基于重組基因酵母的環(huán)境雌激素測定的影響因子和質(zhì)量控制.pdf

1、環(huán)境雌激素因能干擾人體內(nèi)分泌系統(tǒng)而備受關(guān)注。本文針對水體環(huán)境雌激素管理的需求，比選出較適合實際水體應(yīng)用且結(jié)果與人體健康相關(guān)度更大的測試方法----基于重組基因酵母的環(huán)境雌激素效應(yīng)分析方法。在此基礎(chǔ)上，通過實驗優(yōu)化了測試條件，考察了水樣特性對測定結(jié)果的影響，并加入合適的質(zhì)量控制手段，以提高測試結(jié)果的可靠性，使之真正適應(yīng)復(fù)雜水體的環(huán)境雌激素測試工作。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴重組基因酵母的復(fù)蘇與增殖可采用SD/-Trp/-Leu營養(yǎng)

2、缺陷型培養(yǎng)基，30℃振蕩培養(yǎng)，可在培養(yǎng)66 h后進行樣品暴露；暴露環(huán)節(jié)可將樣品與酵母混合液在20~35℃水浴條件下培養(yǎng)3~6 h；之后，使用有機溶劑處理法釋放β-半乳糖苷酶，35℃水浴條件下反應(yīng)60 min，0.5h后在420nm處比色分析；對于實際樣品的分析，需要加測不少于一個的稀釋水樣效應(yīng)值。⑵水樣溶解氧、色度和濁度對測定結(jié)果影響也較小；其他特性，如微生物、pH以及水體中的一些毒性物質(zhì)，由于可能會影響酵母的生長或基因表達，所以對分析

3、結(jié)果可能造成一定影響，需要進行一定的處理。⑶建立質(zhì)控措施，可以消除數(shù)據(jù)的異常變異?？梢圆迦雽χ亟M基因酵母活性的檢驗過程，以避免假陰性結(jié)果；當樣品中環(huán)境雌激素效應(yīng)濃度介于0.025 nmol/L~0.25 nmol/L（以E2計）時，歸一化后的的相對效應(yīng)與環(huán)境激素濃度呈線性正相關(guān)，其線性斜率應(yīng)該控制在4.76±1.35；此外，其中，空白建議控制在0.030±0.015之間；以0.10 nmol/L E2作為陽性對照的相對效應(yīng)值控制在49％