正交設(shè)計研究蘆筍總黃酮提取工藝【畢業(yè)論文】

1、<p><b>　　本科畢業(yè)論文</b></p><p><b>　?。?0 屆）</b></p><p>　　正交設(shè)計研究蘆筍總黃酮提取工藝</p><p><b>　　專業(yè)：應(yīng)用化學(xué)</b></p><p>　　摘 要：蘆筍素有“蔬菜之王”之美稱，富含總黃酮等

2、生物活性物質(zhì)。本文概述了植物中的活性物質(zhì)提取方法，并結(jié)合文獻資料設(shè)計四因素三水平的正交實驗研究蘆筍中總黃酮的提取工藝。實驗采用恒溫水浴法和超聲輔助法，其中，恒溫水浴熱法中，以浸提劑、浸提劑濃度、水浴溫度、水浴時間為主要因素，而超聲波輔助法中,以超聲功率、超聲時間、丙酮濃度以及提取次數(shù)為主要因素。實驗結(jié)果表明恒溫水浴提取法最佳條件為80%丙酮為浸提劑，50℃的浸提0.5個小時;超聲輔助法最佳條件為:100%的超聲功率下65%的丙酮提取兩次

3、每次三十分鐘。實驗結(jié)果也表明，超聲輔助法要明顯優(yōu)于恒溫水浴熱浸提。</p><p>　　關(guān)鍵詞：蘆筍；總黃酮；超聲輔助法；恒溫水浴法</p><p>　　Optimization of the extraction of total flavonoids from Asparagus orthogonal design </p><p>　　Abstract： A

4、sparagus with the name of “the king of vegetables”,Contains flavonoids and other biologically active substances.This paper summarized the general extraction method for the active substance in plants, literature designed

5、with four factors and three levels of asparagus orthogonal extraction process of total flavonoids. Experiment with constant temperature water extraction method and ultrasound assisted extraction, which , In the constant

6、temperature water extraction method, As the extra</p><p>　　Key words：Asparagus; Total Flavonoids; Ultrasound-assisted extraction method; Water bathing extraction method</p><p><b>　　目 錄<

7、;/b></p><p><b>　　1 引言1</b></p><p><b>　　1.1研究背景1</b></p><p>　　1.2植物體內(nèi)的活性物質(zhì)及其藥理活性1</p><p>　　1.2.1黃酮類化合物的概念1</p><p>　　1.2.2黃酮類化

8、合物的藥理活性2</p><p>　　1.3黃酮類化合物的提取方法2</p><p>　　1.4本文的主要研究思路2</p><p><b>　　2 實驗方法2</b></p><p>　　2.1實驗材料及主要儀器3</p><p>　　2.1.1實驗原料3</p>&l

9、t;p>　　2.1.2實驗試劑3</p><p>　　2.1.3實驗主要儀器3</p><p>　　2.2實驗準(zhǔn)備階段和操作分析3</p><p>　　2.2.1實驗浸提劑的配置3</p><p>　　2.2.2蘆丁標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的制作4</p><p>　　2.2.3NaNO2-Al(NO3)3-NaO

10、H光度法測定樣品中黃酮的含量4</p><p>　　2.2.4蘆筍中提取物得率的計算5</p><p>　　2.3兩種不同方法正交設(shè)計試驗5</p><p>　　2.3.1恒溫水浴提取法提取蘆筍黃酮類化合物的正交設(shè)計試驗5</p><p>　　2.3.2超聲輔助浸提法提取蘆筍黃酮類化合物的正交設(shè)計試驗5</p><

11、;p>　　2.3.3恒溫水浴法提取蘆筍中活性物質(zhì)6</p><p>　　2.3.4超聲輔助浸提蘆筍中活性物質(zhì)黃酮類化合物7</p><p><b>　　3 實驗結(jié)果7</b></p><p>　　3.1恒溫水浴提取法提取蘆筍活性物質(zhì)的結(jié)果7</p><p>　　3.2超聲輔助浸提法提取蘆筍活性物質(zhì)的結(jié)果8

