薄層色譜方法總結(jié)

1、薄層色譜方法總結(jié),1.方法原理,A. 流動(dòng)相利用毛細(xì)管力帶著樣品穿過固定相。B.樣品與固定相的相互作用是指組份在移行過程中由于偶極 - （誘導(dǎo)） - 偶極相互作用，氫鍵和范德華力的作用而產(chǎn)生不同程度的延緩、吸附、分散、離子交換和絡(luò)合等分離機(jī)理。,2.溶劑,使用的溶劑必須是“分析純”或“色譜純”，溶劑組成采用體積量比（如正丁醇 - 冰乙酸 - 水= 4：1：1，V/V/V），或者絕對(duì)量（如18ml 甲苯 + 2 ml 甲醇）。其總量應(yīng)足

2、以使TLC/HPTLC 板的浸入深度約為5mm。展開劑要求新鮮配制，不要多次反復(fù)使用，如需分層，則按要求放置分層后取需要的一相（上層或下層），備用。,一、溶劑選擇規(guī)則,二、展開劑的選擇條件,1.對(duì)所需成分有良好的溶解性2.可使成分間分開3.待測(cè)組分的Rf在0.2-0.8之間，定量測(cè)定在0.3-0.5之間4.不與待測(cè)組分或吸附劑發(fā)生化學(xué)反應(yīng)5.沸點(diǎn)適中，黏度較小6.展開后組分斑點(diǎn)圓且集中7.混合溶劑最好用新鮮配制,三、溶劑極性

3、參數(shù)表,環(huán)已烷 :-0.2、石油醚（Ⅰ類，30~60℃）、石油醚（Ⅱ類，60~90℃）、正已烷:0.0、甲苯:2.4、二甲苯:2.5、苯:2.7、二氯甲烷:3.1、異丙醇:3.9、正丁醇:3.9、四氫呋喃:4.0、氯仿:4.1、乙醇:4.3、乙酸乙酯:4.4、甲醇:5.1、丙酮:5.1、乙腈:5.8、乙酸:6.0、水:10.2,1.,一般說(shuō)，弱極性溶劑體系的基本兩相由正己烷和水組成，再根據(jù)需要加入甲醇、乙醇、乙酸乙酯來(lái)調(diào)節(jié)系統(tǒng)的極性，以

4、達(dá)到好的分離效果，適合于生物堿、黃酮和萜類等的分離。,2.,中等極性的溶劑體系由氯仿和水基本兩相組成，由甲醇、乙醇、乙酸乙酯等來(lái)調(diào)節(jié)，適合蒽醌、香豆素，以及一些極性較大的木脂素和萜類的分離。,3.,強(qiáng)極性溶劑，由正丁醇和水組成，也靠甲醇、乙醇、乙酸乙酯等來(lái)調(diào)節(jié)，適合于極性很大的生物堿類化合物的分離。,四、展開劑的選擇,物質(zhì)分子化學(xué)結(jié)構(gòu)中，通常由較極性部分和非極性部分兩部分。例如下面以苯丙烷為極性小部分，隨著極性基團(tuán)部分的增加，總體的極性

5、就增加，展開劑極性也增加了。,1.類極性較小的揮發(fā)性物質(zhì),冰片：石油醚(30～60℃)—醋酸乙酯(17:3) 厚樸酚：苯－醋酸乙酯(9:1.5)丹皮酚：環(huán)己烷－醋酸乙酯(3:1) α-香附酮：苯－醋酯乙酯－冰醋酸(92:5:5),結(jié)論：以石油醚、正構(gòu)烷和苯為體積百分?jǐn)?shù)比較大的溶劑，通常起溶解和分離化合物的作用，而用醋酸乙酯為調(diào)節(jié)Rf（比移值）的溶劑。為了減少拖尾之類其他相似相溶原則以外的影響，適當(dāng)加入添加劑，如

