石斛內(nèi)生真菌及其分子系統(tǒng)學(xué)研究.pdf

1、近年來，植物內(nèi)生真菌的研究倍受關(guān)注。內(nèi)生菌生活在植物體內(nèi)的特殊環(huán)境中，并與宿主協(xié)同演化。在演化過程中二者形成了互惠共生關(guān)系，一方面內(nèi)生真菌可從宿主中吸收營養(yǎng)供自己生長需要，另一方面內(nèi)生真菌在宿主的生長發(fā)育和系統(tǒng)演化過程以及抗植物病蟲害中起重要的作用。據(jù)報道一些內(nèi)生真菌中也發(fā)現(xiàn)有藥用植物所產(chǎn)生的活性物質(zhì)?！　∈鷮?DendrobiumSW.)是蘭科(Orchidaceae)植物中的第二大屬，其中的多種具有藥用價值，為我國傳統(tǒng)名貴中藥，

2、具有滋陰清熱、生津益胃、潤肺止咳、明目強身、鎮(zhèn)痛消炎等功效?，F(xiàn)代藥理研究表明，石斛還具有抗腫瘤、抗衰老、增強機體免疫力、擴張血管及抗血小板凝集等作用。　　本文對石斛內(nèi)生真菌的分離方法、應(yīng)用分子生物學(xué)方法對分離到的菌株進行鑒定及石斛內(nèi)生真菌的多樣性進行了初步的研究。對于石斛內(nèi)生真菌的分離方法，采用70％酒精與0.1％升汞(HgCl2)相結(jié)合的表面消毒法。實驗結(jié)果表明對于升汞的消毒時間1～8min均可，以5min左右為宜。石斛內(nèi)生真菌在石

3、斛莖中的分布，主要是在緊貼表皮的一小部分組織中。對于培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基選擇PDA培養(yǎng)基，所分離的真菌在PDA培養(yǎng)基中生長較快，培養(yǎng)時間較短，有利于菌株的分離與純化。實驗分離到的菌株經(jīng)初步的菌落形態(tài)鑒定，共得菌株25株，其中金釵石斛9株，編號為DNC-1～DNC-9，流蘇石斛16株，編號為DFC-1～DFC-16。對分離到的25個菌株，提取DNA，用引物ITS4和ITS5進行PCR擴增，測序。將得到的序列在GenBank中用Blastn搜索