鏈脲霉素誘導(dǎo)糖尿病大鼠的早期視覺(jué)電生理改變

1、<p>　　鏈脲霉素誘導(dǎo)糖尿病大鼠的早期視覺(jué)電生理改變</p><p>　　【關(guān)鍵詞】 糖尿病視網(wǎng)膜病 </p><p>　　關(guān)鍵詞: 糖尿病視網(wǎng)膜病;視網(wǎng)膜電描記術(shù);鏈脲霉素;大鼠 </p><p>　　摘 要:目的 觀察糖尿病大鼠病程早期的視網(wǎng)膜電圖變化. 方法 按照國(guó)際臨床視覺(jué)電生理學(xué)會(huì)的標(biāo)準(zhǔn)化方案，采用REPIport系統(tǒng)和銀-氯化銀角膜電

2、極以及不銹鋼針狀電極對(duì)鏈脲霉素誘導(dǎo)的糖尿病大鼠模型進(jìn)行2wk的暗適應(yīng)視網(wǎng)膜電圖（scot-ERG）、振蕩電位（OPs）、明適應(yīng)視網(wǎng)膜電圖（phot-ERG）和30Hz閃爍反應(yīng)記錄（30Hz flicker）. 結(jié)果 大鼠scot-ERG的a波和b波和OPs的O2 波的潛伏期，在1wk時(shí)［a波（27.2±1.9）ms，b波（72±6）ms，O2 波（38±4）ms］，與未打藥時(shí)相比［a波（24.1±

3、;1.2）ms，b波（64.6±2.9）ms，O2 波（34.1±1.6）ms］，顯著延長(zhǎng)，2wk時(shí)潛伏期繼續(xù)增加［a波（28.4±1.9）ms，b波（76±10）ms，O2 波（41±6）ms］，幅值一直沒(méi)有顯著改變. 結(jié)論 視覺(jué)電生理學(xué)檢查特別是scot-ERG和OPs波是早期診斷糖尿病視網(wǎng)膜病的可靠手段. </p><p>　　Keywords:diabe

4、tic retinopathy;electroretinography;strep-tozotocin;rats </p><p>　　Abstract:AIM To observe early electophysiological changes in STZ-induced diabetic rats.METHODS According to In-ternational Society for Clini

5、cal Visual Electrophysiology’s standard program，we recorded the scotopic electroretino-graph（scot-ERG），oscillatory potentials（OPs），photopic electroretinograph（phot-ERG）and30Hz flicker response in diabetic rats for2weeks，

6、by using REPIport system，Ag-AgCl corneal contact electrode and stainless steel needle elec┐trode.RESULTS At1week after the onset of diabetes</p><p><b>　　0 引言 </b></p><p>　　糖尿病10～15a后

7、，約半數(shù)患者出現(xiàn)視網(wǎng)膜病變［1］ ，后者是致盲的重要原因之一［2］ .多年來(lái)，對(duì)糖尿病視網(wǎng)膜病的診斷、治療以及研究多集中于其血管病變上，而對(duì)神經(jīng)組織病變研究甚少.我們采用臨床視覺(jué)電生理學(xué)檢查技術(shù)對(duì)糖尿病大鼠視網(wǎng)膜電生理功能的早期變化進(jìn)行了觀察. </p><p><b>　　1 材料和方法 </b></p><p>　　1.1 材料 健康成年封閉群雄性SD大鼠10只

8、（由第四軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供）.約8wk齡，體質(zhì)量200～250g.外眼和檢眼鏡檢查屈光間質(zhì)清晰，眼底無(wú)改變.予以12h明-暗交替光照，不限食水，室溫18℃～23℃條件下飼養(yǎng).鏈脲霉素（streptozotocin，STZ），美國(guó)Sigma公司產(chǎn)品.美國(guó)Lifescan公司One Touch血糖儀.尿糖試紙帶，粵藥器監(jiān)［準(zhǔn)］字99第240452號(hào)，廣州市越秀東方新科技研究所研制. </p><p><

9、b>　　1.2 方法 </b></p><p>　　1.2.1 STZ誘導(dǎo)糖尿病大鼠模型的建立 STZ冰浴溶解于0.1mmol&#12539;L-1 的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液中，配成10g&#12539;L-1 溶液，pH調(diào)為4.5，按55mg&#12539;kg-1 ip.給藥前大鼠禁食水12h.建模標(biāo)準(zhǔn):給藥后48h剪尾法取血測(cè)其血糖、尿糖，血糖&gt;16