6、有機(jī)酸或者有機(jī)堿。,2.類極性較小的不揮發(fā)性物質(zhì),β -谷甾醇：環(huán)己烷－醋酸乙酯－甲醇(6:2.5:1)或者環(huán)己 烷－丙酮(5:2)、熊果酸：甲苯－醋酸乙酯－冰醋酸(12:4:0.5)、 齊墩果酸：氯仿－甲醇(40:1)、豬去氧膽酸：氯仿－乙醚－冰醋酸(2:2:1)、 大黃素：苯—醋酸乙酯—甲醇(15:2:0.2)或者苯—乙醇(8:1)、丹參酮ⅡA：苯-醋酸乙酯-甲酸(40:25:4)、

7、穿心蓮內(nèi)酯：氯仿-無(wú)水乙醇(9:1)靛玉紅、靛藍(lán)氯仿－乙醇(9:1)或者苯－氯仿－丙酮(5:4:1),結(jié)論：這類物質(zhì)展開劑極性比極性較小的揮發(fā)性物質(zhì)洗脫力強(qiáng)一些，因?yàn)檫@類物質(zhì)極性小的母核大，而極性大的基團(tuán)通?？梢孕纬蓺滏I，比如羧酸、羥基。以上物質(zhì)，母核分子量減小、母核結(jié)構(gòu)中不飽和健的增加（尤其是出現(xiàn)苯環(huán)），極性基團(tuán)的增加，都使極性增加，展開劑極性也增大。。這個(gè)范圍內(nèi)的物質(zhì)很多，一般展開劑大百分?jǐn)?shù)的溶劑可以從環(huán)己烷—〉甲苯—〉二甲苯—〉

8、苯—〉氯仿的順序，按照極性要求選擇。這里注意，異丙醇、正丁醇極性指數(shù)也比較小，在這范圍的化合物很少用，因?yàn)檎承源?、展開慢，造成斑點(diǎn)擴(kuò)散；另外，羥基的氫鍵作用力也有不利。調(diào)節(jié)Rf值的溶劑，從醋酸乙酯—〉甲醇—〉丙酮—〉乙醇。揮發(fā)性物質(zhì)也有很多帶羰基、羥基的，但從它的揮發(fā)性就可以明白，分子間作用力不強(qiáng)，另外，母核與石油醚、正構(gòu)烷和苯的結(jié)構(gòu)差異小，估計(jì)更容易脫離硅膠吸附，更快進(jìn)入溶劑中，而不需要通過提高展開劑的極性。,3.類極性大的小分子有機(jī)

9、酸,結(jié)論：這類物質(zhì)多數(shù)是苯乙烯母核的，這個(gè)結(jié)構(gòu)的極性本身比較大，另外有酚羥基和羧酸基團(tuán)，個(gè)別有多羥基配基。皂苷的展開劑差不多，極性大。注意甲酸通常指的是濃度85%左右的，含有水。,沒食子酸：氯仿－醋酸乙酯－甲酸(5:4:1)、阿魏酸、咖啡酸、菊苣酸、綠原酸、異綠原酸。例如下面以苯丙烷為極性小部分，隨著極性基團(tuán)部分的增加，總體的極性就增加，展開劑極性也增加了。依次為肉桂酸、阿魏酸、咖啡酸、菊苣酸、綠原酸。相應(yīng)展開劑分別為：正己烷—乙醚—冰

10、醋酸(5:5:0.1)、苯－冰醋酸－甲醇(30:1:3)、氯仿－甲醇－甲酸（9:1: 0.5）、石油醚－乙酸乙酯－甲酸（3:6: 1）、醋酸丁酯－甲酸－水(7:2.5:2.5)。,4.類含氮有機(jī)物,結(jié)論分析：由于NH2硅醇基的作用很強(qiáng)，在強(qiáng)極性展開劑加有機(jī)酸、有機(jī)堿掃尾。對(duì)于極性化合物，使用正丁醇對(duì)斑點(diǎn)擴(kuò)散影響較小，因?yàn)榛衔锖凸枘z的作用強(qiáng)。,鹽酸小檗堿：苯－醋酸乙酯－甲醇－異丙醇－濃氨試液(12：6：3：3：0.6)(氨蒸氣飽和)或正

