擴(kuò)展莫尼茨絳蟲部分基因表達(dá)規(guī)律的研究.pdf

1、擴(kuò)展莫尼茨絳蟲成蟲的體節(jié)可以劃分為幼節(jié)、成節(jié)和孕節(jié)，這種在形態(tài)學(xué)上的變化，本質(zhì)上是基因在空間或者時間上差異表達(dá)的結(jié)果。該絳蟲每個節(jié)片可以視為一個個體，且每個節(jié)片中生殖器官隨節(jié)片延伸而發(fā)生萌發(fā)、生長、成熟又凋亡的變化。鑒于該絳蟲所具有的獨(dú)特生長規(guī)律，我們利用cDNA文庫和cDNA芯片技術(shù)篩選出和生殖發(fā)育有關(guān)的部分差異基因，為以該絳蟲作為模式生物研究高等生物甚至人類的生育器官的發(fā)育奠定基礎(chǔ)；尤其對于揭示同為圓葉目的棘球絳蟲--新疆高發(fā)高害人

2、畜共患病病原（細(xì)粒棘球絳蟲和多房棘球絳蟲）成蟲的生長發(fā)育規(guī)律，尋找其控制靶點(diǎn)具有重要的實際意義。 本研究采用SMART cDNA文庫構(gòu)建技術(shù)構(gòu)建了擴(kuò)展莫尼茨絳蟲成蟲的全長cDNA文庫。經(jīng)測定，該文庫的庫容量為2.52×105pfu/ml，重組率為94.7％，對文庫的克隆進(jìn)行了5’端隨機(jī)測序，經(jīng)過拼接聚類得到1080個unigenes，插入片段的平均長度為495bp，隨機(jī)抽取32條序列進(jìn)行全長測序，平均長度為1.39kb。所得到u

3、nigenes經(jīng)BlastN和BlastX分析，可以得知，780個有明顯同源性的基因（E-value<10-5），35個是未知功能的基因；GO功能注釋，進(jìn)一步預(yù)測基因功能，并通過GO pipe進(jìn)行了詳細(xì)的分類。所有的序列登錄GenBank EST數(shù)據(jù)庫（登錄號：FE905224-FE905315，F(xiàn)E942104-FE942773，F(xiàn)E969189-FE969190，F(xiàn)F677548-FF677734，F(xiàn)F848124-FF848253

4、）。結(jié)果表明：擴(kuò)展莫尼茨絳蟲成蟲的全長cDNA文庫已經(jīng)成功構(gòu)建。根據(jù)所獲得的unigenes制備擴(kuò)展莫尼茨絳蟲cDNA芯片，芯片所用的靶基因點(diǎn)包括cDNA文庫所得1080條EST序列，陽性基因（9條），植物（水稻）基因（16條）和空白點(diǎn)（24個）。擴(kuò)展莫尼茨絳蟲的幼節(jié)、成節(jié)、孕節(jié)各節(jié)段的總RNA為實驗組用Cy5標(biāo)記，頭頸節(jié)總RNA為對照組用Cy3標(biāo)記。結(jié)果表明：在幼節(jié)、成節(jié)和孕節(jié)分別有55條、134條、103條上調(diào)基因和7條、68條、7

5、8條下調(diào)基因。大多數(shù)的差異基因和代謝、運(yùn)輸、蛋白合成、轉(zhuǎn)錄因子、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞分化、細(xì)胞通信和核苷酸相關(guān)蛋白有關(guān)。所有的芯片數(shù)據(jù)都已經(jīng)被提交到GEO數(shù)據(jù)庫（登錄號：GSE13982）。我們選取反應(yīng)元件結(jié)合蛋白（CREB-binding protein（CBP）），E2型泛素連接酶（ubiquitin-conjugating enzyme E2A-like protein（UBE2A）），β亞型鈣離子通道基因（Voltage-gated