薄層色譜板的制備和使用

1、1實(shí)驗(yàn)一實(shí)驗(yàn)一薄層色譜板的制備和使用薄層色譜板的制備和使用目的要求：目的要求：通過實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步理解薄層色譜技術(shù)理論，熟悉掌握薄層色譜板的制備和使用方法。一、薄層層析的基本原理一、薄層層析的基本原理把吸附劑（固定相）均勻地鋪在一塊玻璃板上，將待分離的樣品溶液點(diǎn)加在一薄層板的一端，在密閉的容器中用適當(dāng)?shù)娜軇鲃?dòng)相）展開，由于吸附劑對(duì)不同物質(zhì)的吸附力大小不同及溶劑對(duì)不同物質(zhì)溶解分配系數(shù)不同，當(dāng)溶劑流過時(shí)，各物質(zhì)在吸附劑和溶劑之間發(fā)生連續(xù)不斷地

2、吸附，解吸附，再吸附，再解吸附。不易被吸附或易被溶劑溶解的物質(zhì)相對(duì)移動(dòng)得快一些。經(jīng)過一段時(shí)間的展開，不同的物質(zhì)被彼此分開，最后形成相互分離的斑點(diǎn)。將展開完畢的薄層板從密閉容器中取出后，應(yīng)用特定的試藥或方法將斑點(diǎn)顯色，從而達(dá)到定性和定量的目的。二、薄層板的制備二、薄層板的制備1玻璃板用一塊玻璃板涂上很薄的吸附劑，如硅膠或氧化鋁等，玻璃板要求薄厚一致，大小相同，表面光滑平整，一般玻璃只要合乎這些要求就可。如果找不到平整均一的，將舊光學(xué)照像底

3、片截成同樣大小也可以。用前先將玻璃用肥皂和水洗干凈，必要時(shí)浸泡在清洗液中，然后水洗烤干，用紗布擦光。玻璃板大小有各種規(guī)格，一般有2020、2010、205厘米，也有更小的，可根據(jù)需要自行設(shè)計(jì)。寬度要求至少能點(diǎn)開兩三個(gè)樣品，每?jī)牲c(diǎn)之間相隔至少1.5厘米，玻板長(zhǎng)度一般要滿足展開10厘米的距離。點(diǎn)樣的起點(diǎn)應(yīng)距底邊至少1.5厘米的距離。2吸附劑應(yīng)用最廣泛的為硅膠和氧化鋁，市場(chǎng)上有專供薄層色譜用的吸附劑，規(guī)格分不含粘合劑的硅膠H，氧化鋁H和含有粘

4、合劑熟石膏的硅膠G，氧化鋁G，如市售硅膠G含13％熟石膏，氧化鋁分中性、酸性、堿性三種。吸附劑的粒度范圍最好在180－200目之間，太小了流速慢，太大則影響分離效果。如不合要求，應(yīng)過篩。3薄層板的涂布最簡(jiǎn)單的涂布方法是用兩條比玻璃板厚025毫米的玻璃條或有機(jī)玻璃條（或在同樣厚度的玻璃條下粘一層膠布），將玻璃板夾住，把調(diào)好的吸附劑漿液平鋪在薄層板上，然后用一有機(jī)玻璃條或直尺，迅速均勻地向前推進(jìn)，就象推血片一樣，只要推進(jìn)的速度均勻一3開，而

5、對(duì)未加粘合劑的薄層板則必須以傾斜狀態(tài)（15度角）進(jìn)行展開。為了防止產(chǎn)生“邊緣效應(yīng)”和展開溶劑不飽和現(xiàn)象。還可采用夾心式展開容器，其方法是將薄層板的左右兩側(cè)各刮去5~10毫米，墊上條狀玻璃或塑料，蓋一塊與薄層板同樣大小的玻璃，用夾子將兩邊夾好，插入展開溶劑中進(jìn)行展開，并能取得良好效果。3顯色薄層展開后，涼干。如含粘合劑，即可直接噴顯色劑，使之顯色，有的還需經(jīng)紫外線（254nm）照射后方能顯色；對(duì)不含粘合劑的薄板，在噴顯色劑時(shí)應(yīng)盡量遠(yuǎn)離薄層

6、板，否則會(huì)連吸附劑一起吹掉，應(yīng)予以注意。四、檢樣的定性定量分析四、檢樣的定性定量分析1比移值（Rf）的測(cè)定當(dāng)樣品的薄板一端被展開，經(jīng)過毛細(xì)管作用流向另一端，樣品是按一定的比例分配在固定相與流動(dòng)相之間。并沿著溶劑流動(dòng)的方向移動(dòng)，由于樣品中各組分在兩相中分配系數(shù)不同，各組分的移動(dòng)速度也不同，經(jīng)一定距離后使各組分彼此分離。樣品各組分移動(dòng)的速率，亦即分離后在薄層板上的位置與溶劑展開前沿的距離的比值為比移植。2定性分析相同的物質(zhì)Rf值應(yīng)當(dāng)是相同的

7、，但因能影響Rf值的因素很多，要想得到與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)相同的Rf值，最好在鑒定時(shí)，將樣品與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)點(diǎn)在同一張薄層板上一同展開，根據(jù)檢樣斑點(diǎn)的Rf值與標(biāo)準(zhǔn)樣品的Rf值比較，即可確定二者是否相同，但要做到準(zhǔn)確的定性，需要兩種以上展開溶劑系統(tǒng)所得的Rf值比較判斷。3定量分析（1）目測(cè)比較法①用吸附劑（如硅膠G）涂布成厚0.25~0.5毫米，大小2020厘米的薄層板，110℃活化30分鐘，室溫冷卻。②用微量注射器（10微升）在距板底1.5厘米處，將標(biāo)