒,三、其他呼吸道病毒,第二節(jié) 肝炎病毒,第三節(jié) 反轉(zhuǎn)錄病毒,包括腫瘤病毒亞科、泡沫病毒亞科和慢病毒亞科,人類嗜T細(xì)胞病毒,人類免疫缺陷病毒（HIV）,HIV-I型和HIV-II型,獲得性免疫缺陷綜合癥（AIDS）,中國(guó)AIDS流行現(xiàn)狀截至2014年2月28日，我國(guó)累計(jì)報(bào)告報(bào)告的HIV/AIDS 587182例，死亡138956例?，F(xiàn)存活艾滋病病毒感染者271624例，艾滋病病人176602例。我國(guó)艾滋病疫情總體上保持低流行態(tài)勢(shì)，

29、但依然呈上升趨勢(shì)，幅度較以前有所減緩。據(jù)統(tǒng)計(jì)，自2005年至今，性傳播比例持續(xù)攀升。2014年3月新發(fā)現(xiàn)的HIV/AIDS中，異性性傳播4515例（69.8%），同性性傳播1260例（19.5%），注射毒品傳播430例（6.6%），母嬰傳播36例（0.6%），性接觸加注射毒品傳播13例（0.2%），既往輸血及使用血制品傳播11例（0.2%），既往采血漿傳播5例（0.1%），傳播途徑不詳203例（3.1%）。50歲以上群體和學(xué)生群體所占比

30、例上升，這也是我國(guó)HIV傳播的新特點(diǎn),知識(shí)拓展,第三節(jié) 反轉(zhuǎn)錄病毒,一、人類免疫缺陷病毒（一）生物學(xué)特性1．形態(tài)與結(jié)構(gòu) RNA，有包膜球形病毒。72個(gè)釘狀突起，gp120 gp412．HIV復(fù)制（1）吸附----gp120 +CD4（2）穿入和脫殼（3）生物合成 （4）裝配與釋放,第三節(jié) 反轉(zhuǎn)錄病毒,3．HIV的理化特性對(duì)熱敏感56℃處理30分鐘失去感染性，但不能完全滅活血清中的HIV,滅活方法是100℃

31、20分鐘對(duì)化學(xué)因素敏感，在室溫下70%酒精只需1分鐘即不能檢出活性對(duì)紫外線或γ射線不敏感，因此紫外線或γ射線不能滅活HIV病毒,第三節(jié) 反轉(zhuǎn)錄病毒,（二）微生物學(xué)檢驗(yàn)1．標(biāo)本采集 采集血液、體液標(biāo)本2．HIV檢驗(yàn) 包括HIV抗體、P24抗原、HIV病毒載量、CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)等抗體檢測(cè)是診斷HIV感染的唯一標(biāo)準(zhǔn)（1) HIV-1P24,HIV-1P24------可用于“窗口期”及HIV-1抗體陽(yáng)性的母親所生嬰兒早期的輔助鑒

32、別診斷,第三節(jié) 反轉(zhuǎn)錄病毒,（2）血清抗體檢測(cè) 分為篩查和確認(rèn)試驗(yàn),免疫印跡法--是HIV血清學(xué)檢測(cè)中最常用的確證性試驗(yàn),篩查陽(yáng)性者必須進(jìn)行確認(rèn)試驗(yàn),第三節(jié) 反轉(zhuǎn)錄病毒,（3）測(cè)定病毒核酸,臨床常用于測(cè)定感染者體內(nèi)游離病毒的RNA含量即病毒載量,（4）CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù),應(yīng)用流式細(xì)胞儀（FCM）進(jìn)行CD4+T細(xì)胞記數(shù)及占淋巴細(xì)胞的百分率（正常情況下與CD8+T細(xì)胞比例為2:1）,CD4+T細(xì)胞數(shù): ＜0.5×109/L時(shí)，

33、為抗反轉(zhuǎn)錄病毒藥物治療的指征＜0.2×109/L時(shí)，應(yīng)立刻進(jìn)行卡氏肺孢子菌的預(yù)防治療 ＜0.1×109/L時(shí)，易感染巨細(xì)胞病毒和結(jié)核分枝桿菌,（5）耐藥性檢測(cè),檢測(cè)患者標(biāo)本中HIV基因序列，監(jiān)控變異的發(fā)生，間接估計(jì)藥物耐藥情況。,第三節(jié) 反轉(zhuǎn)錄病毒,（三）臨床意義,HIV無(wú)癥狀攜帶者和AIDS患者,傳播途徑,性接觸、輸血或血制品、母-嬰傳播,傳染源,病毒選擇性侵犯CD4+細(xì)胞，細(xì)胞變性、壞死，導(dǎo)致以CD4

