中藥的一般毒性作用

1、第六章 中藥的一般毒性作用,毒性作用,特殊毒性：致畸、致突變、致癌,基礎(chǔ)毒性：急性毒性、長期毒性等,,均是安全性評價的重要組成部分,第一節(jié) 急性毒性與急性毒性試驗,意義：毒理學(xué)研究中最基礎(chǔ)的工作了解中藥對機體產(chǎn)生急性毒性的主要依據(jù)安全性評價的第一步工作在不同的化學(xué)品的法規(guī)程序中通常是必做試驗,一、急性毒性(acute toxicity)的概念急性毒性是指實驗動物一次或24小時內(nèi)多次接觸某一中藥后，在短期內(nèi)所產(chǎn)生的毒性作用及死亡

2、?！耙淮巍保簩?jīng)口、注射途徑給藥是指瞬間給予動物給藥，在經(jīng)呼吸道或皮膚給藥時，指一段規(guī)定時間內(nèi)使實驗動物持續(xù)接觸中藥的過程。“多次”：指當(dāng)中藥毒性很低時，一次給予最大給藥容量仍不能充分了解該中藥急性毒性作用，需要24小時內(nèi)多次給藥。國內(nèi)多數(shù)規(guī)范規(guī)定24小時內(nèi)一般不超過3次。,二、急性毒性試驗的目的1、通過測定以LD50為主的相關(guān)參數(shù)，評價中藥對機體急性毒性的大小，并根據(jù)LD50值進行急性毒性分級。2、通過觀察動物中毒表現(xiàn)，毒作用

3、強度和死亡情況，初步評價中藥對機體的毒效應(yīng)特征、靶器官、劑量-反應(yīng)(效應(yīng))關(guān)系和對人體產(chǎn)生損害的危險性。3、為后續(xù)重復(fù)劑量、亞慢性和慢性毒性研究以及其它毒理試驗提供接觸劑量設(shè)計和觀察指標(biāo)選擇依據(jù)。4、為毒理學(xué)機制研究研究提供初步線索。,三、急性毒性試驗的主要毒性參數(shù)(一)上限參數(shù)，以死亡為終點：1、絕對致死劑量或濃度(LD100或LC100)2、半數(shù)致死劑量或濃度(LD50或LC50)3、最小致死劑量或濃度(MLD、LD01

4、或LC01)4、最大非致死劑量或濃度(MNLD、LD0或LC0)(二)下限參數(shù)，以非致死性急性毒作用為終點：1、急性毒性LOAEL(觀察到有害作用最低劑量)2、急性毒性NOAEL,四、急性毒性試驗要點中藥種類不同，急性毒性試驗的程序和要求有所不同。但總體原則和要點相似。常用給藥途徑：經(jīng)口、經(jīng)呼吸道、經(jīng)皮、注射(一)經(jīng)典的急性(致死)毒性試驗1、實驗動物的選擇和處置種類：嚙齒類：一般為大、小鼠，大鼠為首選

5、 非嚙齒類：犬(Beagle犬)體重：變異不超過平均體重的20% 大鼠180~240g，小鼠18~25g， 兔2~2.5kg，犬10~15kg，豚鼠200~250g,數(shù)量及性別： 嚙齒類：每個劑量組每種性別至少5只 非嚙齒類：雌雄兼用，每組同一性別動物數(shù)應(yīng)相等 雌性應(yīng)為未孕和未產(chǎn)過仔 雌雄分籠飼養(yǎng)適應(yīng)期：

6、 必須有5~7天適應(yīng)期，剔除異常動物禁食： 經(jīng)口給藥，要求試驗前對動物禁食 大鼠過夜禁食，小鼠禁食4小時，大動物在每日上午喂食前給予受試物。給藥后繼續(xù)禁食3~4小時,2、實驗設(shè)計劑量：急性毒性試驗是否成功的基礎(chǔ)了解受試物結(jié)構(gòu)式、分子量、常溫常壓下狀態(tài)、生產(chǎn)批號、純度、雜質(zhì)與含量、溶解度、PH等根據(jù)受試物有關(guān)測試規(guī)范要求中藥成分根據(jù)與其化學(xué)結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)相似化合物毒性資料作參考以較大間隔(按幾

