藥物制劑微生物檢驗

1、藥物制劑微生物檢驗,目錄,1、微生物檢驗分類2、藥品微生物限度檢測的基本條件3、非滅菌制劑的微生物限度檢查4、滅菌制劑的無菌檢查法,一、微生物檢驗分類,無菌檢查,凡直接進(jìn)入人體血液循環(huán)系統(tǒng)、肌肉、皮下組織或接觸創(chuàng)傷、潰瘍部位而發(fā)生作用的制品或要求無菌的材料、滅菌器具都要進(jìn)行無菌檢查。注射用制劑：注射劑、輸液、注射粉針等；眼用制劑：滴眼劑、眼用膜劑、凝膠劑、軟膏劑等；植入型制劑：植入片等；創(chuàng)面用制劑：潰瘍、燒傷及外傷用溶劑、

2、軟膏劑及氣霧劑等手術(shù)用制劑、止血海綿、骨蠟等,二、藥品微生物限度檢測的基本條件,二、藥品微生物限度檢測的基本條件,二、藥品微生物限度檢測的基本條件,由于某些供試品具有抗菌活性，在建立測定方法或原測定法的檢驗條件發(fā)生改變時，可能影響檢驗結(jié)果的準(zhǔn)確性，必須對供試品的抑菌活性及測定方法的可靠性進(jìn)行驗證。,二、藥品微生物限度檢測的基本條件,1.檢測用量,2.檢測量,二、藥品微生物限度檢測的基本條件,二、藥品微生物限度檢測的基本條件,第三節(jié) 藥

3、品微生物限度檢測方法,微生物檢驗基本流程,1、領(lǐng)取并配制培養(yǎng)基2、擦拭工作臺及墻壁3、開啟紫外燈滅菌1h4、進(jìn)行微生物實驗5、實驗完成后再次擦拭工作臺,二、細(xì)菌數(shù)、霉菌和酵母菌數(shù)檢查,1、平皿法,二、細(xì)菌數(shù)、霉菌和酵母菌數(shù)檢查,二、細(xì)菌數(shù)、霉菌和酵母菌數(shù)檢查,,,,,,,,,,封閉式薄膜過濾器,傳統(tǒng)開放式薄膜過濾器,二、細(xì)菌數(shù)、霉菌和酵母菌數(shù)檢查,二、細(xì)菌數(shù)、霉菌和酵母菌數(shù)檢查,二、細(xì)菌數(shù)、霉菌和酵母菌數(shù)檢查,二、細(xì)菌數(shù)、霉菌和

4、酵母菌數(shù)檢查,二、細(xì)菌數(shù)、霉菌和酵母菌數(shù)檢查,,細(xì)菌總數(shù)＝平均菌落數(shù)×稀釋倍數(shù),二、細(xì)菌數(shù)、霉菌和酵母菌數(shù)檢查,當(dāng)有兩個相鄰稀釋級的菌落數(shù)在30-300之間——比值＜＝2時，則以2個稀釋級的平均值報告。比值＞2時，則以低稀釋級的平板菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告。,高稀釋級的平板菌落數(shù)*稀釋倍數(shù),比值=,,低稀釋級的平板菌落數(shù)*稀釋倍數(shù),細(xì)菌總數(shù)檢查表,培養(yǎng)溫度：30℃-35℃培養(yǎng)基名稱：營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（批號：14040901）,特

5、殊藥品微生物限度檢驗,三、控制菌檢查－檢查項目,（1）陰性對照試驗：取稀釋液10ml按相應(yīng)供試品控制菌檢查法檢查，應(yīng)無菌生長。（2）陽性對照試驗：供試品+10~100CFU 陽性對照菌，應(yīng)檢出相應(yīng)的陽性對照菌。 （3）供試品控制菌檢查：依相應(yīng)的檢查方法進(jìn)行。,三、控制菌檢查－檢查流程,三、控制菌檢查－檢查流程,三、控制菌檢查－檢查流程,三、控制菌檢查－檢查流程,三、控制菌檢查－檢查流程,三、控制菌檢查－檢查流程,三、控制菌檢查－大腸

6、埃希菌檢查,★大腸埃希菌,三、控制菌檢查－大腸埃希菌檢查,★大腸埃希菌檢查意義,,大腸埃希菌為條件致病菌，當(dāng)人體免疫力低下或是侵入腸外組織、器官，可引起腸外感染，乃至敗血癥。也可隨人和動物的糞便排出體外，污染環(huán)境，一旦食品、藥品、水等物品中檢出該菌，說明已受糞便污染，可能存在其他腸道致病菌和寄生蟲卵，人們飲用或服用它們則可能引起消化道傳染病。,三、控制菌檢查－大腸埃希菌檢查,乳糖膽鹽培養(yǎng)基,伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基,靛基質(zhì)試驗,,紫黑色金屬光