12、</p><p>　　4 實驗結(jié)果討論與分析8</p><p>　　4.1恒溫水浴浸提法提取蘆筍活性物質(zhì)最佳提取條件及分析8</p><p>　　4.2超聲輔助浸提法提取蘆筍活性物質(zhì)最佳提取條件及分析9</p><p><b>　　5 展望9</b></p><p>　　6 致謝錯誤!未

13、定義書簽。</p><p><b>　　1 引言</b></p><p><b>　　1.1研究背景</b></p><p>　　蘆筍的學(xué)名是Asparagus officinalis L,英文名為Asparagus，我們它為俗稱石刁柏、龍須菜等，為百合科天門冬屬多年生宿根草本植物[1]，以抽生的嫩莖為蔬菜食用。因為蘆筍是

14、一種營養(yǎng)豐富的蔬菜，所以被稱為世界十大名菜之一，在國際市場上有“蔬菜之王”的美稱。蘆筍在我國南疆北國都有大面積種植，主要作為生鮮蔬菜，或者加工成食品罐頭，在市面出售。</p><p>　　蘆筍具有暖胃、寬腸、潤肺、止咳、利尿諸功能，對高血壓、血管硬化、心臟病、糖尿病、膀胱炎、急慢性肝炎及肝硬化有一定的輔助治療效果。在我國醫(yī)學(xué)史上早有蘆筍能治疾患的記載。明代時候的李時珍《本草綱目》中言蘆筍能夠“癭結(jié)熱氣、利小便”;

15、根稱為小百部，能潤肺鎮(zhèn)咳、祛痰、殺蟲等。早在兩千年前《神農(nóng)本草經(jīng)》上已將蘆筍列為“上品之上”，稱久服輕身益氣延年[2]。</p><p>　　據(jù)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究，蘆筍中含一種能抑制癌細(xì)胞生長的活性物質(zhì)[3]。二十世紀(jì)七十年代初，美國一位牙科醫(yī)生通過食用大量的蘆筍治好了自己的眼癌和惡性淋巴癌。1974年化學(xué)家盧茨得出蘆筍可以治療癌癥的結(jié)論。蘆筍對白血病、淋巴癌、乳腺癌、肺癌均有特殊作用。另外，蘆筍對高血脂、心臟病、高血

16、壓、動脈硬化癥也有一定的療效。蘆筍還含有蘆丁(維生素 P)、抗壞血酸(維生素C)、甘露聚糖、膽堿、精氨酸等，對維持毛細(xì)血管形態(tài)、彈性及生理功能有較好的作用。中山醫(yī)科大學(xué)腫瘤醫(yī)療研究所實驗證明，蘆筍能顯著抑制由化學(xué)致癌物質(zhì)引起的胃癌前病變。這與蘆筍中富含的部分生物活性成分有極大的關(guān)系。</p><p>　　1.2植物體內(nèi)的活性物質(zhì)及其藥理活性</p><p>　　植物體內(nèi)的生物活性物質(zhì)主要是

17、指存在于植物體內(nèi)，能與機體作用，引起各種生物效應(yīng)的功效成分，它們種類繁多，包括糖類、脂類、蛋白質(zhì)多肽類、甾醇類、生物堿、甙類、揮發(fā)油等，而植物次生代謝產(chǎn)物是生物活性成分的主要部分，它主要是除脂肪、蛋白質(zhì)等初生代謝產(chǎn)物之外的萜類、酚類和生物堿等，其中黃酮類化合物又是植物次生代謝的主要部分。黃酮類化合物在植物體內(nèi)的形成，是由葡萄糖分布經(jīng)過莽草酸途徑和乙酸-丙二酸途徑生成羥基桂皮酸和三個分子的乙酸，然后合成查爾酮，再衍變?yōu)楦黝慄S酮類化合物。&

