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1、金雀異黃素(Genistein,4',5,7-三羥基異黃酮)富集于水體和餌料中,能夠顯著促進(jìn)魚(yú)類(lèi)卵黃原蛋白(VTG)的生成,但其誘導(dǎo)魚(yú)類(lèi)VTG表達(dá)的作用機(jī)理還不明確。本文以模式生物斑馬魚(yú)(Danio rerio)原代培養(yǎng)肝細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)材料,以特異性拮抗劑阻斷雌激素受體(ERs)或其亞型(ERα或ERβ),研究了雌激素受體在金雀異黃素誘導(dǎo)斑馬魚(yú)原代肝細(xì)胞vtg-1 mRNA合成中的作用;通過(guò)檢測(cè)金雀異黃素對(duì)斑馬魚(yú)原代肝細(xì)胞中ERα mRNA
2、和ERβ mRNA表達(dá)水平的影響,進(jìn)一步探討了金雀異黃素是否通過(guò)提高ERs的合成來(lái)誘導(dǎo)vtg的轉(zhuǎn)錄;并對(duì)過(guò)氧化物酶體增生物激活受體(PPARs)是否參與金雀異黃素對(duì)vtg轉(zhuǎn)錄表達(dá)的誘導(dǎo)作用進(jìn)行了初步的研究。研究結(jié)果如下:
(1)1~1000μmol/L金雀異黃素可劑量性誘導(dǎo)雄性斑馬魚(yú)離體肝細(xì)胞合成vtg-1 mRNA,其中1000μmol/L的金雀異黃素誘導(dǎo)作用與1μmol/L的17β-雌二醇(E2)接近,證明了金雀異黃素
3、具有弱雌激素活性,約為E2的千分之一。
(2)采用雌激素受體特異性拮抗劑(ICI182780)與1000μmol/L金雀異黃素聯(lián)合暴露雄性斑馬魚(yú)原代肝細(xì)胞48h后,發(fā)現(xiàn)vtg-1 mRNA的相對(duì)表達(dá)量顯著下降,金雀異黃素對(duì)vtg-1 mRNA的誘導(dǎo)作用被顯著抑制,結(jié)果證實(shí)金雀異黃素是通過(guò)雌激素受體途徑誘導(dǎo)斑馬魚(yú)原代肝細(xì)胞產(chǎn)生VTG。
(3)采用ERβ的特異性拮抗劑(美服培酮)與1000μmol/L金雀異黃素聯(lián)
4、合暴露雄性斑馬魚(yú)原代肝細(xì)胞48 h后,vtg-1 mRNA的表達(dá)幾乎完全被抑制。ERα的特異性拮抗劑(雷洛昔芬)與1000μmol/L金雀異黃素聯(lián)合暴露雄性斑馬魚(yú)原代肝細(xì)胞48 h則對(duì)vtg-1 mRNA的轉(zhuǎn)錄有部分抑制作用。結(jié)果表明金雀異黃素主要通過(guò)ERβ介導(dǎo)對(duì)斑馬魚(yú)肝細(xì)胞VTG的誘導(dǎo)作用,ERα也部分參與了對(duì)VTG合成的介導(dǎo)作用。
(4)進(jìn)一步研究金雀異黃素對(duì)斑馬魚(yú)原代肝細(xì)胞ERs合成的影響,結(jié)果顯示1000μmol/
5、L金雀異黃素顯著促進(jìn)了ERα mRNA和ERβ mRNA的轉(zhuǎn)錄,但ERβ的表達(dá)量遠(yuǎn)高于ERα,約為ERα的1.9倍。說(shuō)明金雀異黃素可通過(guò)誘導(dǎo)ERs的表達(dá)來(lái)促進(jìn)VTG的合成,ERβ在其中起主要作用。
(5)過(guò)氧化物酶體增生物激活受體(PPARs)是金雀異黃素的另一分子靶點(diǎn)。為了研究PPARs是否參與金雀異黃素對(duì)VTG的誘導(dǎo)作用,采用PPARs的特異性拮抗劑進(jìn)行了研究,結(jié)果顯示斑馬魚(yú)原代肝細(xì)胞vtg-1 mRNA的表達(dá)無(wú)顯著變
6、化,初步說(shuō)明PPARs并不參與金雀異黃素對(duì)VTG的誘導(dǎo)作用。
綜上,本文研究表明金雀異黃素具有弱雌激素活性,金雀異黃素可通過(guò)雌激素受體途徑直接誘導(dǎo)斑馬魚(yú)肝臟細(xì)胞產(chǎn)生VTG,其中主要是通過(guò)ERβ進(jìn)行調(diào)節(jié),金雀異黃素還通過(guò)誘導(dǎo)ERs表達(dá)的升高,促進(jìn)VTG的合成。PPAR并不參與金雀異黃素對(duì)VTG的誘導(dǎo)作用。本文初步探明了金雀異黃素誘導(dǎo)斑馬魚(yú)離體肝細(xì)胞產(chǎn)生VTG的作用機(jī)理,為正確評(píng)價(jià)植物雌激素對(duì)魚(yú)類(lèi)的影響奠定了理論基礎(chǔ)。
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