河南部分地區(qū)豬圓環(huán)病毒2型的分離鑒定及LH2株對(duì)昆明小鼠致病性研究.pdf

1、豬圓環(huán)病毒2型(porcinecircovirustype2，PCV2)為無(wú)囊膜的單股環(huán)狀DNA病毒，屬圓環(huán)病毒科(Circoviridae)圓環(huán)病毒屬(Circovirus)的成員。PCV2是最小的病毒之一。根據(jù)PCV的致病性、抗原性及核苷酸序列，PCV可分為PCV1和PCV2兩個(gè)型，PCV1對(duì)豬無(wú)致病性，但廣泛存在于豬體內(nèi)，基因組全長(zhǎng)為1759bp；PCV2有致病性，基因組全長(zhǎng)為1767bp或1768bp。PCV2被認(rèn)為是仔豬斷奶后

2、多系統(tǒng)衰竭綜合征(Postweaningmultisystemicwastingsyndrome，PMWS)、豬皮炎與腎炎綜合征(PDNS)、豬呼吸道綜合征(PRDC)、繁殖障礙的主要影響因素。2000年從患PMWS的豬中分離到第一株P(guān)CV2分離株，之后，PCV2相關(guān)疾病在中國(guó)迅速蔓延，給我國(guó)的養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的損失，威脅著養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展。因此，加強(qiáng)該病及其病原的研究具有重要的意義。
　　 利用PCR方法，對(duì)河南鄭州、南陽(yáng)、焦作等

3、地采集的疑似PCV2感染的病料進(jìn)行檢測(cè)。PCR檢測(cè)為陽(yáng)性的病料經(jīng)處理斤，接種無(wú)PCV污染的PK-15細(xì)胞，盲傳6代，用PCR方法仍然能夠在接種細(xì)胞中檢測(cè)到PCV2核酸，PRV、PRRSV、PPV、PCV1的PCR檢測(cè)均為陰性。通過(guò)直接免疫熒光試驗(yàn)，觀(guān)察到了感染病毒的細(xì)胞出現(xiàn)了特異性熒光。
　　 設(shè)計(jì)一對(duì)引物，擴(kuò)增山11株分離株的全基因組，分別命名為：LH1、ZZ1、ZZ2、ZZ3、ZZ4、JZ1、JZ2、LY1、PDS1、JY1

4、、NY1。與GenBank上已收錄的國(guó)內(nèi)外的PCV2序列進(jìn)行同源性比較和進(jìn)化樹(shù)分析。結(jié)果表明，11株P(guān)CV2中有10株全基因組為1767bp，基因組分型為PCV2b，1株為1768bp，說(shuō)明PCV2b是河南省PMWS發(fā)生的主要因素；11個(gè)毒株的同源性位于94.9％～100％之間，和其它毒株的同源性為94.7％～100%；10株基因組為1767bp的毒株處于一大分支上，遺傳進(jìn)化比較穩(wěn)定。
　　 30只6周齡的昆明小鼠被隨機(jī)分為3組

5、。A組腹腔注射0.2mL/只的PCV2-LH1F10病毒液。B組腹腔注射0.2mL/只的PCV2-LH1F10病毒液，第一次接種后7d再次腹腔注射0.2mL/只的PCV2-LH1F10病毒液加強(qiáng)接種一次。C組腹腔注射0.2mL/只的PBS液作為對(duì)照組。每組分別在接種后7、14、28、35利42d處死。剖檢每只小鼠。收集血清檢測(cè)PCV2特異性抗體。收集組織進(jìn)行組織病理學(xué)研究和PCR。PCR結(jié)果顯示接種病毒的小鼠體內(nèi)有病毒的復(fù)制，組織病理學(xué)