18、lt;/p><p>　　1.2.1黃酮類化合物的概念</p><p>　　黃酮類化合物（flavonoids）是一類存在于自然界的、具有2-苯基色原酮（flavone）結(jié)構(gòu)的化合物。它們分子中有一個酮式羰基，第一位上的氧原子具堿性，能與強酸成鹽，其羥基衍生物多具黃色，故又稱黃堿素或黃酮。黃酮類化合物在植物體中通常與糖結(jié)合成苷類，小部分以游離態(tài)（苷元）的形式存在。絕大多數(shù)植物體內(nèi)都含有黃酮類化合

19、物，它在植物的生長、發(fā)育、開花、結(jié)果以及抗菌防病等方起著重要的作用。</p><p>　　最早黃酮類化合物主要是指母核為2-苯基色原酮的一類化合物，現(xiàn)在則泛指兩個苯環(huán)（A環(huán)與B環(huán)）通過中央三碳相互聯(lián)接而成的一系列化合物。根據(jù)中央三碳的氧化程度、是否成環(huán)、B環(huán)的聯(lián)接位點等特點，可將該類化合物分為多種結(jié)構(gòu)類型，包括黃酮類、黃酮醇類、二氫黃酮類、二氫黃酮醇類、異黃酮類、二氫異黃酮類、查爾酮、類橙酮類、黃烷類、花色素類、

20、雙黃酮類等。</p><p>　　1.2.2黃酮類化合物的藥理活性</p><p>　　黃酮類化合物廣泛存在于植物中。有文獻估計約有20%的中草藥含有黃酮類化合物，由此可見黃酮類資源之豐富。又因為現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明：黃酮類化合物具有降低心肌耗氧量使冠脈和腦血管流量增加抗心率，鎮(zhèn)痛，軟化血管，降血糖、血脂等作用。于此同時它還是一種天然的抗氧化劑，具有清除人體中超氧離子自由基、抗衰老、增強機體免

21、疫力的生理活性。</p><p>　　黃酮類化合物的心血管系統(tǒng)活性為例：不少治療冠心病有效的中成藥均含黃酮類化合物，研究發(fā)現(xiàn)蘆丁、槲皮素、葛根素以及人工合成的立可定（recordil）等均有明顯的擴冠作用；槲皮素、蘆丁、金絲桃苷、葛根素、燈盞花素、葛根總黃酮、銀杏葉總黃酮對缺血性腦損傷有保護作用；金絲桃苷、水飛薊素、木犀草素、沙棘總黃酮對心肌缺血性損傷有保護作用；銀杏葉總黃酮、葛根素、大豆苷元等對心肌缺氧性損傷有

22、明顯保護作用。此外，沙棘總黃酮、苦參總黃酮、甘草黃酮（主要為甘草素和異甘草素）具有抗心律失常作用。</p><p>　　1.3黃酮類化合物的提取方法</p><p>　　從植物體中提取生物活性物質(zhì)，是獲得天然抗氧化劑、天然色素的主要途徑，目前對植物體中的黃酮類化合物的提取方法主要包括：超臨界萃取法[4]、物理場強化法、雙水相萃取技術(shù)法、液膜分離法和反膠團萃取法等。趙曉紅[5]通過正交試驗確

23、定熱水浸提法、水- 醇浸提法、超聲輔助萃取法提取北京地區(qū)早園竹葉黃酮的最佳提取條件, 并比較3 種不同方法的提取效率。結(jié)果表明, 超聲提取方法在最優(yōu)提取條件下提取率高于其他兩種方法。蘆筍活性物質(zhì)常用的提取方法主要為溶劑浸提為主，通常采用堿性溶液進行分步提取。甲醇和乙醇是最常用的蘆筍活性物質(zhì)提取溶劑,高濃度的醇(如90%左右)適宜于提取苷元,60%左右濃度的乙醇或甲醇水溶液適宜于提取苷類。</p><p>　　比較

