灰樹花胞外多糖的液體發(fā)酵及其硫酸酯的制備.pdf

1、灰樹花是食藥兩用真菌中的佳品，其中灰樹花多糖具有抗輻射、抗氧化、抑制腫瘤、激活免疫等功能，本文在前期工作中得到一株具有特殊功能的灰樹花菌株，現(xiàn)對其液態(tài)培養(yǎng)培養(yǎng)基組成進行優(yōu)化及5 L發(fā)酵罐參數(shù)優(yōu)化，以期獲得最佳的液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基，提高發(fā)酵產(chǎn)生胞外多糖的水平；通過對灰樹花胞外多糖提取純化工藝的優(yōu)化到了純度較高的胞外多糖樣品；應(yīng)用薄層色譜法、氣相色譜法、紅外光譜分析及原子力顯微鏡等分析儀器，對灰樹花胞外多糖的結(jié)構(gòu)做仞步分析；用硫酸酯化的方法解決

2、了灰樹花胞外多糖水溶性差的問題，確定了最佳酯化工藝。
　　 (1)為獲得種子最佳接種時間，對灰樹花菌體生長曲線的測定，確定最佳種齡。菌體量在72h后迅速增加，而在120 h菌體量達到最高后進入穩(wěn)定階段，菌絲體干重達到峰值，而在108 h時菌體量尚未達到最高峰，但已具備較高的菌絲體含量，且仍然處于快速生長的階段，因此確定種齡為108 h后進行接種。
　　 通過三因素四水平正交試驗確定了灰樹花胞外多糖生產(chǎn)的最佳培養(yǎng)基組成，其

3、培養(yǎng)基組成為葡萄糖22 g/L，蛋白胨3.5 g/L，KH2PO40.8g/L，MgSO41.0 g/L；單因素試驗證明添加0.01％的VB1能夠促進灰樹花菌絲體的生長同時能夠促進胞外多糖的產(chǎn)量。
　　 通過對發(fā)酵罐攪拌裝置的調(diào)整，發(fā)酵參數(shù)轉(zhuǎn)速、pH的優(yōu)化得到了適合灰樹花胞外多糖生產(chǎn)的發(fā)酵參數(shù)：攪拌為單漿攪拌，轉(zhuǎn)速140 r/min，pH6.0。最終胞外多糖產(chǎn)量為219 mg/L。
　　 (2)通過多糖提取及純化工藝優(yōu)化

4、，確定了最佳醇沉工藝為乙醇最終濃度75％，醇沉?xí)r間24 h，醇沉溫度4℃，該法所得多糖提取率為92％。
　　 通過對Saveg法和三氯乙酸法除蛋白工藝的對比確定，三氧乙酸法對蛋白去除率及多糖損失率均優(yōu)于Saveg法，故選用三氯乙酸法做為除蛋白方法，三氯乙酸最終濃度為12％。此時蛋白去除率達到60.3％，而且多糖損失率較小為8.8％。
　　 紫外全波長掃描數(shù)據(jù)說明經(jīng)純化的多糖在280蛋白吸收峰處沒有較明顯的吸收峰，說明經(jīng)過

5、蛋白去除后多糖溶液中蛋白含量較低。
　　 (3)灰樹花胞外多糖單糖組成經(jīng)薄層色譜及氣相色譜儀分析可以確定灰樹花胞外多糖單糖組分為甘露糖，葡萄糖和木糖其摩爾比為16.87:1:2.99；經(jīng)紅外光譜分析可以確定多糖結(jié)構(gòu)為β-吡喃型的多糖；該多糖經(jīng)原子力顯微鏡掃描得該多糖大分子形態(tài)為線性多糖。
　　 (4)由于灰樹花胞外多糖的水溶性較差，給灰樹花胞外多糖的研究及其應(yīng)用帶來很多困難，所以對其進行化學(xué)變性，本實驗采用吡啶-氯磺酸法