10、.7mmol&#12539;L-1 ，尿糖 以上，出現(xiàn)多尿的大鼠認(rèn)為建模成功.以后每周測(cè)1次血糖、尿糖及質(zhì)量. </p><p>　　1.2.2 視覺(jué)電生理學(xué)實(shí)驗(yàn)方法 暗適應(yīng)12h以上的大鼠，采用速眠新注射液（批號(hào):吉牧防便字［1990］47號(hào)，由長(zhǎng)春解放軍農(nóng)牧大學(xué)獸醫(yī)研究所提供）ip（0.75mL&#12539;kg-1 ）麻醉.將大鼠固定于自制實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，安放記錄電極、參考電極及接地電極.記錄

11、電極由直徑為0.2mm的銀絲制成，中間為環(huán)形，兩端各留一柄以便于固定，使用前電鍍氯化.參考電極和接地電極都用不銹鋼針制成.實(shí)驗(yàn)前20min用5g&#12539;L-1 托品酰胺散瞳，再在角膜表面滴加10g&#12539;L-1 甲基纖維素.記錄電極固定于角膜表面，參考電極位于同側(cè)頰部，接地電極置于尾部，對(duì)側(cè)眼遮蓋.采用RETIport系統(tǒng)（Roland Consult，德國(guó)），根據(jù)國(guó)際臨床視覺(jué)電生理學(xué)會(huì)標(biāo)準(zhǔn)化方案進(jìn)行暗適

12、應(yīng)視網(wǎng)膜電圖（scotopic electroretinograph，scot-ERG）、振蕩電位（oscillatory potentials，OPs）、明適應(yīng)視網(wǎng)膜電圖（photopic electroretinograph，phot-ERG）和30Hz閃爍反應(yīng)（30Hz-flicker response</p><p><b>　　2 結(jié)果 </b></p><p&

13、gt;　　2.1 糖尿病大鼠情況 實(shí)驗(yàn)前大鼠血糖為（4.3±1.4）mmol&#12539;L-1 ，給藥后1wk為（19.5±2.6）mmol&#12539;L-1 ，2wk為（19.0±2.8）mmol&#12539;L </p><p>　　-1 ，較實(shí)驗(yàn)前明顯升高（P&lt;0.01）.大鼠體質(zhì)量給藥前（236±21）g，給藥1wk

14、后降至（225±14）g，給藥后2wk時(shí)明顯降低為（203±12）g（P&lt;0.01）.大鼠有明顯的多飲、多食、多尿的癥狀，尿糖為～. </p><p>　　2.2 視網(wǎng)膜電圖（ERG） </p><p>　　2.2.1 scot-ERG 在給藥1wk后，各種光強(qiáng)下誘導(dǎo)的ERG a，b波幅值有升高的趨勢(shì)，峰潛時(shí)則明顯延長(zhǎng);2wk后則波幅值較1wk時(shí)降低，

15、低于實(shí)驗(yàn)前，峰潛時(shí)則進(jìn)一步延長(zhǎng)（Tab1，2，F(xiàn)ig1）. </p><p>　　2.2.2 振蕩電位（OPs） 振蕩電位在1wk時(shí)其潛伏期較注藥前有顯著延長(zhǎng)（P&lt;0.01），2wk時(shí)潛伏期亦有延長(zhǎng)（P=0.014），幅值有降低的趨勢(shì)，但未達(dá)到顯著性變化（Tab3，F(xiàn)ig2）. </p><p>　　2.2.3 phot-ERG和30Hz閃爍反應(yīng) 在給藥后1wk和2wk時(shí)

16、，phot-ERG和30Hz閃爍反應(yīng)各波幅 值有降低、峰潛時(shí)有延長(zhǎng)的趨勢(shì)，但變異較大，只有phot-ERG b波和30Hz閃爍反應(yīng)各波的潛伏期有顯著增加（P&lt;0.01，Tab4）. </p><p>　　表1 糖尿病大鼠暗適應(yīng)ERG各波的幅值　略 </p><p>　　表2 糖尿病大鼠暗適應(yīng)ERG各波的潛伏期　略 </p><p><b>　