24、上述提取法的優(yōu)缺點，選擇操作簡單、成本低、效果好的方法為主，并根據(jù)正交試驗設(shè)計原則，設(shè)計正交試驗表，分析各個因素水平對提取產(chǎn)物的影響選擇，最優(yōu)的條件組合。以便生產(chǎn)出具有治療特異性高、高效、低毒的藥品和天然保健品，同時有利于探索發(fā)現(xiàn)研究先進的提取分離方法，加速植物資源的有效開發(fā)利用。這與蘆筍中富含的部分生物活性成分有極大的關(guān)系。</p><p>　　1.4本文的主要研究思路</p><p>

25、　　綜合文獻資料可得，從不同植物，如豌豆[6]，松針[7]，葡萄[8]，翠雀[9]等提取植物體活性物質(zhì)的以浸提法為主。使用超聲波輔助浸提法提取是一種更為快速、有效的提取方法，而在蘆筍生物活性成分提取研究中對該方法鮮有報道。因此，結(jié)合現(xiàn)有實驗室條件，本實驗嘗試采用超聲波輔助浸提法對蘆筍中的活性物質(zhì)進行提取。參考黃愛萍[10]，丁紅霞[11]，曾熊芳[12]等人選取不同提取因素的研究，設(shè)計四因素三水平的正交表，選取試驗最佳組合；同時也對水浴

26、浸提法做四因素三水平的正交試驗，確定浸提法提取蘆筍中活性物質(zhì)的最佳實驗條件，比較兩種方法的異同。</p><p><b>　　2 實驗方法</b></p><p>　　2.1實驗材料及主要儀器</p><p><b>　　2.1.1實驗原料</b></p><p>　　新鮮蘆筍，同一批次購于杭州市翠

27、苑農(nóng)貿(mào)市場。</p><p>　　將新鮮蘆筍洗凈，切成顆粒，曬干，在60℃下和80℃下烘干至恒重。將烘干后的蘆筍粒分別在粉碎機中粉碎，過80目篩。過篩后的蘆筍粉別分別放入棕色廣口瓶內(nèi)避光保存，備用，并貼上標(biāo)簽以防止混淆。</p><p><b>　　2.1.2實驗試劑</b></p><p>　　99.5%甲醇；95%乙醇；99.5%丙酮（以上

28、均為分析純）；亞硝酸鈉；硝酸鋁；氫氧化鈉。</p><p>　　2.1.3實驗主要儀器 </p><p>　　725型紫外可見光分光光度計，上海光譜儀器有限公司；</p><p>　　DZF-6021型真空干燥箱，上海誼恒實驗儀器有限公司；</p><p>　　KQ-500DE型數(shù)控超聲波清洗器 ，昆山市超聲儀器有限公司；</p>

29、<p>　　微型高速萬能試樣粉碎機，河北省黃驊市新興電器廠；</p><p>　　HHS型電熱恒溫水浴鍋，上海博訊實業(yè)有限公司；</p><p>　　RE-52 AA型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，上海嘉鵬科技有限公司；</p><p>　　METTLERAT-200型電子天平，Edward Keller（Philippines）Inc；</p><

30、p>　　2.2實驗準(zhǔn)備階段和操作分析</p><p>　　2.2.1實驗浸提劑的配置</p><p>　　配置50%的甲醇溶液500ml：250ml的99.5%的甲醇加入250ml的蒸餾水，在棕色瓶盛放且置于冷暗處。</p><p>　　配置65%的甲醇溶液500ml：325ml的99.5%的甲醇加入175ml的蒸餾水，在棕色瓶盛放且置于冷暗處。</p&

31、gt;<p>　　配置80%的甲醇溶液500ml：400ml的99.5%的甲醇加入100ml的蒸餾水，在棕色瓶盛放且置于冷暗處。</p><p>　　配置50%的乙醇溶液500ml：284ml的95%的乙醇加入216ml的蒸餾水，在棕色瓶盛放且置于冷暗處。</p><p>　　配置65%的乙醇溶液500ml：310ml的95%的乙醇加入190ml的蒸餾水，在棕色瓶盛放且置于冷