7、何級數(shù))給藥，找出10%~90%(或0%~100%)的致死劑量范圍在這個劑量范圍內(nèi)以合適的間距設(shè)若干劑量組，至少3組(一般5~7組)，以產(chǎn)生一系列毒效應(yīng)和死亡率不同急性毒性試驗方法，對劑量設(shè)計和動物數(shù)要求不同可不設(shè)陰性對照組,觀察：一般觀察14天，也可根據(jù)毒性反應(yīng)、癥狀發(fā)生的速度和恢復(fù)期長短而定，有必要時可延長。每天觀察至少一次，并作詳細、系統(tǒng)記錄觀察中毒體征：皮膚、被毛、眼睛和黏膜改變、呼吸、循環(huán)、自主和中樞神經(jīng)系統(tǒng)、四肢

8、活動和行為方式的變化記錄發(fā)生每種體征的時間、表現(xiàn)程度、發(fā)展過程及死亡前特征和死亡時間于給藥前、給藥后每周(每天)和死亡時測定體重所有動物均應(yīng)進行大體尸體解剖，記錄觀察到的全部病變，包括各器官有無充血、出血、水腫或其它改變，必要時作病理組織學(xué)檢查(存活24小時以上動物)。,LD50計算LD50是一個統(tǒng)計量，可報告其95%可信限計算方法：概率單位圖解法 Bliss法(較精確，新藥

9、指南推薦) 改良寇氏法 霍恩法(查表，精確度差),五、經(jīng)典急性致死性毒性試驗的局限性LD50意義(OECD，1987)：1、標(biāo)準(zhǔn)化藥物毒性強度，評價藥物對機體毒性的大小，比較不同藥物毒性的大??；2、計算藥物的治療指數(shù)，藥效學(xué)劑量和毒性劑量的距離；3、為后續(xù)的重復(fù)毒理學(xué)試驗劑量的選擇提供參考；4、通過比較不同途徑的LD50值，

10、獲得生物利用度信息；5、試驗結(jié)果可用來推測人類的致死劑量以及中毒后體征，為臨床毒副反應(yīng)監(jiān)測提供參考。,局限性：1、對于上述大多數(shù)目的，LD50值不能給予有效的信息，其可用性十分有限。a、LD50值不能等同于急性毒性，死亡僅僅是評價急性毒性的許多觀察終點之一。b、單次大劑量中毒，動物多死于CNS及心血管功能障礙，并不能很好顯示出各自的毒作用特征。c、由于死亡迅速，各種器質(zhì)性變化尚未發(fā)展，不能顯示靶器官的病變。d、對亞急性毒性劑

11、量的選擇，可用簡單的使用很少動物重復(fù)試驗代替，且能提供更多有用信息。2、 LD50沒有穩(wěn)定的數(shù)值,3、由于急性毒性劑量與臨床人用劑量相差很大，不能期望用急性毒性試驗結(jié)果來擬定人的臨床用量。4、人和動物的敏感性相差很大。對于急救醫(yī)生和中毒控制中心，LD50試驗的結(jié)果對于醫(yī)學(xué)診斷和治療意義不大。5、消耗動物多，受到廣泛的倫理學(xué)和科學(xué)批評。6、對于開發(fā)新藥，沒有必要求出精確的LD50值，所要關(guān)注的是動物出現(xiàn)毒性和劑量間的量效關(guān)系。,表

