蒙古口蘑菌絲體高密度發(fā)酵及其多糖的研究.pdf

1、蒙古口蘑為享譽(yù)全球的著名珍貴食、藥用擔(dān)子菌。由于蒙古口蘑人工栽培難度較大，長期以來其馴化栽培都未能獲得實(shí)質(zhì)性突破，加之目前野生口蘑的滋生環(huán)境受到破壞，蒙古口蘑資源銳減。從保護(hù)開發(fā)這一珍稀瀕危資源出發(fā)，通過液體深層發(fā)酵，大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)蒙古口蘑菌絲體與口蘑多糖，開發(fā)利用這一珍貴資源潛力巨大。
　　 本論文系統(tǒng)地研究了碳源、氮源、無機(jī)鹽等營養(yǎng)成分以及種齡、接種量、溫度、轉(zhuǎn)速、溶氧、pH、通氣量等因素對蒙古口蘑液體深層發(fā)酵生物量與胞外

2、多糖產(chǎn)量的影響，并通過搖瓶發(fā)酵進(jìn)行培養(yǎng)基篩選、發(fā)酵罐發(fā)酵工藝優(yōu)化以及蒙古口蘑菌絲體及胞外多糖的提取、純化和分析，確定了深層發(fā)酵、多糖提取和分離的工藝條件，首次利用發(fā)酵罐實(shí)現(xiàn)了蒙古口蘑菌絲體高密度發(fā)酵培養(yǎng)生產(chǎn)菌絲體及口蘑多糖，為下一步工業(yè)化大生產(chǎn)提供了可能。
　　 本論文主要試驗(yàn)結(jié)果和研究結(jié)論摘要如下：
　　 1、采用RAPD指紋技術(shù)原理，通過瓊脂糖凝膠電泳的方法對隨機(jī)引物進(jìn)行篩選，利用篩選出的有效隨機(jī)引物對樣品DNA進(jìn)行

3、擴(kuò)增后，經(jīng)微流控芯片電泳儀電泳，對獲得的圖譜利用分析軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。聚類結(jié)果表明本試驗(yàn)所用三株蒙古口蘑菌株是其子實(shí)體分離物的純培養(yǎng)，并且證明錫林郭勒草原與呼倫貝爾盟草原的蒙古口蘑無地域遺傳差異性。
　　 2、采用PDA培養(yǎng)基進(jìn)行平板培養(yǎng)，比較了三株蒙古口蘑菌株的生長情況，并確定其中的一株蒙古口蘑菌株Q97為實(shí)驗(yàn)菌株。比較了不同培養(yǎng)溫度下菌絲體的生長速度，確定蒙古口蘑菌絲體最佳生長溫度為25℃。
　　 3、通過單因子試驗(yàn)

4、和正交試驗(yàn)對蒙古口蘑菌株Q97的適直C、N源、培養(yǎng)基組成及發(fā)酵工藝進(jìn)行了研究，證明菌株Q97可以較好的利用大多數(shù)碳源與有機(jī)氮源，得到搖瓶液體發(fā)酵最佳培養(yǎng)基組成為：豆餅粉30 g/L，蔗糖50 g/L，K2HPO41 g/L，CaCO31 g/L，pH自然。
　　 4、搖瓶發(fā)酵最佳周期為13天，最大生物量達(dá)到30 g/L，胞外多糖達(dá)到100 mg/L以上，這為工業(yè)化高密度規(guī)?；a(chǎn)提供了可能性。
　　 5、通過5 L發(fā)酵罐

5、發(fā)酵工藝的優(yōu)化，確定了發(fā)酵罐最佳培養(yǎng)基配方和合適的發(fā)酵工藝，縮短了發(fā)酵周期，提高了發(fā)酵產(chǎn)量。
　　 6、利用20 L發(fā)酵罐進(jìn)行了蒙古口蘑菌絲體生長與胞外多糖合成的動力學(xué)研究，包括菌體生長、產(chǎn)物形成和底物消耗在內(nèi)的動力學(xué)數(shù)學(xué)模型，通過模型計(jì)算值與實(shí)驗(yàn)值的比較，模型計(jì)算值與實(shí)驗(yàn)值均能較好吻合，說明建立的動力學(xué)模型能夠較好的反映蒙古口蘑在發(fā)酵罐發(fā)酵的過程。
　　 7、確定250 L發(fā)酵罐發(fā)酵培養(yǎng)基配方為：豆餅粉30 g/L，蔗

6、糖80 g/L，K2HPO41 g/L，CaCO31 g/L。發(fā)酵周期為7-8 d，生物量最大值可以穩(wěn)定到45 g/L，胞外多糖最大產(chǎn)量可以穩(wěn)定到300 mg/L。這為工業(yè)化高密度規(guī)模化生產(chǎn)打下堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。
　　 8、對蒙古口蘑發(fā)酵液進(jìn)行了多糖的提取、分離與純化，獲得了較純的口蘑多糖，并應(yīng)用高效凝膠滲透色譜法(HPGPC)測定蒙古口蘑多糖的分子量，示差檢測器檢測蒙古口蘑多糖洗脫結(jié)果共得到5個(gè)峰，證明蒙古口蘑多糖至少含有5種多糖組