四艾滋病梅毒丙肝檢測及結果意義講解

1、艾滋病梅毒丙肝實驗室檢測及影響結果因素分析,內容提要：,1.艾滋病檢測程序、方法應用和注意事項。2.梅毒檢測程序、方法應用和注意事項。3.丙肝檢測程序、方法應用和注意事項。4.影響實驗室檢測結果的因素分析,艾滋病檢測方法,常用HIV病原學檢測方法: 1. 核酸檢測（ PCR、病毒載量） 2. 病毒培養(yǎng)分離 3. P24抗原檢測常用HIV抗體檢測方法: 初篩：1.酶聯(lián)免疫吸附法 ELI

2、SA：第三代、第四代 2.快速檢測 RT：金標、硒標 3.簡單法 PA: 明膠顆粒凝集 確證：免疫印跡法 WB:（Western Blot）、RIBA其他相關檢測方法: 免疫功能測定：CD4/CD8檢測,HIV抗體檢測目的,1 HIV抗體檢測可用于診斷、血液篩查、監(jiān)測等。2 以診斷為目的的檢測是為了確定個體HIV感染狀況，包括臨床檢測、自愿咨詢檢測、根據(jù)特殊需

3、要進行的體檢等。3 以血液篩查為目的的檢測是為了防止輸血傳播HIV，包括獻血員篩查和原料血漿篩查。4 以監(jiān)測為目的的檢測是為了解不同人群HIV感染率及其變化趨勢，包括各類高危人群、重點人群和一般人群。,1 根據(jù)目的選擇檢測方法及檢測策略。2 嚴格遵守實驗室SOP。3 篩查試驗陽性，須作確證試驗。4 篩查試驗陰性， 不應做確證試驗。5 篩查及確證試驗陽性均應做好咨詢工作。,HIV抗體檢測的要點,HIV抗體篩查檢測

4、流程,初篩試驗,1、HIV抗體檢測分為篩查試驗（包括初篩和復檢）和確證試驗。 2、根據(jù)檢測目的選用符合要求的篩查試劑對樣品進行初篩檢測，對呈陰性反應的樣品，可出具HIV抗體陰性（-）報告；對呈陽性反應的樣品，需要進一步做復檢試驗和確證試驗。,復檢試驗,對初篩呈陽性反應的樣品，應使用原有試劑和另外一種不同原理（或廠家）的試劑，或另外兩種不同原理或不同廠家的試劑進行復檢試驗。 如果初篩檢測使用抗原抗體聯(lián)合試劑

5、，則復檢必須包括一種抗原抗體聯(lián)合試劑。 如兩種試劑復檢均呈陰性反應，則報告HIV抗體陰性（-）；如均呈陽性反應，或一陰一陽，需送艾滋病確證實驗室進行確證試驗。 如果抗原抗體聯(lián)合試劑檢測呈陽性反應，而抗體試劑檢測為陰性反應，則應考慮進行HIV-1 p24抗原或核酸檢測，必要時進行隨訪。,確證試驗,1 確證試劑必須是經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理局注冊批準、在有效期內的試劑。2 確證樣品可采用血清、血漿

6、、濾紙干血斑樣品。3 確證方法包括免疫印跡試驗（WB）、條帶免疫試驗、放射免疫沉淀試驗（RIPA）及免疫熒光試驗（IFA）等。,HIV抗體不確定（±）,結合流行病學資料，可以在4周后隨訪檢測，如帶型沒有進展或呈陰性反應，則報告陰性；如隨訪期間出現(xiàn)陽性反應，則報告陽性；如隨訪期間帶型有進展，但不滿足陽性標準，應繼續(xù)隨訪到8周。如帶型沒有進展或呈陰性反應則報告陰性；滿足HIV抗體陽性診斷標準則報告陽性，不滿足陽性判斷標準可視情

