實(shí)驗大鼠的體外受精技術(shù)研究.pdf

1、大鼠是生命科學(xué)研究中常用的實(shí)驗動物之一，大鼠體外受精技術(shù)的發(fā)展不僅有利于大鼠種質(zhì)資源保存，而且還可推動受精分子機(jī)制、胚胎發(fā)育及生殖毒理等生殖生物學(xué)領(lǐng)域的深入研究，具有重要的實(shí)用價值和理論意義。本試驗主要以SD大鼠為研究對象，對其超數(shù)排卵、體外受精、胚胎體外培養(yǎng)及胚胎移植等技術(shù)進(jìn)行探討，實(shí)驗內(nèi)容和結(jié)果如下： 1．觀察了不同劑量水平的PMSG/hCG對幼齡大鼠的超數(shù)排卵效果。結(jié)果表明，4～5周齡組SD大鼠在激素劑量為20 IU/只時

2、，平均超排采卵54.6枚，明顯高于其他劑量組；6～7周齡組在激素劑量為40 IU/只時超排采卵數(shù)最多，為32.7枚，但與30 IU和50 IU劑量組差異不明顯；8～9周齡組超排效果最差，用不同劑量超排最高平均采卵21.5枚。本試驗表明，SD大鼠的超排效果隨著年齡增長而下降，4～5周齡雌鼠超排效果最好，其中激素劑量為20 IU/只時超排采卵數(shù)最多。 2．采用陰道涂片檢查的方法對大鼠發(fā)情周期的不同階段進(jìn)行觀察，分析各個發(fā)情周期陰道上

3、皮細(xì)胞的變化情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，發(fā)情周期的不同階段，陰道上皮細(xì)胞類型呈規(guī)律性變化：發(fā)情前期的陰道涂片以橢圓形的有核上皮細(xì)胞占絕大多數(shù)；發(fā)情期的陰道涂片以片狀的，角質(zhì)化上皮細(xì)胞占絕大多數(shù)；發(fā)情后期的陰道涂片，片狀角質(zhì)化上皮細(xì)胞、有核上皮細(xì)胞和白細(xì)胞同時存在，且比例相當(dāng)；發(fā)情間期的陰道涂片以白細(xì)胞占絕大多數(shù)。 3．對大鼠進(jìn)行胚胎移植研究，比較了自然排卵和超數(shù)排卵所得卵子的質(zhì)量差異。結(jié)果顯示，經(jīng)超排處理的2-細(xì)胞胚胎在移植給受體后，妊娠率

4、為63.3％，自然排卵組的妊娠率為60％，統(tǒng)計學(xué)差異不顯著。 4．選用mKRB、IVF30和mR1ECM-BSA作為精子獲能液和體外受精液，對SD大鼠進(jìn)行體外受精。結(jié)果表明，用IVF30培養(yǎng)液對SD大鼠進(jìn)行IVF可以獲得73.8％的2-細(xì)胞卵裂率，顯著高于mR1ECM-BSA組和mKRB組(分別為13.5％和21.1％)。 5．選定IVF30為精子獲能液和體外受精液，對影響體外受精的一些關(guān)鍵因素如精子獲能時間，注射hCG

5、后收集卵子的時間，以及精子與卵子的共孵育時間進(jìn)行研究。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在IVF30培養(yǎng)液中，大鼠精子不經(jīng)獲能也可以使卵子受精(受精率為33.8％)，但受精率在一定范圍內(nèi)隨著獲能時間的延長呈上升趨勢，在獲能7 h時受精率最高，為83.2％，明顯高于其他各組，繼續(xù)獲能9 h后再與卵子相遇則受精率下降；注射hCG后13h收集卵子進(jìn)行體外受精，受精率最高，為88.6％，繼續(xù)推遲采卵時間，則受精率下降；精卵相互作用6、9、12 h后的2-細(xì)胞卵裂分別為

6、70.9％、78.6％和73.8％，統(tǒng)計學(xué)差異不顯著； 6．主要研究了BSA、PVA及葡萄糖濃度對大鼠胚胎體外發(fā)育的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，BSA和PVA對受精卵至4-細(xì)胞期前的發(fā)育差異不顯著，但PVA的添加似乎更支持4-細(xì)胞期以后的胚胎發(fā)育，21.4％的胚胎能夠發(fā)育到囊胚，而BSA組則沒有胚胎發(fā)育到囊胚；不同濃度葡萄糖對大鼠受精卵體外培養(yǎng)的結(jié)果顯示，0.2mM組的囊胚發(fā)育率為僅為4.1％，顯著低于5.5 mM組和7.5 mM組(23.

7、5％和21.4％)，而5.5 mM組和7.5mM組的囊胚發(fā)育率不顯著。 7．用IVF30對更多品系大鼠進(jìn)行體外受精試驗，并對體外受精所得2-細(xì)胞胚胎進(jìn)行了體內(nèi)移植。結(jié)果表明，IVF30不僅適合用作SD大鼠的精子獲能和體外受精液，在Wistar、GK和F344大鼠也可以獲得比較高的體外受精率(分別為72.6％、87.8％和71.6)，GK大鼠的體外受精率甚至高于SD大鼠(為83.2％)，但四個品系的體外受精率差異均不顯著；胚胎移植