葡萄上鹽誘導(dǎo)的R2R3-MYB轉(zhuǎn)錄因子篩選及VvMYB62的抗鹽功能鑒定.pdf

1、MYB家族轉(zhuǎn)錄因子(MYB transcription factor)對生物和非生物脅迫的應(yīng)答研究主要集中在擬南芥、水稻、大豆等模式植物上;在葡萄上對MYB基因功能的研究也主要集中在類黃酮代謝途徑上，抗鹽途徑研究較少。由于工業(yè)污染加劇，灌溉和施肥不當(dāng)?shù)仍颍沟猛寥利}堿化日趨加劇，嚴(yán)重影響葡萄的產(chǎn)業(yè)發(fā)展。研究葡萄MYB抗性相關(guān)基因?qū)ωS富抗鹽機(jī)制和品種選育、改良具有重要意義。
　　1.本研究以葡萄砧木“1103P”為試材，通過對10

2、8個(gè)葡萄R2R3-MYB轉(zhuǎn)錄因子基因進(jìn)行抗鹽篩選，獲得了5個(gè)受鹽誘導(dǎo)的R2R3-MYB轉(zhuǎn)錄因子，進(jìn)化分析表明其屬于不同的擬南芥R2R3-MYB亞組。這5個(gè)基因分別命名為VvMYB112、VvMYB62、VvMYB15、VvMYB107和VvMYB87。其中VvMYB62能響應(yīng)100～200mM高鹽處理，此外，VvMYB62也能被聚乙二醇(PEG6000)和低溫(4℃)誘導(dǎo)。
　　2.VvMYB62基因主要在擬南芥的根尖分生組織、葉

3、和莖中表達(dá)，酵母雙雜分析發(fā)現(xiàn)VvMYB62蛋白具有自主激活活性，不具有同源結(jié)合特性。
　　3.在擬南芥中過量表達(dá)VvMYB62基因表明:VvMYB62基因能提高轉(zhuǎn)基因擬南芥的萌芽率，增強(qiáng)植株的耐鹽性;Na+、K+含量測定表明VvMYB62轉(zhuǎn)基因擬南芥中的Na+積累量明顯低于野生型，且K+含量較高，降低了Na+/K+比;過量表達(dá)VvMYB62基因上調(diào)了AtSOS1、AtSOS2、AtSOS3、AtP5CS和AtNHX1基因的表達(dá)，但

4、AtHKT1的表達(dá)不受影響;進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)VvSOS1、VvNHX1、VvP5CS不是VvMYB62的直接靶基因，推測VvMYB62可能間接通過SOS信號途徑、滲透調(diào)節(jié)和Na+的區(qū)域化來共同調(diào)控鹽脅迫。
　　4.以葡萄砧木“1103P”為材料，優(yōu)化了農(nóng)桿菌介導(dǎo)的葡萄遺傳轉(zhuǎn)化體系。葡萄砧木“1103P”的莖尖再生體系在C2D+0.3 mg· L-16-BA培養(yǎng)基上生長再生率最高，選用350 mg·L-1的頭孢桿菌濃度能有效抑制農(nóng)桿菌