7、況決定是否繼續(xù)隨訪。 隨訪期間可根據(jù)需要，檢測病毒核酸或P24抗原作為輔助診斷。如果出現(xiàn)HIV-2型的特異性指示條帶，根據(jù)實際情況需用HIV-2型免疫印跡試劑再做HIV-2的抗體確證試驗或HIV-2核酸檢測，以進一步明確HIV-2感染狀態(tài)，疑難樣品送國家艾滋病參比實驗室進一步分析。,HIV-2抗體陽性,出現(xiàn)HIV-2型特異性指示帶的樣品：如果同時呈HIV-1抗體陽性反應，報告HIV-1抗體陽性，不推薦進一步做HIV-

8、2抗體確證試驗；如果同時呈HIV-1抗體不確定或陰性反應，需用HIV-2型確證試劑再做HIV-2的抗體確證試驗。同時符合以下二條標準，即出現(xiàn)至少2條env帶（gp36和gp140/ gp105），和試劑盒提供的陽性判定標準，可判為HIV-2抗體陽性。,孕產婦新生兒檢測,艾滋病快速檢測試驗（RT）,是在ELISA基礎上發(fā)展起來的一種檢測技術，它用膠體金或硒標記抗原、抗體后以層析方法進行檢測。突出優(yōu)點為快速、試劑便于保存、檢測不需要特殊

9、設備并可以單份檢測 ，比較適用于基層醫(yī)療單位和標本初篩。挑戰(zhàn)：進一步提高檢測靈敏度和特異性，實現(xiàn)檢測多元化，進行定量和半定量檢測膠體金紙條將會更加廣泛地應用于各個領域。,,,,快速試劑使用中存在的問題,快速檢測只是初篩檢測，存在較高的假陽性率和假陰性率；技術上屬于主觀判讀，不具備標準化條件；快速檢測的質量控制問題目前沒有有效方法；價格是常規(guī)技術的5倍。行政經(jīng)費政策不支持，個人支付價位高；存在較大的批間誤差，加上不屬于政策規(guī)定項

10、目，風險較大，基層醫(yī)療衛(wèi)生單位不愿意承擔責任。擔心敏感性不夠高，不敢出陰性報告；,HIV-1抗原檢測的用途：,1 HIV-1感染窗口期、HIV抗體不確定或HIV-1陽性母親所生嬰兒的鑒別診斷。2 第四代HIV檢測試劑的陽性結果的輔助診斷。3 監(jiān)測病程進展或抗病毒治療效果。4 HIV分離培養(yǎng)，病毒復制狀況的監(jiān)測。,HIV-1抗原檢測方法和結果報告,方法：ELISA，有定量檢測。結果報告和解釋： HIV-1 P

11、24抗原篩選試驗有反應的標本必須經(jīng)過中和試驗確證以后才能判斷陽性或陰性。 HIV-1 P24抗原陽性僅作為HIV感染的輔助診斷依據(jù)，不能據(jù)此確診。 HIV-1 P24抗原陰性結果不能排除HIV感染。 監(jiān)測病程進展或抗病毒治療效果應進行HIV-1 P24抗原的定量檢測。,HIV核酸檢測的意義,1 早期診斷：嬰幼兒或成人有急性HIV感染綜合癥或流行病學史，且不同時間的兩次HIV核酸檢測結果均為陽性，即可

12、診斷。使用多樣品集合的方法，HIV抗體陰性的高危人群樣品進行集合核酸檢測，及時發(fā)現(xiàn)窗口期感染。2 疑難樣本的輔助診斷：幫助提供HIV感染早期或終末期的證據(jù)。3 遺傳變異監(jiān)測：用于HIV-1和HIV-2感染的鑒別診斷、HIV感染傳播鏈的分析、HIV基因亞型和重組病毒的鑒定和分析以及人群HIV遺傳變異趨勢的監(jiān)測。4 耐藥性監(jiān)測：了解耐藥性病毒株流行的態(tài)勢和指導臨床醫(yī)生判斷抗病毒治療效果和修改抗病毒治療方案。5 病程監(jiān)控及預測