32、暗處。</p><p>　　配置80%的乙醇溶液500ml：421ml的95%的乙醇加入79ml的蒸餾水，在棕色瓶盛放且置于冷暗處。</p><p>　　配置50%的丙酮溶液500ml：250ml的99.5%的丙酮加入250ml的蒸餾水，在棕色瓶盛放且置于冷暗處。</p><p>　　配置65%的丙酮溶液500ml：325ml的99.5%的丙酮加入175ml的蒸餾水

33、，在棕色瓶盛放且置于冷暗處。</p><p>　　配置80%的丙酮溶液500ml：400ml的99.5%的丙酮加入100ml的蒸餾水，在棕色瓶盛放且置于冷暗處。</p><p>　　配置5%亞硝酸鈉溶液100ml：5克的亞硝酸鈉加入95ml的蒸餾水，在干凈的廣口瓶盛放且置于干燥處。</p><p>　　配置10%的硝酸鋁溶液100ml：10克的硝酸鋁加入90ml的蒸

34、餾水，在干凈的廣口瓶盛放且置于干燥處。</p><p>　　配置4%的氫氧化鈉溶液100ml：4克的氫氧化鈉加入96ml的蒸餾水，放在干凈的瓶子里。</p><p>　　2.2.2蘆丁標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的制作</p><p>　　準(zhǔn)確稱取120℃干燥并恒重的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品25mg,加入75 %的乙醇溶液80ml,加熱溶解,冷卻后用75%乙醇定容至100ml ,搖勻備用,配置成

35、濃度為0.25mg/ml的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液。采用NaNO2-Al (NO3)3-NaOH光度法制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。精密吸取0、2ml、3ml、4ml、5ml、6ml、7ml上述蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液,分別放置在25ml的容量瓶中,加5 %亞硝酸鈉1ml 搖勻放置6min,加10 %的硝酸鋁1ml搖勻放置6min,加4%的氫氧化鈉10ml,用75%的乙醇釋至刻度,放置15min后測吸光度。以吸光度為縱坐標(biāo)、蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液濃度為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，如圖1-1。&

36、lt;/p><p>　　圖1-1蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線</p><p>　　由蘆丁標(biāo)準(zhǔn)工作曲線可得蘆丁標(biāo)準(zhǔn)工作二元方程為y=95.167x-6.2611，其中R2=0.9998，其中y代表濃度，單位為（μg/ml），x代表吸光度。</p><p>　　2.2.3NaNO2-Al(NO3)3-NaOH光度法測定樣品中黃酮的含量</p><p>　　使用移液管

37、準(zhǔn)確移取1ml已經(jīng)定容好了的提取物置于25ml容量瓶中，加5%的亞硝酸鈉1ml搖勻然后放置6min,待達到時間后加入10%的硝酸鋁1ml 搖勻并放置6min,達到規(guī)定時間后加4%的氫氧化鈉10ml,用90%的乙醇釋至刻度,放置15min至溶液穩(wěn)定后置510nm處，用提取液作空白對照測吸光度，然后根據(jù)蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線得到濃度為C，即為樣品中黃酮類化合物的含量。</p><p>　　2.2.4蘆筍中提取物得率的計算<

38、;/p><p>　　得率計算公式：Y=C×V×25ml/1ml×0.001mg/μg/M. （2—1）</p><p>　　其中Y—是得率，單位為mg（總）/g（樣）;C—1ml提取液經(jīng)過NaNO2-Al(NO3)3-NaOH光度法測得的吸光度在標(biāo)準(zhǔn)曲線中所對應(yīng)的濃度，單位為μg/ml；V—濾液旋蒸后定容體積，單位為ml；M—蘆筍粉末的質(zhì)量，單

