FMDV抗原表位多肽及分子佐劑對小鼠上呼吸道免疫的影響.pdf

1、上呼吸道接種免疫作為新型的FMDV接種途徑，正在被越來越多的預(yù)防醫(yī)學(xué)研究工作者所重視。很大一部分流行病都是由呼吸道感染機體，因此是否能夠建立起上呼吸道黏膜免疫保護是機體能否抵御病毒入侵的關(guān)鍵，上呼吸道粘膜免疫保護機制也為預(yù)防醫(yī)學(xué)提供了研究防控疾病的有效途徑。粘膜佐劑作為黏膜免疫研究的一個重要組成部分能夠顯著增強粘膜免疫保護效果。很多免疫增強劑都被應(yīng)用到黏膜免疫的研究中來，但絕大多數(shù)佐劑都是經(jīng)驗總結(jié)的產(chǎn)物，作用機理難以透徹研究。FMDV經(jīng)

2、濟上具有重大的影響，其每次大規(guī)模爆發(fā)流行都會給人類帶來了數(shù)以億計的經(jīng)濟損失，研究防控各亞型大流行的新型高通量疫苗迫在眉睫。因此研究上呼吸道黏膜免疫對防控該病流行是行之有效的手段之一。
　　 本研究結(jié)合了上呼吸道黏膜免疫、FMDV抗原表位多肽、CTB佐劑、核酸佐劑和細胞因子佐劑等研究內(nèi)容在小鼠上進行了對比試驗。利用分子生物學(xué)技術(shù)、基因工程技術(shù)、生物信息學(xué)技術(shù)和DNA逆向工程技術(shù)構(gòu)建Asia1 FMDV抗原表位多肽基因經(jīng)Linker

3、蛋白基因與CTB多肽基因串聯(lián)構(gòu)建了抗原表位多肽基因31c。反轉(zhuǎn)錄法克隆了成年牛干擾素cDNA即BoIFN-γ基因，將表達純化得到的BoIFN-γ成熟多肽蛋白作為了輔助31C多肽的佐劑。在建立的多肽與全病毒對照組、細胞因子核酸佐劑與活性多肽佐劑對照組、上呼吸道免疫與皮下接種免疫對照組和CTB佐劑研究組等一系列研究中，通過間接ELISA檢測分泌型IgA抗體水平，應(yīng)用微量血清中和試驗檢測體液免疫水平，淋巴細胞增殖實驗檢測細胞免疫水平以及應(yīng)用反

4、轉(zhuǎn)錄熒光定量PCR檢測IL-2、IL-4、IL-10和IFN-γ在頸部淋巴、肺臟及脾臟內(nèi)的變化。通過以上數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析得出黏膜免疫保護水平、全身體液免疫水平、全身細胞免疫水平和黏膜免疫誘導(dǎo)應(yīng)答調(diào)節(jié)各個器官的細胞因子調(diào)節(jié)變化規(guī)律。
　　 實驗數(shù)據(jù)表明人工合成的抗原表位級聯(lián)多肽31C的免疫活性顯著高于商品化多肽，證明了抗原表位多肽31C可以誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生中和性抗體和分泌型抗體。證明了鼻腔免疫多肽抗原不僅可以誘導(dǎo)口腔及鼻腔內(nèi)產(chǎn)生分泌型抗體

5、，其還可以誘導(dǎo)遠端生殖道內(nèi)產(chǎn)生分泌型抗體。鼻腔免疫具有較皮下免疫更早誘導(dǎo)免疫記憶性細胞的能力。驗證了CTB佐劑可以輔助融合表達多肽顯著提高后者的免疫原性。且證明了CTB具有提高口鼻分泌液中sIgA抗體水平的功效，通過鼻腔免疫小鼠，CTB可以顯著增加結(jié)合在其表面抗原表位的體液免疫抗體水平。研究了mBoIFN-γ多肽pBoIFN-γ，基因在粘膜佐劑中的作用，mBoIFN-γ作為效應(yīng)細胞因子可以顯著增強注入部位的IFN-γ表達水平和sIgA表