34、+細(xì)胞缺陷為主的嚴(yán)重免疫缺陷,1．致病機(jī)制,第三節(jié) 反轉(zhuǎn)錄病毒,（1）急性期：（2）無(wú)癥狀潛伏期：（3）AIDS期:,感染后2～6周內(nèi),一般為8～10年,通常難以檢測(cè)到HIV抗體,血清抗體陽(yáng)性，具傳染性。,持續(xù)發(fā)熱、盜汗、失重、不明原因的慢性腹瀉、濕疹、銀屑病、脂溢性皮炎、皮炎、皰疹-帶狀皰疹、口腔念珠菌病、黏膜白斑病等,,機(jī)會(huì)感染和腫瘤,2．臨床特征,第三節(jié) 反轉(zhuǎn)錄病毒,機(jī)會(huì)性感染,帶狀皰疹,毛囊炎,第三節(jié) 反轉(zhuǎn)錄病毒,在

35、AIDS患者中念珠菌屬感染是很常見(jiàn)的, 象鵝口瘡（上圖）盡管不危及生命但十分討厭. 左圖為念珠菌性肺炎.,機(jī)會(huì)性感染,第三節(jié) 反轉(zhuǎn)錄病毒,惡性腫瘤圖為AIDS患者常出現(xiàn)的Kaposi肉瘤,第三節(jié) 反轉(zhuǎn)錄病毒,由于缺乏AIDS宣傳及預(yù)防意識(shí)，中國(guó)九十年代出現(xiàn)“AIDS村”,第三節(jié) 反轉(zhuǎn)錄病毒,患艾滋病的孩子,第三節(jié) 反轉(zhuǎn)錄病毒,二、人類嗜T細(xì)胞病毒,引起T細(xì)胞白血病和毛細(xì)胞白血病,人類嗜T細(xì)胞病毒(HTLV),（一）生物學(xué)特性電鏡下H

36、TLV呈球形，直徑約100nm，中心為病毒的RNA和反轉(zhuǎn)錄酶最外層系病毒的包膜，其表面嵌有g(shù)p120，能與細(xì)胞表面的CD4分子結(jié)合而介導(dǎo)病毒的感染。包膜內(nèi)有病毒的衣殼，含有P18和P24兩種結(jié)構(gòu)蛋白,第三節(jié) 反轉(zhuǎn)錄病毒,（二）微生物學(xué)檢查*電鏡觀察*免疫血清或單克隆抗體鑒定*血液中HTLV-I抗體的存在即可診斷為該病毒感染；而血液中異常淋巴細(xì)胞數(shù)量的大量增生，同時(shí)證實(shí)這些淋巴細(xì)胞中有HTLV-IDNA，則可支持成人T淋巴細(xì)胞白

37、血病的診斷,第三節(jié) 反轉(zhuǎn)錄病毒,HTLV-I可經(jīng)輸血、注射或性接觸等傳播，也可通過(guò)胎盤(pán)、產(chǎn)道或哺乳等途徑垂直傳播。,（三）臨床意義,成人T淋巴細(xì)胞白血病主要采取化療，但對(duì)HTLV-I的抵抗效果不佳；AZT和其他反轉(zhuǎn)錄酶抑制劑能夠有效的對(duì)抗細(xì)胞培養(yǎng)中的HTLV-II。,第三節(jié) 反轉(zhuǎn)錄病毒,第四節(jié) 皰疹病毒,皰疹病毒（Herpesviruses）是一群中等大小的有包膜的雙股DNA病毒，有110個(gè)以上成員，其中與人感染有關(guān)的人皰疹病毒已發(fā)現(xiàn)有

38、8種,球形，直徑約為120～300nm。核心為雙鏈線性DNA，衣殼呈20面體，有包膜感染類型①增殖感染破壞宿主細(xì)胞②潛伏宿主細(xì)胞③部分整合到宿主細(xì)胞DNA中④經(jīng)胎盤(pán)感染胎兒，先天畸形對(duì)脂溶劑敏感，臨床采集標(biāo)本不應(yīng)與脂溶劑接觸。最適保存溫度為-196℃（液氮），在-70℃病毒感性可保存數(shù)月，4℃可保存數(shù)天，-20℃易破壞病毒包膜，短期保存即完全滅活,皰疹病毒共同的特：,第四節(jié) 皰疹病毒,一、單純皰疹病毒（HSV）,HS