39、位為g。</p><p>　　2.3兩種不同方法正交設(shè)計試驗</p><p>　　2.3.1恒溫水浴提取法提取蘆筍黃酮類化合物的正交設(shè)計試驗</p><p>　　結(jié)合文獻[1,4]的研究思路和文獻因素水平，本實驗選取了四種水浴的影響因素，分別為浸提劑、浸提劑濃度、水浴溫度和水浴時間。選取3個水平，設(shè)計恒溫水浴提取法因素水平表，見表2-1。</p>&l

40、t;p>　　表2-1恒溫水浴法提取蘆筍中黃酮類化合物因素水平表</p><p>　　根據(jù)水浴提取反應(yīng)因素水平表，選定水浴的各個因素按正交表L9（34）設(shè)計四因素三水平的正交試驗，見表2-2。</p><p>　　表2-2恒溫水浴法提取蘆筍中黃酮類化合物實驗正交設(shè)計表</p><p>　　2.3.2超聲輔助浸提法提取蘆筍黃酮類化合物的正交設(shè)計試驗</p&g

41、t;<p>　　結(jié)合文獻[1,4]的研究思路和文獻因素水平，本實驗選取了四種超聲波的影響因素，分別為超聲功率、超生時間、丙酮濃度、提取次數(shù)四個因素。選取3個水平，設(shè)計超聲輔助浸提法因素水平表，見表2-3。</p><p>　　表2-3超聲輔助浸提法提取蘆筍中黃酮類化合物因素水平表</p><p>　　根據(jù)超聲輔助浸提反應(yīng)因素水平表，選定超聲的各個因素按正交表L9（34）設(shè)計四

42、因素三水平的正交試驗，見表2-4。</p><p>　　表2-4超聲輔助浸提法提取蘆筍中黃酮類化合物實驗正交設(shè)計表</p><p>　　2.3.3恒溫水浴法提取蘆筍中活性物質(zhì)</p><p>　　準(zhǔn)確稱取9份1.5g的蘆筍干粉分別置于容積均為100ml 燒瓶內(nèi) ，按固定物料液比1：15 ，對應(yīng)表2-4加入相應(yīng)濃度的相應(yīng)溶劑，浸置十二小時,次日再根據(jù)條件進行9組實驗。

43、定時取出，抽濾,用提取劑適當(dāng)洗滌濾渣，并抽濾次數(shù)得到提取液。經(jīng)減壓蒸餾濃縮，待其冷卻至室溫后，用提取液定容至25ml，然后再從9份提取液中用移液管各移取1ml已經(jīng)定容了的提取物分別置于25ml容量瓶中，均同時加5%的亞硝酸鈉1ml，搖勻放置6min,加10 %的硝酸鋁1ml，搖勻放置6min,加4%的氫氧化鈉10ml,再分別用提取劑釋至刻度,放置15min 至溶液穩(wěn)定后在510nm處，以提取液作空白對照，用1cm比色皿測吸光度，得到相應(yīng)

44、的吸光度值，并對照圖1-1得到各組浸提劑的濃度，最后根據(jù)公式2—1求得得率。</p><p>　　2.3.4超聲輔助浸提蘆筍中活性物質(zhì)黃酮類化合物</p><p>　　準(zhǔn)確稱取9份1.5g的蘆筍干粉分別置于容積均為100ml燒瓶內(nèi)，按固定物料液比1：15，對應(yīng)表2-4加入相應(yīng)濃度的相應(yīng)溶劑，浸置十二小時,次日再根據(jù)條件進行9組實驗。定時取出，抽濾,用提取劑適當(dāng)洗滌濾渣，并抽濾次數(shù)得到提取液

45、。經(jīng)減壓蒸餾濃縮，待其冷卻至室溫后，用提取液定容至25ml，然后再從9份提取液中用移液管各移取1ml已經(jīng)定容了的提取物分別置于25ml容量瓶中，均同時加5%的亞硝酸鈉1ml，搖勻放置6min,加10 %的硝酸鋁1ml，搖勻放置6min,加4%的氫氧化鈉10ml,再分別用提取劑釋至刻度,放置15min至溶液穩(wěn)定后在510nm處，以提取液作空白對照，用1cm比色皿測吸光度，得到相應(yīng)的吸光度值，并對照圖1-1得到各組浸提劑的濃度，最后根據(jù)公式