7、澤,玫瑰紅色液面,,麥康凱瓊脂培養(yǎng)基：大腸桿菌呈桃紅色。,I M Vi C試驗 大腸埃希菌 +(或-） + - - 產(chǎn)氣桿菌 - - + +,吲哚（靛基質(zhì)）,甲基紅,二乙酰,枸櫞酸鹽利用,三、控制菌檢查－大腸埃希菌檢查,★大腸埃希菌檢查結(jié)果報告,MUG陽性:紫外光下管內(nèi)培養(yǎng)物呈現(xiàn)藍(lán)白色熒光,三、控制菌檢查－大

8、腸菌群檢查,★大腸菌群檢查意義,,大腸菌群主要存在于溫血動物糞便中，隨糞便排出體外后可直接污染藥品，若產(chǎn)品中檢出該菌群，表明該產(chǎn)品受到糞便污染，可能存在腸道致病菌并引起疾病，以此作為糞便指示菌比大腸埃希菌更具廣泛衛(wèi)生學(xué)意義。,三、控制菌檢查－大腸菌群檢查,★大腸菌群檢查流程圖,三、控制菌檢查－大腸菌群檢查,★大腸菌群檢查結(jié)果報告－大腸菌群MPN表,根據(jù)發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，平板上有典型菌落，并經(jīng)證實為革蘭氏陰性短桿菌，靛基質(zhì)試驗陽性，則可報

9、告被檢樣品中檢出糞大腸菌群。,三、控制菌檢查－銅綠假單胞菌檢查,★銅綠假單胞菌,三、控制菌檢查－銅綠假單胞菌檢查,★銅綠假單胞菌檢查意義,三、控制菌檢查－銅綠假單胞菌檢查,,,,,最終結(jié)果判斷,增菌培養(yǎng),供試液的制備,,,,,書寫檢驗記錄單,分離純化,無菌落或無特征菌落,配培養(yǎng)基和稀釋液,,,★銅綠假單胞菌檢查流程圖,30-35℃,18~24h,30-35℃,18~24h,十六烷三甲基溴化銨平板,膽鹽乳糖培養(yǎng)基,黃綠色菌膜,,灰白色濕

10、潤,,氧化酶試驗,粉紅/紫紅色,,綠膿菌素試驗,鹽酸層呈粉紫色氯仿層呈藍(lán)綠色,,硝酸鹽還原產(chǎn)氣試驗,,N2,明膠液化試驗,明膠培養(yǎng)基（高層）,明膠液化,,,三、控制菌檢查－金黃色葡萄球菌檢查,★金黃色葡萄球菌,三、控制菌檢查－金黃色葡萄球菌檢查,,,,,革蘭染色、鏡檢→ 生化試驗:血漿凝固酶試驗,最終結(jié)果判斷,增菌培養(yǎng),供試品的處理,,,,,書寫檢驗記錄單,分離純化,無菌落或無特征菌落,配培養(yǎng)基和稀釋液,,,30-35℃,30-35

11、℃,18-24h,24-72h,★金黃色葡萄球菌檢查流程圖,卵黃氯化鈉瓊脂,金黃色，有乳濁圈,甘露醇發(fā)酵試驗,血漿凝固酶試驗,血漿凝塊,,液態(tài)血漿,,,三、控制菌檢查－白色念珠菌檢查,★白色念珠球菌檢查意義,三、控制菌檢查－白色念珠菌檢查,革蘭染色、鏡檢芽管試驗,,,有特征菌落,1%聚山梨酯80-玉米培養(yǎng)基,,小結(jié),對于外用藥品，不得檢出銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌及白色念珠球菌；對于口服藥品，不得檢出大腸埃希菌；對于原藥材，控制

12、大腸菌群數(shù)量。,第四節(jié)、無菌檢查方法,第四節(jié)、無菌檢查方法,陽性對照試驗=陽性對照菌液+供試品,金黃色葡萄球菌（無抑菌作用或抗G+菌）大腸埃希菌（抗G-菌為主的供試品）生孢梭菌（抗厭氧菌的供試品）白色念珠菌（抗真菌的供試品）,,陽性對照菌選用原則,陰性對照試驗：以無菌檢查所用稀釋劑做陰性對照，不得長菌,一、直接接種法,二、薄膜過濾法,50ml硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基,50ml改良馬丁培養(yǎng)基,陽性對照,,,,,,,30～35℃14天,