39、V-1 HSV-2,HSV-2型則與生殖器皰疹和新生兒感染有關(guān),主要引起口唇和角膜皰疹,（一）生物學(xué)特性,基因組DNA有40%左右的序列同源,HSV的增殖周期短，常潛伏于神經(jīng)節(jié)中引起潛伏感染。抵抗力較弱，易被脂溶劑滅活。溫度高于56℃ 30分鐘失去感染性,第四節(jié) 皰疹病毒,（二）微生物學(xué)檢驗(yàn)1．標(biāo)本 采集水皰液、唾液、腦脊液、角膜刮取物、陰道拭子等標(biāo)本，經(jīng)常規(guī)處理

40、后接種或置低溫冰箱保存2．分離培養(yǎng)鑒定 常用原代兔腎、人胚肺、人胚腎細(xì)胞或地鼠腎等傳代細(xì)胞分離培養(yǎng)病毒。在雞胚絨毛膜上，HSV-2形成大空斑，而HSV-1形成針尖大小的空斑。常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有家兔、豚鼠、小鼠等3．血清學(xué)檢測(cè) 中和試驗(yàn)、免疫熒光等鑒定也可分離病毒DNA，根據(jù)DNA酶切圖譜差異鑒定型別,第四節(jié) 皰疹病毒,（三）臨床意義直接接觸傳染或被唾液污染的餐具 間接傳染HSV感染一般分為原發(fā)感染和復(fù)發(fā)感染。原發(fā)感染好發(fā)于

41、嬰幼兒或兒童，多為隱性感染，并不表現(xiàn)出癥狀,HSV-2侵及軀體腰以下部位，主要是生殖器，它是引起性病的主要病原體之一,HSV-1主要侵犯軀體腰以上部位，可引起口腔、唇、眼、腦及腰以上部位感染,第四節(jié) 皰疹病毒,單純皰疹病毒感染---多核細(xì)胞,第四節(jié) 皰疹病毒,二、水痘-帶狀皰疹病毒（VSV）,（一）生物學(xué)特性 水痘-帶狀皰疹病毒（VZV）,,初次感染,再次感染,水痘 （多見(jiàn)于兒童） 帶狀皰疹（多成

42、人和老人）,,,第四節(jié) 皰疹病毒,（二）微生物學(xué)檢驗(yàn)水痘一帶狀皰疹的臨床癥狀典型，一般不需作微生物學(xué)診斷。必要時(shí)可檢查嗜酸性核內(nèi)包涵體和多核巨細(xì)胞細(xì)胞內(nèi)抗原,（三）臨床意義 傳染源： 主要是患者，病毒經(jīng)呼吸道、口、咽、結(jié)膜、皮膚等處侵入人體1．人是水痘-帶狀皰疹病毒的唯一自然宿主,2．帶狀皰疹 是潛伏在體內(nèi)的VZV復(fù)發(fā)感染,第四節(jié) 皰疹病毒,三、人巨細(xì)胞病毒（HCMV）和EB病毒,一般是宮內(nèi)感染侵犯胎兒神經(jīng)系統(tǒng)、肝、腎等器官，

43、,人巨細(xì)胞病毒（HCMV）,EB病毒（EBV）與多種人類疾病相關(guān)如傳染性單核細(xì)胞增多癥、Burkitt淋巴瘤、鼻咽癌、霍奇金淋巴瘤等,鼻咽癌和EB病毒關(guān)系密切，血清學(xué)檢查有高效價(jià)EB病毒抗原抗體,可采集各種體液、分泌物等樣本進(jìn)行病毒分離、抗原或核酸檢測(cè),第四節(jié) 皰疹病毒,第五節(jié) 腸道病毒,一、脊髓灰質(zhì)炎病毒（一）生物學(xué)特性1.形態(tài)結(jié)構(gòu) 球形，直徑27～30nm，無(wú)包膜單股正鏈RNA病毒，核衣殼呈20面體立體對(duì)稱結(jié)構(gòu),（一）生物學(xué)性

44、狀2.培養(yǎng)特性 可在猴腎細(xì)胞,人胚腎細(xì)胞、人羊膜細(xì)胞中培養(yǎng)增殖引起CPE敏感的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有猴、猩猩等靈長(zhǎng)類動(dòng)物，將病毒接種于脊髓或腦內(nèi)容易發(fā)病，導(dǎo)致肢體麻痹,,,,,,,第五節(jié) 腸道病毒,（一）生物學(xué)性狀3.抵抗力：在污水及糞便中可生存數(shù)月，耐酸、耐乙醚、乙醇，不被胃酸和膽鹽滅活。對(duì)紫外線、干燥敏感，對(duì)強(qiáng)氧化劑敏感,較強(qiáng),第五節(jié) 腸道病毒,（二）微生物學(xué)檢驗(yàn)1.標(biāo)本：病人發(fā)病早期咽洗液、糞便、血液、腦脊液或組織 2.鑒定