13、：有助于確定疾病發(fā)展的階段，以確定相應的治療方案。6 指導抗病毒治療及療效判定,艾滋病感染產婦所生兒童HIV感染早期診斷檢測流程,HIV-1耐藥檢測,1 耐藥監(jiān)測用于HIV-1感染人群和抗病毒治療人群。用于新近感染人群的耐藥性監(jiān)測，了解耐藥毒株流行的情況；用于治療前人群的監(jiān)測，指導制定一線抗病毒治療方案；用于抗病毒治療人群的耐藥性監(jiān)測，進行HIV-1耐藥發(fā)生、發(fā)展趨勢以及影響因素的分析，指導和完善大規(guī)模公共衛(wèi)生模式抗病毒治療的程

14、序，以及制定二線治療方案。.2 耐藥檢測用于個體患者的耐藥檢測。在抗病毒治療前進行耐藥檢測，可指導臨床醫(yī)生制定抗病毒治療方案，保證抗病毒治療的效果；在抗病毒治療過程中進行耐藥檢測，可指導臨床醫(yī)生分析治療失敗的原因，并制定補救治療方案。,梅毒實驗室檢測,病原體檢測 暗視野顯微鏡檢查 鍍銀染色 熒光抗梅毒螺旋體單克隆抗體法血清學檢測 非梅毒螺旋體抗原血清試驗（非特異性試驗） 梅毒螺旋體

15、抗原血清試驗（特異性試驗）,病原體檢測——暗視野顯微鏡檢查,螺旋狀，纖細、白色、有折光的。長約為兩個紅細胞，有6-12個螺旋。具有旋轉、蛇行及伸縮等3種特征性的運動方式。,病原體檢測——鍍銀染色檢查,方法: 涂片干燥 →固定 →洗滌 →媒染 →銀染 →鏡檢 可見到染成棕褐色的梅毒螺旋體。,病原體檢測——直接熒光法,FITC熒光素標記的抗梅毒螺旋體單克隆抗體與樣本中的梅毒螺旋體結合，在熒光顯微鏡下，可見到發(fā)黃綠色熒光的梅毒螺

16、旋體。,病原體檢測,具有快速、方便、易操作的特點。是診斷早期現(xiàn)癥梅毒的最好方法。未見到梅毒螺旋體，不能排除罹患梅毒，可讓患者復查及進行血清學檢查。,血清學檢測,非梅毒螺旋體抗原血清試驗 性病研究實驗室試驗（VDRL） 不加熱血清反應素試驗（USR） 快速血漿反應素環(huán)狀卡片試驗（RPR、TRUST）梅毒螺旋體抗原血清試驗 熒光梅毒螺旋體抗體吸收試驗（FTA-ABS） 梅毒螺旋體血球凝集試驗（TPHA） 梅毒

17、螺旋體明膠顆粒凝集試驗（TPPA） 梅毒螺旋體抗體酶聯(lián)免疫試驗（TP-ELISA） 梅毒螺旋體快速診斷試驗（TP-RT）,非梅毒螺旋體抗原血清試驗,以心磷脂、卵磷脂、膽固醇為抗原,檢測抗類脂質抗體（反應素），主要是IgM和IgG混合體。方法簡單、快速、價格低廉、敏感性和特異性較好，適用于大量人群的篩查。治療后血清滴度可下降并轉為陰性，可作為療效觀察、判愈、復發(fā)或再感染指征。梅毒治療后部份病人存在血清固定現(xiàn)象。用于鑒別先天

18、梅毒與被動反應素血癥。VDRL試驗主要用于神經(jīng)梅毒的腦脊液檢查。艾滋病人合并感染梅毒，血清試驗呈陰性。存在一定的假陽性。不同試驗的結果沒有可比性。,前帶現(xiàn)象,指非梅毒螺旋體抗原血清試驗中，有時血清中存在高濃度的抗體時出現(xiàn)的弱陽性或陰性反應的結果，而臨床上又象二期梅毒。將血清稀釋后再進行試驗，出現(xiàn)陽性的結果。有前帶現(xiàn)象的病人在臨床治療中應注意“賈赫氏反應”。,血清固定（耐血清性）,指經(jīng)抗梅毒治療后，非梅毒螺旋體抗原血清試驗

