蜜蜂球囊菌侵染蜜蜂幼蟲的生物學(xué)與病理學(xué)研究.pdf

1、蜜蜂白堊病(Bee Chalkbrood Disease)是由蜜蜂球囊菌(Ascosphaera apis)侵染而引起蜜蜂幼蟲死亡的真菌性病害。目前國內(nèi)外對蜜蜂白堊的研究主要集中在病原的分類學(xué)鑒定、生物學(xué)特性、培養(yǎng)條件、流行規(guī)律以及選育抗病品種等方面,其致病機理尚未清楚。由于缺乏針對性的防治措施,使得白堊病成為嚴重危害養(yǎng)蜂生產(chǎn)的一種頑固性病害。為探究蜜蜂球囊菌侵染機制,為其防治提供理論依據(jù),本研究利用實驗室建立起來的人工飼喂蜜蜂幼蟲的技

2、術(shù)體系,接種蜜蜂球囊菌孢子,研究蜜蜂幼蟲的敏感日齡及低溫處理的影響。結(jié)果表明:只要幼蟲取食了足夠的孢子量,菌絲均在幼蟲7日齡末至8日齡從幼蟲末端穿出體表,是否低溫處理對球囊菌侵染的影響并不明顯,且抗病蜂群與患病蜂群幼蟲個體在抗病力上并無明顯差異。球囊菌對蜜蜂幼蟲的侵染與蜜蜂的發(fā)育主要足從幼蟲到蛹的變態(tài)發(fā)育有關(guān)。
　　 對球囊菌侵染幼蟲的病理學(xué)切片研究表明:在整個幼蟲期,幼蟲取食的球囊菌孢子在中腸內(nèi)萌發(fā),但生長緩慢。至幼蟲進入預(yù)蛹

3、期,蜜蜂幼蟲的中后腸開始連通,圍食膜包裹著食物殘渣及球囊菌菌絲往后蠕動進入后腸。此時幼蟲體內(nèi)組織正在進行重組,體細胞降解成透明狀小顆粒,腸道細胞已降解只剩下基質(zhì)層,腸道中的菌絲透過破損的圍食膜和基質(zhì)層侵入體腔中迅速大量生長,經(jīng)過一天的營養(yǎng)生長,菌絲即充滿血體腔,從幼蟲軀體后部穿出體壁。
　　 從正常的蜜蜂幼蟲和接種蜜蜂球囊菌孢子的染病蜜蜂幼蟲體內(nèi)采集血淋巴進行SDS-PAGE電泳和蛋白酶、酯酶、淀粉酶的活性染色分析。結(jié)果顯示:處

4、于從幼蟲到蛹變態(tài)發(fā)育時期的正常蜜蜂幼蟲血淋巴內(nèi)蛋白含量豐富,蛋白主要由分子量較高的4種組分組成;而染病蜜蜂幼蟲則蛋白含量極低,且蛋白主要由分子量小于30kDa的小蛋白組成,血淋巴主要蛋白明顯被降解。酶活染色能檢測到蜜蜂球囊菌多種蛋白酶和酯酶的活性,但未檢測出淀粉酶活性。說明蜜蜂球囊菌在蜜蜂幼蟲體內(nèi)的侵入、生長與這兩種胞外酶的作用有關(guān)。這兩種酶有助于菌絲穿透蜜蜂幼蟲腸道基質(zhì)層,并將蜜蜂幼蟲的大分子物質(zhì)降解為蜜蜂球囊菌可以利用的小分子物質(zhì),