12、 急性毒性危害類別和急性毒性估計值（LD50或LC50值）,GSH第3部分健康危害：關(guān)于急性毒性危險類別和標(biāo)簽要素，2003,表 中國食品毒理急性毒性分級法(1994),七、急性毒性替代試驗,第二節(jié) 局部刺激試驗--眼刺激試驗、皮膚刺激試驗和皮膚致敏試驗,Local irritation test：目的：了解中藥對皮膚、眼睛的局部刺激性和腐蝕性 了解中藥對哺乳動物是否可以引起皮膚變態(tài)反應(yīng)及其程度內(nèi)容：眼刺激

13、、皮膚刺激試驗規(guī)定：外用、局部用藥和消毒劑均需做,一、眼刺激試驗,眼原發(fā)性刺激試驗(eye primary irritayion test)觀察終點為眼刺激和眼腐蝕。眼刺激性(eye irritayion)：眼睛前表面接觸受試物后產(chǎn)生的眼睛可逆性炎癥變化眼腐蝕性(eye corrosion)眼睛前表面接觸受試物后產(chǎn)生的眼睛不可逆性組織損傷對皮膚產(chǎn)生刺激的強酸和強堿性物質(zhì)可免做眼刺激試驗對pH接近中性的大部分中藥，其對皮膚和眼的

14、刺激性反應(yīng)結(jié)果不一定有關(guān)系，應(yīng)單獨進行眼刺激試驗,Draize試驗：方法：家兔4只，每兔一只眼滴入0.1ml受試物，另一只作為對照。滴入后可不沖洗，也可在滴入后不同時間(如4或30秒)沖洗。于滴眼24、48、72小時和4、7天時(必要時延長到21天)，以肉眼或用手提式裂隙燈檢查后眼的反應(yīng)。觀察：結(jié)膜(發(fā)紅、球結(jié)膜水腫和分泌物) 角膜(混濁程度和范圍) 虹膜(充血、腫脹和角膜周圍充血)標(biāo)準(zhǔn)：按規(guī)定分級標(biāo)準(zhǔn)評分

15、,評價：結(jié)果以主觀判斷為主，不同實驗室間有差異?？蓪⒎磻?yīng)情況拍成彩照，以統(tǒng)一。 盡管結(jié)果有差異，但經(jīng)證實兔試驗在檢測人的眼睛刺激性方面有效。 某些情況下家兔出現(xiàn)的刺激性反應(yīng)大于人,二、皮膚刺激試驗(skin primary irritation test),內(nèi)容：單次和多次皮膚刺激試驗，完整皮膚和破損皮膚試驗觀察終點：皮膚刺激性和腐蝕性皮膚激性(dermal irritation

16、)：皮膚接觸受試物后產(chǎn)生的局部可逆性的炎癥變化皮膚蝕性(dermal corrosion)皮膚接觸受試物后產(chǎn)生的局部不可逆性組織損傷皮膚刺激的表現(xiàn)：水腫、紅斑,并非所有的中藥都適宜做皮膚刺激試驗，可不做的3種情況為：①根據(jù)結(jié)構(gòu)和活性的關(guān)系及理化特性，推測可能有腐蝕性的物質(zhì)(如pH≦2或pH≧11.5)；②在急性經(jīng)皮毒性試驗顯示有很強的系統(tǒng)毒性的物質(zhì)；③在急性經(jīng)皮毒性試驗中給藥劑量達2000mg∕kg時仍未產(chǎn)生皮膚刺激體征的物質(zhì)

17、。,實驗用動物：家兔、豚鼠(成年、健康、皮膚完好) 兔>豚鼠>大鼠>人>豬方法：至少4只，實驗前24去除背脊柱兩側(cè)毛，范圍約3cm×3cm。24小時取受試物0.5ml(或0.5g)直接涂在皮膚上，用紗布及玻璃紙覆蓋，再用無刺激性膠布和繃帶加以固定，敷4小時(據(jù)人使用情況，可延長到24小時)，結(jié)束后溫水或無刺激性溶劑洗去殘留受試物。一只動物脊柱兩側(cè)可備3個去毛區(qū)，進行劑量-反應(yīng)研究，或