46、2—1求得得率。</p><p><b>　　3 實驗結(jié)果</b></p><p>　　3.1恒溫水浴提取法提取蘆筍活性物質(zhì)的結(jié)果</p><p>　　根據(jù)表2-2的實驗數(shù)據(jù)條件以及2.3.2的步驟操作，得結(jié)果如表3-1。表中總黃酮得率的計算采用公式為2-1。</p><p>　　表3-1恒溫水浴提取法提取蘆筍活性物質(zhì)結(jié)

47、果數(shù)據(jù)表</p><p>　　注：Ii、Ⅱi、Ⅲi為I因素內(nèi)“i”水平對應(yīng)值之和，即各因素條件下相對應(yīng)的黃酮類化合物得率的總值。Ii=I1+I2+I3，Ⅱi=Ⅱ1+Ⅱ2+Ⅱ3，Ⅲi=Ⅲ1+Ⅲ2+Ⅲ3;極差表明因子對結(jié)果的影響幅度。(單位：mg/ml.)</p><p>　　3.2超聲輔助浸提法提取蘆筍活性物質(zhì)的結(jié)果</p><p>　　根據(jù)表2-4實驗數(shù)據(jù)條件以及2

48、.3.4步驟操作，得結(jié)果如表3-2。表中總黃酮得率的計算采用公式2-1。</p><p>　　表3-2超聲法輔助浸提法蘆筍活性物質(zhì)黃酮類化合物結(jié)果數(shù)據(jù)表</p><p>　　注：Ii、Ⅱi、Ⅲi為I因素內(nèi)“i”水平對應(yīng)值之和，即各因素條件下相對應(yīng)的黃酮類化合物得率的總值。Ii=I1+I2+I3，Ⅱi=Ⅱ1+Ⅱ2+Ⅱ3，Ⅲi=Ⅲ1+Ⅲ2+Ⅲ3;極差表明因子對結(jié)果的影響幅度。(單位：mg/ml

49、.)</p><p>　　4 實驗結(jié)果討論與分析</p><p>　　4.1恒溫水浴浸提法提取蘆筍活性物質(zhì)最佳提取條件及分析</p><p>　　由表3-1水浴法提取蘆筍中的活性物質(zhì)黃酮類化合物含量的結(jié)果數(shù)據(jù)表知道，水浴浸提法對蘆筍中的活性物質(zhì)黃酮類化合物提取的四個因素影響強度：A＞B＞C＞D，即浸提劑>提取劑濃度>水浴溫度>水浴時間，浸提劑為最顯

50、著影響因素，其次是浸提劑的濃度為第二影響因素，然后浸提溫度為第三影響因素，浸提時間的影響強度最弱。在植物活性成分的提取實驗中，浸提劑往往是主要的影響因素，本實驗選取的三種浸提劑中，甲醇和乙醇為極性溶劑，有助于極性的活性物質(zhì)的提取，而丙酮為非極性提取劑，有助于非極性活性物質(zhì)的提取，實驗結(jié)果表明，丙酮為最佳提取劑，說明蘆筍中活性物質(zhì)可能以非極性的黃酮類化物為主，如類黃酮等，而且最佳提取濃度為80%，也可以說明本次實驗提取蘆筍中的活性物質(zhì)主要

51、以非水溶性提取物為主。</p><p>　　根據(jù)極差法處理正交實驗結(jié)果可知，本次恒溫水浴浸提蘆筍的活性物質(zhì)的最佳條件為：A3 B3 C1 D1，即以丙酮為浸提劑，在80%的濃度下，50℃的浸提溫度熱回流0.5個小時，此時可以得到最大濃度的提取液，為恒溫水浴提取法提取蘆筍活性物質(zhì)黃酮類化合物最佳工藝條件。</p><p>　　4.2超聲輔助浸提法提取蘆筍活性物質(zhì)最佳提取條件及分析</p