11、丁醇－冰醋酸-水(7:1:2)、麻黃堿：氯仿－甲醇－濃氨試液(20:5:0.5)或正丁醇－冰醋酸－水(8:2:1)甘草酸銨：醋酸乙酯－甲酸－冰醋酸－水(15:1:1:2)。,五、TLC的通用顯色方法,1、紫外照射法：方便、不破壞樣品； 2、碘蒸氣法：通用性強(qiáng)，與紫外法結(jié)合靈敏度高于該兩法單獨(dú)使用； 3、熒光試劑：制造熒光背景，使原來(lái)紫外下無(wú)熒光物質(zhì)被鑒別，有熒光物質(zhì)更明顯； 4、硫酸溶劑：對(duì)絕大多數(shù)有機(jī)物有效，但有破壞性。,六

12、、薄層層析和紙色譜操作注意事項(xiàng),1、點(diǎn)樣 點(diǎn)樣器點(diǎn)樣于薄層板上,一般為圓點(diǎn)，點(diǎn)樣基線距底邊1.0～1.5cm，樣點(diǎn)直徑一般不大于2mm,點(diǎn)間距離可視斑點(diǎn)擴(kuò)散情況以不影響檢出為宜。若因樣品溶液太稀，可重復(fù)點(diǎn)樣，但應(yīng)待前次點(diǎn)樣的溶劑揮發(fā)后方可重新點(diǎn)樣，以防樣點(diǎn)過大，造成拖尾、擴(kuò)散等現(xiàn)象，而影響分離效果。點(diǎn)樣時(shí)必須注意勿損傷薄層表面,2、展開 將點(diǎn)好樣品的薄層板放入展開缸的展開劑中，浸入展開劑的深度為距原點(diǎn)5mm為宜，密封，待展開至規(guī)定距離

13、（一般為8～15cm），取出薄層板，晾干，待檢測(cè)。注：展開缸如需預(yù)先用展開劑預(yù)平衡，可在缸中加入適量的展開劑，密閉，一般保持15－30分鐘。,3、顯色與檢視 供試品含有可見光下有顏色的成分可直接在日光下檢視，也可用噴霧法或浸漬法以適宜的顯色劑顯色，或加熱顯色，在日光下檢視。有熒光的物質(zhì)或遇某些試劑可激發(fā)熒光的物質(zhì)可在356nm紫外光燈下觀察熒光色譜。對(duì)于可見光下無(wú)色，但在紫外光下有吸收的成分可用帶有熒光劑的硅膠板（如GF254板），在

14、254nm紫外光燈下觀察熒光板面上的熒光猝滅物質(zhì)形成的色譜。,理想的顯色希望靈敏度高，斑點(diǎn)顏色穩(wěn)定、斑點(diǎn)與背景間的對(duì)比度好，斑點(diǎn)的大小及顏色的深度與物質(zhì)的量成正比，在樣品組成并不完全已知的情況下，通用顯色方法顯得尤為重要，通常顯色方法主要有：,1.紫外照射法：方法、不破壞樣品2.碘蒸氣法：通用性強(qiáng)，與紫外法結(jié)合靈敏度高于該兩法單獨(dú)使用3.熒光試劑：制造熒光背景，使原來(lái)紫外下無(wú)熒光物質(zhì)被鑒別，有熒光物質(zhì)更明顯,四種體系展開劑,,,,,

15、,PE(60-90),EtAc/AcOH/n-Butanol/H2O2:1:1:1,EtAc/PE=1:2,EtAc/PE/AcOH15:5:1,,,,,,,,,,展開劑,展開劑選擇的大概原則,選擇展開劑一般要用混合溶劑：一般要有一種對(duì)所要展開樣品溶解度較大的溶劑，視樣品的極性，再選用相應(yīng)的體系。,極性小的用乙酸乙酯：石油醚極性較大的用甲醇：氯仿系統(tǒng)極性大的用甲醇：水：正丁醇：醋酸系統(tǒng)拖尾可以加入少量氨水或冰醋酸,TLC中樣