17、　圖1 －圖2 略 </b></p><p><b>　　3 討論 </b></p><p>　　糖尿病視網(wǎng)膜病變的發(fā)病機(jī)制，一般認(rèn)為與糖尿病時(shí)高血糖及其代謝產(chǎn)物對(duì)微血管，特別是對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞和周細(xì)胞造成的損傷有關(guān)，因此目前對(duì)糖尿病視網(wǎng)膜病變發(fā)病機(jī)制研究、診斷和治療方案的確定多是從防止微血管損傷及改善微循環(huán)的角度進(jìn)行［2］ .一些研究發(fā)現(xiàn)，在眼底無(wú)明顯改變時(shí)視

18、覺(jué)功能和電生理功能已經(jīng)發(fā)生了變化，提示視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞及膠質(zhì)細(xì)胞的代謝和功能改變可能先于視網(wǎng)膜血管病變的發(fā)生［3］ .因此，如果能夠明確糖尿病時(shí)視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞和膠質(zhì)細(xì)胞與微血管病理生理改變間關(guān)系，不僅可以提高糖尿病視網(wǎng)膜病變的早期診斷率，而且可為臨床上探索治療方案提供新的思路和理論依據(jù). </p><p>　　表3 糖尿病大鼠不同病程O(píng)Ps波的幅值與潛伏期　略 </p><p>　　表4 糖

19、尿病大鼠明適應(yīng)ERG和30-Hz閃爍反應(yīng)的幅值與潛伏期　略 </p><p>　　為進(jìn)一步探討糖尿病早期視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞和膠質(zhì)細(xì)胞的功能變化，我們采用臨床視覺(jué)電生理檢查技術(shù)對(duì)糖尿病大鼠的視網(wǎng)膜功能變化進(jìn)行了研究.臨床視覺(jué)電生理觀察指標(biāo)較多，能夠從不同層次和角度反映視網(wǎng)膜的功能變化.如scot-ERG的a波來(lái)源于視網(wǎng)膜光感受器的電位變化，該波是否存在及其幅值的高低取決于光刺激的強(qiáng)度和光感受器的完整性;b波來(lái)源于內(nèi)核層

20、的電活動(dòng)，目前認(rèn)為是K+ 離子流經(jīng)müller細(xì)胞時(shí)產(chǎn)生，還與a波和視網(wǎng)膜內(nèi)信號(hào)傳遞過(guò)程的完整性有關(guān);OPs波則一般認(rèn)為起源于內(nèi)層視網(wǎng)膜，但具體部位目前尚不肯定，可能起源與無(wú)長(zhǎng)突細(xì)胞或視網(wǎng)膜抑制性反饋回路中，其對(duì)視網(wǎng)膜循環(huán)功能變化比較敏感;phot-ERG及閃爍ERG則與視網(wǎng)膜錐細(xì)胞的功能密切相關(guān)［4］ .我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在糖尿病早期，視網(wǎng)膜的電生理功能就已經(jīng)放發(fā)生了明顯的變化，而不是通常文獻(xiàn)所報(bào)道的那樣在糖尿病大鼠模型建

21、模2wk至3mo時(shí)電生理功能才有明顯的變化.通過(guò)不同條件下視覺(jué)電生理指標(biāo)的觀察，我們注意到糖尿病對(duì)視網(wǎng)膜功能的影響范圍比較廣泛，如scot-ERG的a波和b波，OPs波、phot-ERG a波和b波及閃爍ERG均受到了不同程度的影響，表</p><p><b>　　參考文獻(xiàn): </b></p><p>　?。?］Luo CR.Diabetic retinopathy:

22、An urgent task to be exploited in the new century ［editorial］［J］.Zhonghua Yandibing Zazhi（Chin J Ocul Fundus Dis），2000;16（3）:139-140. </p><p>　?。?］Liu ZY.Control of diabetes melittus in China:A pressing situ

23、a-tion ［editorial］［J］.Zhonghua Yufang Yixue Zazhi（Chin J Prev Med），1999;33（4）:198-199. </p><p>　?。?］Shirao Y，Kawasaki K.Electrical response from diabetic retina ［J］.Prog Retin Eye Res，1998;17:59-76. </p&g

24、t;<p>　　［4］Wu LZ，Wu DZ.Linchuang Shijue Dianshenglixue（The clinical electrophysiology of vision）［M］.Beijing:Science Press，1999:16-26. </p><p>　?。?］Barber AJ，Lieth E，Khin SA，Antonetti DA，Adam G，Gard-ne

25、r TW.Neural apoptosis in the retina during experimental and human diabetes ［J］.J Clin Invest，1998;102:783-791. </p><p>　　［6］Roufail E，Soulis T，Boel E，Cooper ME，Rees S.Depletion of nitric oxide synthase-conta