52、><p>　　由恒溫水浴熱浸提法可知，蘆筍中可能富含非極性的活性物質(zhì)，因此，在超聲輔助浸提法中，正交設(shè)計中的因素不再對提取劑進行實驗，直接選定丙酮為提取劑，選取了超聲功率、超聲時間、浸提劑濃度以及提取次數(shù)為正交設(shè)計的四個因素。</p><p>　　根據(jù)表3-2超聲法輔助浸提法蘆筍活性物質(zhì)黃酮類化合物方差分析的結(jié)果數(shù)據(jù)表知道，超聲法輔助浸提法對蘆筍中的活性物質(zhì)黃酮類化合物提取的四個因素影響強度：

53、A＞D＞C＞B，即超聲功率＞提取次數(shù)＞丙酮濃度＞超聲時間，超聲功率為四個因素中影響最明顯的因素，其次是提取次數(shù)為第二明顯的影響因素，超聲時間和丙酮溶劑的濃度相對影響強度比較弱，而超聲時間的影響強度最差。其最佳提取條件為A3 D2 C2 B3，即在100%的超聲功率下，提取次數(shù)為兩次，以65%的丙酮為提取劑，浸提時間三十分鐘為超聲法輔助浸提法提取蘆筍活性物質(zhì)黃酮類化合物最佳工藝條件。</p><p>　　超聲輔助提

54、取時，可以有效破除細(xì)胞壁和細(xì)胞膜，使植物細(xì)胞中的生物活性成分更充分的被提取，因此超生功率是影響該實驗方法的主要因素，功率越大，越有助于提取，另外多次提取也更加有利于提取，但是不是提取次數(shù)越多越好，實驗結(jié)果表明，提取兩次為最佳條件，由此可說明，在超聲輔助提取法中，提取效率最高的為前兩次。另外相比水浴浸提時，最佳提取條件中，丙酮濃度有所下降，降至65%，這可能是由于在超聲提取時，超聲的作用，使得一些易溶于水的的活性物質(zhì)也更容易被提取出來，因

55、此，使得最佳的提取濃度比水浴也有所下降。</p><p><b>　　5 展望</b></p><p>　　通過實驗分析比較得出超聲波輔助浸提法對蘆筍活性物質(zhì)黃酮類化合物的提取，總體的得率大于恒溫水浴浸提法的黃酮類化合物的得率。因為超聲波輔助浸提法是因為通過超聲波來打破分子細(xì)胞，破壞分子細(xì)胞的細(xì)胞壁使蘆筍細(xì)胞中的活性物質(zhì)黃酮類化合物更加充分的溶解到有機溶劑中，而恒溫水

56、浴浸提法是蘆筍細(xì)胞中的活性物質(zhì)黃酮類化合物通過植物細(xì)胞壁的滲透作用然后溶解到有機溶劑中[13]。因此，如果僅考慮提取蘆筍中活性物質(zhì)黃酮類化合物的產(chǎn)率的話，采用超聲波輔助浸提法比恒溫水浴浸提法提取更有效益。</p><p>　　除了恒溫水浴浸提法和超聲波輔助浸提法，還有超臨界CO2浸提法和微波輔助浸提法[14]等。但是由于實驗條件和時間所限，本文沒有對超臨界CO2浸提法和微波輔助浸提法進行分析、實驗、研究、驗證，也

57、沒有對實驗所得的在最佳提取條件進行進一步優(yōu)化。實驗可進一步對最佳條件進行單因素或者響應(yīng)面分析。</p><p>　　總之，蘆筍生物活性物質(zhì)的最佳提取條件研究，為蘆筍的綜合利用和進一步開發(fā)提供了一定理論依據(jù)和參考價值。</p><p><b>　　參考文獻：</b></p><p>　　[1] 趙曉明.蘆筍皂苷的提取純化及其糖基組成[J].生物工

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