45、（1）病毒的分離培養(yǎng)與鑒定,第五節(jié) 腸道病毒,（二）微生物學(xué)檢驗(yàn)2.鑒定（2）血清學(xué)診斷（3）其他 電子顯微鏡 分子生物學(xué)技術(shù),第五節(jié) 腸道病毒,二、輪狀病毒（一）生物學(xué)性狀1.形態(tài)結(jié)構(gòu)：直徑60～80nm，核心為雙鏈RNA，無(wú)包膜 衣殼殼粒呈放射狀排列，負(fù)染色后電鏡下觀察形如車輪，故得名輪狀病毒（如右圖）,電鏡下的輪狀病毒,第五節(jié) 腸道病毒,（一）生物學(xué)特性2.培養(yǎng)特性 組織培養(yǎng)十分困難需

46、選用特殊的細(xì)胞株培養(yǎng)3.抵抗力較強(qiáng) 在糞便中可存活數(shù)天至數(shù)周，耐乙醚，耐酸堿95％的乙醇是最有效的滅活劑,第五節(jié) 腸道病毒,（二）微生物學(xué)檢驗(yàn)1.標(biāo)本 采集病人發(fā)病5天內(nèi)的糞便，密封后送檢2.鑒定（1）電鏡觀察 如見(jiàn)特殊車輪狀病毒顆粒即可診斷（右圖）,第五節(jié) 腸道病毒,（二）微生物學(xué)檢驗(yàn)2.鑒定 （2）抗原檢測(cè) ELISA雙抗體夾心法（3）血清學(xué)檢查：IgM、IgG（4）分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù),第五節(jié) 腸道病毒,

47、（二）臨床意義1.傳播與流行輪狀病毒是由糞口路徑所傳染的，借由與接觸弄臟的手、弄臟的表面以及弄臟的物體來(lái)傳染，而且有可能經(jīng)由接觸傳染2.臨床表現(xiàn)輪狀病毒腸胃炎是一種從溫和到嚴(yán)重的疾病，有一些表征像是嘔吐，水狀腹瀉，以及低程度的發(fā)熱。在癥狀發(fā)生前大約會(huì)有兩天的潛伏期癥狀通常是從嘔吐開(kāi)始，接著是四到八天的大量腹瀉。3.免疫預(yù)防感染后可產(chǎn)生中和抗體。,第五節(jié) 腸道病毒,,三、其他腸道病毒（一）柯薩奇病毒與?？刹《?柯薩奇

48、病毒 埃可病毒,與脊髓灰質(zhì)炎病毒生物性狀類似；為球形無(wú)包膜單股正鏈RNA病毒；柯薩奇病毒在多種組織細(xì)胞中生長(zhǎng)并產(chǎn)生CPE；埃可病毒在猴腎細(xì)胞中增殖良好。,柯薩奇病毒——血凝抑制試驗(yàn)鑒定；?？刹《尽泻驮囼?yàn)鑒定,第五節(jié) 腸道病毒,三、其他腸道病毒（二）新型腸道病毒1.腸道病毒70型 引起急性出血性結(jié)膜炎又稱急性出血性結(jié)膜炎病毒2.新型腸道病毒71型 引起手足口病流行,第五節(jié) 腸道病毒,一、朊粒（一）生物學(xué)特

49、性1.形態(tài)與結(jié)構(gòu)： 朊蛋白（PrP) 2.抵抗力：,第六節(jié) 朊粒及其他病毒,,,PrPsc,PrPc,,氨基酸序列完全一致空間構(gòu)象對(duì)蛋白酶K抗性致病性有差異,強(qiáng),正常細(xì)胞PrPc與羊瘙癢病PrPsc的三維結(jié)構(gòu),第六節(jié) 朊粒及其他病毒,（二）微生物學(xué)檢驗(yàn)1.標(biāo)本：腦脊液、腦組織 2.鑒定,,神經(jīng)病理學(xué)檢查,免疫學(xué)檢查,

