應(yīng)用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的生長點(diǎn)轉(zhuǎn)化方法建立河套蜜瓜高效規(guī)?；D(zhuǎn)化技術(shù).pdf

1、用基因工程技術(shù)把外源基因?qū)胫参锛?xì)胞是現(xiàn)代遺傳育種的重要途徑。經(jīng)過二十多年的研究已建立了多種基因轉(zhuǎn)化系統(tǒng)，獲得了很多有價(jià)值的轉(zhuǎn)基因植物。目前的轉(zhuǎn)基因技術(shù)可分為物理法、化學(xué)法及生物學(xué)法。這些方法各有其優(yōu)點(diǎn)，但也都有不足之處，這就推動(dòng)新的轉(zhuǎn)基因技術(shù)的出現(xiàn)。利用植物分生組織直接進(jìn)行基因轉(zhuǎn)化，由于不經(jīng)過愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)過程，體細(xì)胞無性系變異小，能較好地保持受體植物的遺傳穩(wěn)定性，轉(zhuǎn)化的外源基因也能實(shí)現(xiàn)穩(wěn)定地遺傳。
　　 本文首先以河套蜜瓜

2、腋芽生長點(diǎn)做外植體，利用SPSS軟件對(duì)農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化時(shí)的菌液濃度、轉(zhuǎn)化時(shí)間、共培養(yǎng)時(shí)間設(shè)計(jì)16組正交實(shí)驗(yàn)。做法如下：切取河套蜜瓜腋芽莖段，用滅菌的細(xì)針刺傷腋芽萌發(fā)處，用帶有外源基因的農(nóng)桿菌進(jìn)行轉(zhuǎn)化處理。然后將腋芽萌發(fā)的莖段切下來，轉(zhuǎn)到生根培養(yǎng)基上后獲得轉(zhuǎn)基因再生植株。對(duì)16組實(shí)驗(yàn)進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，得到農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化河套蜜瓜生長點(diǎn)的最優(yōu)體系為：使用OD600=0.7的菌液轉(zhuǎn)化10min之后，黑暗中共培養(yǎng)2d。在后期篩選轉(zhuǎn)基因植株時(shí)選定：葉片上噴灑20