一些重要蟲生真菌的分子系統(tǒng)學(xué)研究.pdf

1、中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)博士學(xué)位論文一些重要蟲生真菌的分子系統(tǒng)學(xué)研究姓名：黃勃申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：細(xì)胞分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：李振剛樊美珍2001.6.1GenBank中查詢得到的其它球孢自僵菌的ITs】一58s—JTs2rDNA區(qū)域序列，構(gòu)建了球孢自僵菌的系統(tǒng)發(fā)育樹，從而確認(rèn)了球孢蟲草無性型在球孢白僵菌復(fù)合種的地位。在第四部分，用9個(gè)引物對(duì)國內(nèi)最有爭議的傳統(tǒng)名貴藥用真菌冬蟲夏草(cD—ycPpss擁P”5如)及其四種假定的無性型進(jìn)行RAPD擴(kuò)

2、增，發(fā)現(xiàn)冬蟲夏草和中國被毛孢r脅rs“fP，ksmP”5如)DNA指紋圖譜相似率高達(dá)913％，而和其它三種假定的無性型相似率僅在28—358％，從而確認(rèn)了冬蟲夏草無性型就是中國被毛孢，同時(shí)否定中國擬青霉(P口ecf，o用ycPJ妨fPHj打)、中國金孢霉(c^砂sD印Drf“珊J加PnsP)和蟲生簇孢(印D，omr肛加sPcfDr“m)是其無性型。這表明可用RAPD指紋圖譜來證實(shí)蟲草有性型和無性型的關(guān)系。在第五部分中第一章，以采自中國的

3、戴氏蟲草，戴氏綠僵菌，金龜子綠僵菌小孢變種(M口”括Dp，括Pvar口H婦op，蛔e)各l株為材料，擴(kuò)增其子實(shí)體株或標(biāo)本的ITsl—58s—ITs2rDNA區(qū)域，并進(jìn)行克隆和序列分析。綜合分析GenBank中金龜子綠僵菌各變種及不同菌株的ITsl一58s—ITs2rDNA序列數(shù)據(jù)，表明戴氏綠僵菌應(yīng)視為金龜子綠僵菌小孢變種的異名。戴氏蟲草和原戴氏綠僵菌的ITsl—58s—ITs2rDNA序列完全一致，表明金龜子綠僵菌小孢變種的有性型就是戴

4、氏蟲草。同時(shí)也提出了通過對(duì)基因進(jìn)行序列測(cè)定的方法是確定蟲草和其無性型關(guān)系的有效和可行的分子方法。在其第二章中，也雙向測(cè)定了柱孢綠僵菌(M糾，f“dr。印Drne)、綠色野村菌近似種(^，0MI，口P口nrvfrf如，“s)及萊氏野村菌(Ⅳrf膪yf)ITsl—58s—ITs2rDNA區(qū)域序列，為柱孢綠僵菌和綠色野村菌近似種正確歸屬提供了新的分子依據(jù)；并對(duì)綠色野村菌進(jìn)行了新組合，并對(duì)野村菌屬的存在提出疑議。在第六部分，首先對(duì)來自不同地理來

5、源和不同寄主的13株粉擬青霉∽向，抽Ds“s)和其他3種擬青霉及1株球孢白僵菌進(jìn)行RApD分析，從RAPD擴(kuò)增結(jié)果可知粉擬青霉種內(nèi)具豐富的遺傳多樣型。RAPD擴(kuò)增指紋圖譜能有效地分辯不同菌株的基因型，可用于監(jiān)測(cè)生防效果的菌株示蹤。聚類分析結(jié)果表明種間的遺傳差異要明顯大于種內(nèi)的差異。菌株間差異和寄主不相關(guān)。同時(shí)，又雙向測(cè)定和注冊(cè)了20株粉擬青霉ITsl一58s—ITs2rDNA區(qū)域序列，確定了粉擬青霉正確的ITS序列，證明了韓國學(xué)者測(cè)定的

6、粉擬青霉ITs序列實(shí)為細(xì)腳擬青霉的序列。通過序列比較發(fā)現(xiàn)韓國三株未定名的擬青霉菌株(KAcc40219、KACc4022l、KAcc40222)實(shí)為粉擬青霉?；诒狙芯繕?gòu)建的分子系統(tǒng)樹推斷其有性型可能是一種蟲革。證實(shí)粉擬青霉的的起源是單源的，發(fā)現(xiàn)其菌株的ITs的多態(tài)性，在同一地區(qū)的菌株其ITs變異也較大。ITs序列的證據(jù)表明粉擬青霉菌株間差異和地理來源及寄主均無相關(guān)性。在第七部分中，新增加了擬青霉種或變種ITsl一58s—ITS2rDN