毛木耳油疤病病原物分離鑒定及其致病性分析.pdf

1、毛木耳(Auricularia polytricha)是一種重要的人工栽培食用菌，在我國福建、四川、河南、湖北、江蘇等地廣泛采用規(guī)模化袋式栽培。2009年我們在四川省發(fā)現(xiàn)一種被稱為毛木耳“油疤病”的病害。油疤病的發(fā)生為毛木耳產(chǎn)業(yè)帶來了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。
　　 本文調(diào)查了毛木耳油疤病的發(fā)生發(fā)展規(guī)律，進(jìn)行病原物的分離和鑒定，依據(jù)柯赫氏法則驗(yàn)證了病原物的致病性，并對其中的三個致病因子進(jìn)行了初步分析。
　　 通過常規(guī)的組織分離方法

2、從油疤病發(fā)病菌袋中分離到一種真菌性分離物，對該真菌進(jìn)行了培養(yǎng)特性、顯微特性觀察以及ITS、18S分子序列分析，確定分離到的真菌為木棲柱孢霉(Scytalidium lignicola)，國內(nèi)未見此真菌引起食用菌病害的報道。
　　 利用兩種方法驗(yàn)證分離到的木棲柱孢霉的致病性，一種是在菌袋培養(yǎng)料兩端同時分別接種毛木耳菌絲和木棲柱孢霉菌絲，另一種是在長滿毛木耳菌絲的菌袋上接種木棲柱孢霉菌絲。兩種方法接種后的毛木耳菌袋中均產(chǎn)生了與田間調(diào)

3、查相同的癥狀。對發(fā)病部位進(jìn)行再分離，獲得的再分離物的培養(yǎng)特性及ITS序列和木棲柱孢霉相同。表明該分離物為油疤病的致病菌。
　　 從三個方面分析病原菌的致病因子，分別是胞外酶、毒素和黑色素。
　　 木棲柱孢霉菌絲體在液體搖床培養(yǎng)條件下，可以檢測到果膠酶、葡聚糖內(nèi)切酶酶(Cellulose-Cx)和蛋白酶(Protease-Pro)。果膠酶包括多聚半乳糖醛酸酶(Polygalacturonase-PG)、果膠甲基半乳糖醛酸酶

4、(Pectin methyl galacturonic acidenzymes-PMG)、果膠甲基酯酶(Pectin methyl esterase-PME)、果膠甲基反式消除酶(Pectin methyl TRANS-elimination enzymes-PMTE)和多聚半乳糖醛酸反式消除酶(Poly galacturonic acid TRANS-elimination enzymes-PGTE)。其中PME活性最高，可高達(dá)44.

5、61 U/mg，即病原菌的菌絲體從果膠質(zhì)中除去甲基，產(chǎn)生果膠酸的能力較強(qiáng)；而PG和PMG的活性較低，即病原菌菌絲體水解果膠質(zhì)的能力較弱；PGTE、PMTE活性不穩(wěn)定，病原菌菌絲體裂解果膠和果膠酸的能力不均衡，沒有規(guī)律性；Cx從培養(yǎng)第四天開始就保持較高的活性，病原菌菌絲體葡聚糖內(nèi)切酶的活性高，對葡聚糖的分解能力較強(qiáng)；Pro的活性在培養(yǎng)的后期維持在較高的水平，此時病原菌菌絲體分解蛋白質(zhì)的能力較強(qiáng)。
　　 采用三種方法進(jìn)行毒素的提取工

6、作，并利用透析袋、高壓滅菌處理和SDS-PAGE分析驗(yàn)證提取到的毒素的性質(zhì)。提取的毒素濾液、透析后的毒素濾液均對毛木耳菌絲產(chǎn)生致病性，影響毛木耳菌絲的生長，使之出現(xiàn)變黃、萎蔫等的癥狀，而高壓滅菌處理的毒素濾液對毛木耳菌絲無影響。毒素濾液的SDS-PAGE分析沒有出現(xiàn)蛋白條帶，推測提取到的毒素為多糖類物質(zhì)。
　　 利用酸沉淀法提取木棲柱孢霉的黑色素，提取率較高。對黑色素進(jìn)行溶解性、熱穩(wěn)定性、光穩(wěn)定性和抗氧化性等分析，發(fā)現(xiàn)該色素溶于