5個(gè)家系F-,2-代重組單株的篩選及除草劑HW-02抗性基因的篩選與克隆.pdf

1、植物組織培養(yǎng)受很多因素的影響，其中植物的基因型是一個(gè)重要影響因素。通常單子葉植物的組織培養(yǎng)與再生比雙予葉植物困難。水稻中粳稻品種已建立高效的組織培養(yǎng)體系，并成為植物組織培養(yǎng)、轉(zhuǎn)基因研究的模式受體。但是作為主要栽培品種，秈稻的組織培養(yǎng)和轉(zhuǎn)基因仍然存在一定困難。
　　 本室趙麗娜碩士應(yīng)用日本晴（粳稻品種）/珍汕97（秈稻品種）回交后代構(gòu)建的純合重疊導(dǎo)入系群體中定位到了數(shù)個(gè)與成熟種子的愈傷組織誘導(dǎo)率和繼代率以及綠苗分化率相關(guān)的QTL（

2、Quantitative Trait Locus）位點(diǎn)。
　　 根據(jù)趙麗娜的定位結(jié)果挑選了五個(gè)導(dǎo)入系HJ-36、HJ-37、HJ-47、HI-89和HJ-119與珍汕97B雜交。挑選出68個(gè)SSR（Simple Sequence Repeat）作為篩選交換單株的備選標(biāo)記，篩選到8個(gè)在兩個(gè)親本之間有特異性且與導(dǎo)入片段兩端連鎖的分子標(biāo)記。
　　 抽提F2代植株的DNA，用已經(jīng)篩選到的SSR標(biāo)記篩選導(dǎo)入片段發(fā)生重組的單株。HJ

3、-37家系得到重組單株31株，家系HJ-47得到重組單株29株，家系HJ-89得到重組單株24株，家系HJ-119得到重組單株32株。
　　 共篩選到20個(gè)標(biāo)記用于精細(xì)定位。其中HJ-37家系4個(gè)標(biāo)記，HJ-47家系4個(gè)標(biāo)記，HJ-89家系6個(gè)標(biāo)記，HJ-119家系6個(gè)標(biāo)記。
　　 HW-02是一種新型α取代苯氧基乙?；鶡N基膦酸酯類除草劑，以丙酮酸脫羧酶為靶標(biāo)，敏感性實(shí)驗(yàn)證明DH10B菌株對(duì)該除草劑更敏感。本實(shí)驗(yàn)用甲基磺