18、測試多種受試物。觀察：去除受試物后1、24、48小時觀察涂抹部位皮膚反應(yīng)，從無紅斑形成至有紫紅色斑并有焦痂，從無水腫至水腫隆起超過1mm，按嚴重程度評分。觀察時間的確定以足以觀察到可逆或不可逆刺激作用為準(zhǔn)，一般不超過14天。,影響因素：1)增加皮膚吸收的因素，如皮膚的完整性；2)固態(tài)受試物的物理特性，如邊緣鋒利的顆?；蜉^硬的纖維均可對皮膚產(chǎn)生機械刺激和原發(fā)性刺激反應(yīng)；3)固態(tài)受試物于干燥及溶解狀態(tài)下試驗結(jié)果不同，溶解態(tài)作用增強；

19、4)如受試物可能用于人受損皮膚，則受試動物皮膚也應(yīng)作用相似的處理；5)受試物在動物皮膚表面封閉給藥的嚴密程度；6)實驗動物的年齡與受試部位，隨著年齡增長，皮膚敏感度降低。一般選用動物背部皮膚(厚、不敏感)；7)性別不同，皮膚厚度及血流情況有差異；8)試驗人員對判別標(biāo)準(zhǔn)的掌握。,破損皮膚制備：人為將動物皮膚擦傷，不能傷及真皮產(chǎn)生出血(是否必要有爭議)評價：有時兔敏感性高于人，可產(chǎn)生假陽性 刺激性較強中藥敏感性&

20、gt;刺激性弱者 替代：2009年歐盟將禁止用動物實驗評價化妝品原料或成品 雞胚絨毛膜尿囊膜試驗(HET-CAM) 雞胚絨毛膜尿囊膜苔盼藍染色試驗(CAM-TBS) 熒光素漏出試驗(FLT) 人工表皮模型,,三、皮膚致敏試驗(skin sensitisation test),又稱致敏性接觸性皮炎(allergic contact dermatitis)： 一種對中藥免疫介導(dǎo)的皮膚反應(yīng)。

21、試驗類型： 福氏完全佐劑(FCA)法(提高動物的敏感性)和不加佐劑法動物：豚鼠方法：誘導(dǎo)接觸(induced exposure)以較低或中等濃度受試物對皮膚重復(fù)給藥(每天或每周4~5天，涂皮或皮下注射)，14天。激發(fā)階段，間隔10~14天后，用激發(fā)劑量(低于誘導(dǎo)劑量)處理未染過毒皮膚。觀察：24、48、72小時有無皮膚反應(yīng)，以反應(yīng)程度評分，比較、判斷。陽性藥：通常需用陽性對照組，用已知抗原物質(zhì)2,4-二硝基氯苯(DNCB)或 對

22、苯二胺等。,原理：中藥皮膚給藥產(chǎn)生較輕的反應(yīng)或無明顯反應(yīng)，經(jīng)過一段時間(幾周，甚至幾年)再次給藥，可引起遲發(fā)性超敏反應(yīng)(接觸性皮炎)，且在最初給藥部位以外的皮膚均可發(fā)生。在穿透皮膚的過程中，中藥作為半抗原，與體內(nèi)某些特定的載體蛋白共價結(jié)合，形成完全抗原，結(jié)合于表皮郞格罕細胞的細胞膜上或與巨噬細胞相結(jié)合，激發(fā)抗體形成及免疫記憶過程。郞格罕細胞表達免疫識別功能且在其細胞膜上有IgG和C3受體。這些細胞能吸附小分子且將它們代謝成更有活性的半抗

23、原性產(chǎn)物(超敏發(fā)生的皮膚部位郞格罕細胞增加)，此后再次接觸到同樣或相似的中藥質(zhì)，也能激發(fā)超敏反應(yīng)。皮膚敏反應(yīng)屬于Ⅳ型細胞介導(dǎo)的超敏反應(yīng)，由遲發(fā)性超敏反應(yīng)T淋巴細胞(TD)參與，反應(yīng)高峰在二次抗原接觸后24~48小時。,評價：1992年OECD化學(xué)品測試中，推薦使用豚鼠最大試驗(GPMT)和不用佐劑的Buechler試驗(BT，局部封閉敷貼法)。所有方法均不能準(zhǔn)確預(yù)測受試物對人類的致敏性，得到的是外推的參考資料。在評價中，應(yīng)先進行