50、基因分析法,第六節(jié) 朊粒及其他病毒,（三）臨床意義引起致死性中樞神經(jīng)系統(tǒng)慢性退行性病變潛伏期長(zhǎng)慢性進(jìn)行性發(fā)展，以死亡告終患者表現(xiàn)為癡呆、震顫、共濟(jì)失調(diào)等神經(jīng)系統(tǒng)癥狀,第六節(jié) 朊粒及其他病毒,二、其他病毒（一）狂犬病病毒1.生物學(xué)特性（1）形態(tài)與結(jié)構(gòu)：子彈狀 單股負(fù)鏈RNA，有包膜，螺旋對(duì)稱（2）培養(yǎng)特性：宿主廣范，細(xì)胞內(nèi)增殖后可形成內(nèi)基小體（3）抵抗力：不強(qiáng),第六節(jié) 朊粒及其他病毒,（一）狂犬病病毒2．微生物學(xué)檢驗(yàn)

51、（1）標(biāo)本：唾液、腦脊液或死后腦組織。（2）鑒定：,①直接鏡檢②病毒分離③免疫熒光檢測(cè)抗原④分子生物學(xué)技術(shù)檢測(cè),第六節(jié) 朊粒及其他病毒,（二）人乳頭瘤病毒（HPV）1.生物學(xué)特性 球形雙鏈環(huán)狀DNA、20面體對(duì)稱目前尚不能在組織細(xì)胞中培養(yǎng)2.微生物學(xué)檢驗(yàn)（1）標(biāo)本 生殖道分泌物 疣體表面脫落細(xì)胞（2）鑒定 組織學(xué)、電鏡、免疫學(xué)及核酸檢測(cè)等,第六節(jié) 朊粒及其他病毒,（三）黃病毒1.

52、流行性乙型腦炎病毒（1）生物學(xué)特性：球形、單股正鏈有包膜RNA病毒可產(chǎn)生CPE，抵抗力不強(qiáng)（2）微生物學(xué)檢驗(yàn) 1）標(biāo)本 血液、腦脊液、尸檢腦組織等 2）鑒定,①分離培養(yǎng)②血清學(xué)檢查③分子生物學(xué)技術(shù)檢測(cè),第六節(jié) 朊粒及其他病毒,（三）黃病毒2.登革熱病毒（1）生物學(xué)特性：球形，單股正鏈有包膜RNA病毒、PH7-9最穩(wěn)定 4℃條件下傳染性可保持?jǐn)?shù)周（2）微生物學(xué)

53、檢驗(yàn) 1）標(biāo)本：血清、血漿、白細(xì)胞 死亡患者取肝、脾等 2）鑒定,①病毒分離培養(yǎng)②血清學(xué)檢查③核酸檢測(cè),第六節(jié) 朊粒及其他病毒,（三）黃病毒 3.森林腦炎病毒生物學(xué)特性：球形，單股正鏈有包膜RNA病毒、,小鼠最為敏感，任何途徑接種均能感染病毒檢測(cè)方法與乙型腦炎病毒相似森林硬蜱為主要傳播媒介及儲(chǔ)存宿主,第六節(jié) 朊粒及其他病毒,（四）出血熱病毒 1.漢坦病毒,球形或卵圓形，RN

54、A、有包膜，對(duì)酸、熱抵抗力弱常用免疫熒光法、免疫酶染色法、分子生物學(xué)技術(shù)檢測(cè)帶毒動(dòng)物為傳染源，以鼠傳播為主，以高熱、出血和腎損害為主要臨床綜合征,第六節(jié) 朊粒及其他病毒,（四）出血熱病毒2.新疆出血熱病毒,球形、RNA、有包膜病毒常用ELISA、免疫熒光法檢測(cè) 野生嚙齒動(dòng)物和家畜是主要儲(chǔ)存宿主，硬蜱是傳播媒介引起自然疫源性疾病，有嚴(yán)格的地區(qū)性和明顯的季節(jié)性。以發(fā)熱、全身肌痛、中毒癥狀和出血為主，無(wú)腎綜合征,第六節(jié) 朊粒

55、及其他病毒,埃博拉病毒屬絲狀病毒科，單股負(fù)鏈RNA病毒，外有包膜，在常溫下較穩(wěn)定，對(duì)熱有中等度抵抗力，56℃不能完全滅活，60℃30min方能破壞其感染性；紫外線照射2min可使之完全滅活。對(duì)化學(xué)藥品敏感，乙醚、去氧膽酸鈉、β-丙內(nèi)酯、福爾馬林、次氯酸鈉等消毒劑可以完全滅活病毒感染性。能引起人類和靈長(zhǎng)類動(dòng)物產(chǎn)生埃博拉出血熱。有很高的死亡率，在50%至90%之間，致死原因主要為中風(fēng)、心肌梗塞、低血容量休克或多發(fā)性器官衰竭。,第六節(jié) 朊粒