荷斯坦奶?；铙w采卵與體外受精技術(shù)研究.pdf

1、本研究對(duì)影響荷斯坦奶牛活體采卵(ovumpick-up，OPU)效果的主要因素進(jìn)行了探討，并對(duì)提高荷斯坦奶牛早期胚胎體外發(fā)育率的方法進(jìn)行了研究，旨在建立一套比較完善的荷斯坦奶?；铙w采卵-體外受精(invitrofertilization，IVF)技術(shù)操作體系。研究的主要內(nèi)容為：影響荷斯坦奶?；铙w采卵效果的主要因素研究、提高荷斯坦奶牛早期胚胎體外發(fā)育率研究和荷斯坦奶牛胚胎體外化生產(chǎn)操作體系研究。 在奶?；铙w采卵技術(shù)研究中，研究了不

2、同采卵負(fù)壓(70，90，110，130mmHg)、不同采卵時(shí)間間隔(第一次、間隔3d、間隔7d、間隔14d)以及采卵前FSH預(yù)處理對(duì)活體采卵效果的影響，結(jié)果表明：OPU負(fù)壓影響卵母細(xì)胞的回收率和質(zhì)量。70mmHg負(fù)壓下的頭均獲卵數(shù)(4.35±2.03枚)顯著低于其它各組(P＜0.05)，其它各組間差異不顯著；70mmHg負(fù)壓下的回收率(44.16﹪)顯著低于90mmHg負(fù)壓下的回收率(56.04﹪)(P＜0.05)；110mmHg、13

3、0mmHg負(fù)壓下的回收率之間差異不顯著(66.03﹪vs67.29﹪)，但均顯著高于70mmHg和90mmHg組(P＜0.05)；130mmHg負(fù)壓下的A、B級(jí)卵母細(xì)胞率為48.61﹪，顯著低于其它各組(P＜0.05)，其它各組間差異不顯著。在本實(shí)驗(yàn)條件下，綜合考慮卵母細(xì)胞回收率和質(zhì)量，采用負(fù)壓110mmHg可以獲得較好的OPU結(jié)果(回收率為66.03﹪，A、B級(jí)卵母細(xì)胞率為68.84﹪)。OPU時(shí)間間隔影響可穿刺卵泡數(shù)量、獲卵數(shù)和回收

4、率。采用3d的時(shí)間間隔進(jìn)行OPU，頭均穿刺數(shù)(7.71±1.51)、頭均獲卵數(shù)(5.29±1.19)顯著低于其它各組(P＜0.05)；但是回收率(68.61±4.19﹪)顯著高于其它各組(P＜0.05)；在同樣1w的時(shí)間內(nèi)，間隔3d進(jìn)行OPU比間隔7d、14d可獲得較多的卵母細(xì)胞(平均10.58枚/w)。OPU前對(duì)供體牛用FSH進(jìn)行處理，頭均穿刺數(shù)為12.36±2.39，頭均獲卵數(shù)為8.60±1.85，均顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)；

5、A、B級(jí)卵母細(xì)胞率(75.19﹪)、卵裂率(58.77﹪)和桑囊發(fā)育率(27.61﹪)與對(duì)照組差異均不顯著。 在提高荷斯坦奶牛早期胚胎體外發(fā)育率的研究中，對(duì)比了不同培養(yǎng)液對(duì)早期胚胎體外發(fā)育的影響。結(jié)果表明，將原培養(yǎng)體系的發(fā)育液IVMD-101替換為TCM-199+BSA+Pyruvate+ITS(胰島素-轉(zhuǎn)鐵蛋白-硒，Insulin-Transferrin-Selenium)+ab，可顯著提高體外胚胎的桑椹胚率(25.16﹪)和

6、囊胚率(17.42﹪)，與IVMD-101組(分別為12.26﹪，8.49﹪)相比差異顯著(P＜0.05)；ITS的最佳添加濃度為10μl/ml。 在荷斯坦奶牛胚胎體外生產(chǎn)體系研究中，將活體采卵獲得的卵母細(xì)胞經(jīng)體外成熟后用常規(guī)精液和性控精液分別受精，然后進(jìn)行體外培養(yǎng)，結(jié)果表明：X、Y精子分離的性控精液可以成功的應(yīng)用于奶牛體外受精，生產(chǎn)預(yù)知性別的奶牛胚胎，桑椹胚率為27﹪，囊胚率為18﹪，與用常規(guī)精液進(jìn)行體外受精的效果相比沒有顯著