24、合并使用佐劑的試驗，如呈陽性，再追加不使用佐劑的試驗。,四、其他局部刺激試驗,根據(jù)人實際可能接觸途徑，如眼、耳、鼻、口腔、呼吸道、關(guān)節(jié)腔、皮膚、直腸、陰道、靜脈、動脈、肌肉、皮下、靜脈旁和鞘內(nèi)等非口服途徑給藥，觀察用藥局部產(chǎn)生的毒性都應(yīng)進行局部刺激性試驗。 鼻黏膜、上呼吸道黏膜、直腸和陰道黏膜等試驗，一般選用每組家兔3~4只或豚鼠、大鼠5~6只，設(shè)給藥組、陰性(溶劑或賦型劑)對照組及未處理組，通過上述途徑給藥至少4小時，24小時

25、后處死動物，取出欲檢測的黏膜組織，觀察有無充血、紅腫現(xiàn)象，評價方法與皮膚刺激試驗相同，還可觀察分泌物。若有變化，需進行組織病理學(xué)檢查，然后比較分析。,第三節(jié) 長期毒性試驗,一、長期毒性試驗的概念和目的急性毒性試驗主要研究中藥急性毒性的特征和上限參數(shù)，而人類接觸中藥往往是長期反復(fù)的接觸，因此利用急性毒性試驗難以預(yù)測慢性毒性。原因：長期重復(fù)給藥時可產(chǎn)生與急性毒性試驗完全不同的毒作用；隨著年齡的增長動物機體的健康和組織易感性不一樣。,

26、發(fā)生長期毒性作用的基礎(chǔ)是蓄積作用吸收速度>代謝轉(zhuǎn)化和排泄→accumulation物質(zhì)蓄積(material accumulation)：重復(fù)多次接觸中藥后體內(nèi)可測出物質(zhì)的原形或代謝產(chǎn)物效應(yīng)蓄積或損傷蓄積(damage accumulation or effect accumulation)：長期接觸后機體內(nèi)測不出中藥的原形或代謝產(chǎn)物，卻有慢性毒性作用。,試驗?zāi)康模?、確定受試物重復(fù)給藥的毒效應(yīng)譜，毒作用特點。對在急性毒性

27、試驗中發(fā)現(xiàn)的毒作用提供新的信息，并發(fā)現(xiàn)在急性毒性試驗中未發(fā)現(xiàn)的毒作用。2、研究長期接觸受試物毒作用的靶器官。3、研究受試物重復(fù)接觸毒性作用的劑量-反應(yīng)(效應(yīng))關(guān)系，確定其觀察到有害作用的最低劑量(LOAEL)和未觀察到有害作用的劑量(NOAEL)，提出受試物的安全限量參考。4、研究長期接觸受試物毒性作用的可逆性。5、確定不同動物物種對受試物長期接觸毒性作用的差異，為將毒性研究結(jié)果外推到人提供依據(jù)。,二、 試驗方法,(一)、實驗動

28、物的選擇1、品系：一般選擇兩種動物：嚙齒類(大鼠)、非嚙齒類(犬)，經(jīng)皮毒性試驗時，可用兔或豚鼠。2、性別：一般選用雌雄各半，如臨床只用于一種性別，可選用單性別動物。3、年齡：慢性毒性試驗的目的是使實驗動物壽命的大部分時間給藥受試物，因此在生命的早期開始給藥很重要。FDA要求嚙齒類在開始時應(yīng)小于6周齡。一般6~8周齡大鼠(80~100g)，慢性可用剛離乳大鼠(50~70g)。4、動物數(shù)：大鼠、小鼠每組不少于20只，犬、猴每組不少