19、在一定時期內不陰轉，而保持低滴度陽性（1：4以內）的反應。早期的血清固定常與治療量不足或不規(guī)則治療、復發(fā)、再感染或有神經(jīng)系統(tǒng)梅毒等因素有關。晚期血清固定與梅毒的類型及開始治療的時間早晚有關。對于這種病人，在經(jīng)過詳細的檢查，特別是在除外神經(jīng)、心臟與其他內臟梅毒后，應停止治療，作定期隨訪。,梅毒螺旋體抗原血清學試驗,梅毒血清學試驗的假陽性反應,梅毒血清學試驗假陽性反應的對策,技術性假陽性反應 由于標本的保存不當（如細菌污染或溶血）

20、、試劑質量差或過期、或實驗室操作錯誤所造成，可通過重復試驗來排除。生物學假陽性反應 是由于患者有其他疾病或生理狀態(tài)發(fā)生變化，使梅毒血清試驗出現(xiàn)陽性。非梅毒螺旋體抗原的血清學試驗可做FTA-ABS、TPHA（TPPA）等確證試驗進行排除。梅毒螺旋體抗原的血清學試驗時應對病人進行全面檢查、密切隨訪。,梅毒血清學試驗結果,梅毒血清學試驗結果,非梅毒螺旋體抗原血清試驗 (確證是否為現(xiàn)癥病人)

21、 ↓↑互為確證 梅毒螺旋體抗原血清試驗 (確證是否為感染者),胎傳梅毒的實驗診斷方法,早期先天梅毒 暗視野檢查：胎盤、臍帶、鼻分泌物、皮膚黏膜。 血清學檢查晚期先天梅毒 血清學檢查,胎傳梅毒的實驗診斷,暗視野檢查梅毒螺旋體陽性?；純悍敲范韭菪w血清抗體滴度持續(xù)上升。患兒非梅毒螺旋體血清學定量試驗結果比母親高4倍?；純簷z出19S-IgM抗體。,神經(jīng)梅毒

22、的實驗室診斷,梅毒血清學檢查陽性。腦脊液細胞計數(shù)蛋白質測定結果異常。腦脊液VDRL試驗陽性。腦脊液檢測到IgM抗體。,丙肝實驗室檢測,抗-HCV檢測􀂙HCV 抗原檢測􀂙定量HCV RNA檢測􀂙HCV基因型和亞型檢測,HCV-RNA檢測,1.HCV RNA測定定性套式PCR.2.HCV RNA定量方法包括DNA探針技術、競爭PCR法、熒光定量法等， 3.定量測定有

23、助于了解病毒復制程度、抗病毒治療的選擇及療效評估等。4.對HCV RNA尚可進行基因分型，方法包括序列測定、PCR、酶切、探針雜交等。,4影響實驗室檢測的因素分析,每一個生物學實驗都有可能得出假陽性或假陰性的結果生物學實驗的準確性用以下三種參數(shù)來描述:? 敏感性? 特異性? （陰、陽性）預示值? 應考慮人群感染率,4.1檢測結果準確性的計算,A= 感染，檢測陽性結果(真陽性)B= 未感染，檢測陽性結果(假

24、陽性)C= 感染，檢測陰性結果(假陰性)D= 未感染，檢測陰性結果(真陰性)A+C = 真正感染HIV的總人數(shù)B+D = 真正未感染HIV的總人數(shù),4.2敏感性與陽性預示值,實驗能夠準確發(fā)現(xiàn)真實病例的能力。高敏感性的實驗很少給出假陰性的結果。高敏感性的實驗通常用于絕對需要極少的假陰性結果的情況，例如獻血檢測。 敏感性Sen = A/（A+C）×100% 陽性預示值PPV = A/(A+B) ×

25、;100%,4.3特異性與陰性預示值,實驗能夠準確定義“真實的非病例”的能力。高特異性實驗很少給出假陽性的結果，高特異性的實驗通常用于絕對需要極少的假陽性結果的情況，例如臨床診斷個體HIV感染。 特異性Spe = D/(B+D) ×100% 陰性預示值NPV = D/(C+D) ×100%,4.4影響實驗室檢測結果舉例說明,HBV,HCV,HIV,梅毒,4.5實驗室檢測中應注意的問題,1.針對感染不同時