29、于6只，如有中期處死觀察，動物數(shù)相應(yīng)增加。5、微生物學(xué)寄生蟲學(xué)等級和飼養(yǎng)環(huán)境：參照相關(guān)規(guī)定，如GLP：清潔級以上，屏障環(huán)境飼養(yǎng)。不同項目試驗，分室進行等,(二)給藥方式(或途徑)：原則：應(yīng)盡量與臨床給藥途徑一致。 一般以經(jīng)口、經(jīng)呼吸道、經(jīng)皮1)小動物常用灌胃法和喂飼法：大鼠和小鼠建議用灌胃法，特別是在要求給藥量準(zhǔn)確較高的情況下。犬或猴可采用膠囊法或灌胃法。,2)經(jīng)呼吸道給藥：每日為2~6小時 給

30、藥柜中受試物濃度達到平衡后， 急性吸入：每天4小時； 長期毒性依實驗要求定，一般為6小時 3) 注射：有靜脈注射、靜脈點滴、肌肉注射和皮下注射。靜脈注射或點滴在長期試驗中實施困難，可用腹腔注射替代，注意無菌操作。4)每日給藥時間：保持一致。一般上午，給藥后喂飼。,(三)給藥期限：給藥頻率每日一次，連續(xù)給予。如試驗期≥3個月，也可每周6次。長期毒性試驗的期限：臨床擬用期限的2~3倍 如與致

31、癌試驗結(jié)合進行則最好接近于動物的預(yù)期生命。,(四)劑量設(shè)計和試驗分組：至少3個劑量組和1個陰性(溶媒)對照組組距2~10倍，最低不少于2倍，慢性毒性試驗劑量組距應(yīng)小于亞慢性毒性試驗。高劑量組：引起較明顯的毒性(低于10%死亡)中劑量組：觀察到有害作用的最低劑量(LOAEL)低劑量組：未觀察到有害作用劑量(NOAEL)劑量設(shè)計是關(guān)鍵也是比較困難：考慮：1)以相同物種的毒性資料作基礎(chǔ)。 可以急性毒性的閾劑量或者以LD

32、50的1∕5~∕20為最高劑量(同一品系動物，同一給藥途徑)。,2)以動物試驗藥效學(xué)基礎(chǔ)確定最低劑組水平開始設(shè)計。低劑量組原則上應(yīng)高于同一種動物藥效學(xué)試驗的有效劑量，并不使動物出現(xiàn)毒性。在低劑量組水平之上，再設(shè)計中、高劑量組劑量水平。3) 采用人擬用的最高劑量為劑量設(shè)計依據(jù)。大鼠可用人臨床擬用劑量的10、30、100倍，非嚙齒類可用5、15、50倍。當(dāng)預(yù)期受試物沒有明顯毒性時，長期毒性試驗設(shè)計至少等于人擬用劑量的最大倍數(shù)，化學(xué)藥品為3

33、0倍，中藥為50倍。,(五)觀察指標(biāo)：1、活體評價(in-life evalution)(1)一般性指標(biāo) 外觀： 體表通道、毛色等 社會行為：躁動、冷漠、探究 刺激性：好斗等 對周圍環(huán)境、代謝物、水的興趣 體重：低于對照組10%→毒效應(yīng) 有劑量-反應(yīng)關(guān)系→綜合毒性效應(yīng) 直接統(tǒng)計、增長重量或增長百分率統(tǒng)計 飼料消耗(攝食量)

34、：實際攝入量 食物利用率(每100g飼料體重增長克數(shù)) 注意：有中毒反應(yīng)，取出單籠飼養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)死亡或瀕死應(yīng)及時尸檢,(2)實驗室檢查：1)血液學(xué)指標(biāo)：RBC(計數(shù)、形態(tài)、比容、平均體積、平均血紅蛋白、平均血紅蛋白濃度)或網(wǎng)織紅細胞計數(shù)、血紅蛋白、白細胞計數(shù)、白細胞分類、血小板計數(shù)(骨髓涂片) 凝血功能：凝血酶原時間PT、活化部分凝血活酶時間APTT(或替代方法)2

35、)血液生化學(xué)指標(biāo)：天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶AST、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶ALT、堿性磷酸酶ALP、尿素氮BUN、總蛋白TP、白蛋白ALB、血糖GLU、總膽紅素T-BIL、肌酐Crea、總膽固醇T-CHO、(鈣、鉀、鈉)3)尿液分析：尿常規(guī)、外觀、體積、比重或滲透壓、PH、總蛋白質(zhì)、葡萄糖、(無機離子)4)心血管評估：非嚙齒類動物。標(biāo)準(zhǔn)Ⅱ?qū)?lián)(右前左后)ECG，分析P-R、Q-T間期、心律、心率等，血壓5)眼科學(xué)檢查：嚙齒和非嚙齒類。眼睛及其

36、毗連結(jié)構(gòu)。,(3)處死后評價(post-mortem evalution)：1) 尸體解剖：系統(tǒng)解剖，測定臟器重量，進行肉眼和病理學(xué)檢查。稱重并計算臟器系數(shù)：腦、心、肝、腎、腎上腺、胸腺、脾、睪丸、附睪、子宮、肺、甲狀腺臟器系數(shù)或臟器相對重量(relation organ weight)：某臟器濕重與體重之比值，通常是100g體重中所占重量。相對重量增加：可能有充血、水腫、腫瘤、增生或體重增長受阻相對重量降低：壞死、萎縮等。

37、2)病理學(xué)檢查：包括試驗過程中死亡的動物均應(yīng)進行仔細的肉眼觀察，可見的損傷或可疑損傷部位均應(yīng)采樣固定，作進一步病理學(xué)檢查。對照組和高劑量組應(yīng)作病理學(xué)檢查，其他組取材保存，僅在高劑量組有異常時進行檢查。,檢查內(nèi)容：嚙齒類：腦(大腦、小腦、腦干)、脊髓(頸、胸、腰段)、垂體、視神經(jīng)、胸腺、甲狀腺、甲狀旁腺、食管、唾液腺、胃、大腸、小腸、肝臟、胰腺、腎臟、腎上腺、脾臟、心臟、氣管、肺臟、主動脈、睪丸、附睪、前列腺、子宮、卵巢、乳腺、膀胱、坐

38、骨神經(jīng)、骨髓、淋巴結(jié)(給藥局部、腸系膜)、給藥局部非嚙齒類：+膽囊、眼(有異常時)吸入性毒性：整個呼吸道，包括鼻腔、咽、喉、氣管、總支氣管、肺經(jīng)皮給藥：涂敷受試物部位皮膚和相鄰皮膚(4)可逆性觀察：最后一次給藥24小時，每組活殺部分動物(2∕3)，余下動物停止給藥，繼續(xù)觀察2~4周。,(5)指標(biāo)觀察時間：一般狀況每天觀察一次，每周記錄飼料消耗和體重一次。試驗周期在3個月以內(nèi)，一般在最后一次給藥后24小時和恢復(fù)期結(jié)束時各進行

39、一次各項指標(biāo)的全面檢測。必要時，在試驗中間檢測指標(biāo)一次。試驗周期在3個月以上，應(yīng)在試驗中期活殺少量動物(高劑量組和對照組)檢測。,三、重復(fù)劑量毒理學(xué)試驗的附加終點,目的：最大限度利用動物資源，減少危險性評價所用的時間和經(jīng)費，并獲得附加資料。注意：謹慎選擇附加終點，保證有可靠的測量方法并獲得相應(yīng)機構(gòu)的認可。避免干擾研究主要目的。附加終點：遺傳毒性、神經(jīng)毒性、免疫毒性等,四、數(shù)據(jù)的處理和結(jié)果分析,(一)研究資料總匯(二)統(tǒng)計學(xué)比較