放線菌菌株Y23活性物質(zhì)的分離純化及理化性質(zhì)的初步研究.pdf

1、煙草青枯病是由茄勞爾氏菌[Ralstonia solanacearum（E.F.Smith）]引起的一種細(xì)菌性病害，在國(guó)內(nèi)的廣東、福建等南方地區(qū)普遍發(fā)生。近幾年來(lái)，該病的發(fā)生和危害范圍有向北方煙區(qū)擴(kuò)展的趨勢(shì)，在山東、河南及陜西等省均有發(fā)生，局部地區(qū)為害較重，已成為煙草主要病害之一。
　　 本實(shí)驗(yàn)室從來(lái)源于山東臨沂的煙田土樣中篩選出一株放線菌菌株Y23，該菌株對(duì)煙草青枯病菌等多種植物病原菌有明顯的抑制作用。本實(shí)驗(yàn)主要從菌株Y23發(fā)

2、酵抑菌活性物質(zhì)的穩(wěn)定性、理化性質(zhì)、分離提純方法等幾個(gè)方面進(jìn)行研究：
　　 1.分別采用抑制菌絲生長(zhǎng)速率法和瓊脂擴(kuò)散法測(cè)定了Y23菌株發(fā)酵液對(duì)15種病原真菌、3種病原細(xì)菌的抑菌活性。結(jié)果表明，Y23菌株發(fā)酵液對(duì)禾谷鐮刀菌、蘋果輪紋病菌、大麥條紋病菌的菌絲生長(zhǎng)抑制率達(dá)55％以上，占供試真菌數(shù)的20％；瓊脂擴(kuò)散法生測(cè)結(jié)果表明，Y23菌株發(fā)酵液只對(duì)煙草青枯病菌有抑制作用。發(fā)酵液的穩(wěn)定性測(cè)定結(jié)果表明，發(fā)酵液低溫貯藏效果好，對(duì)熱、酸堿及紫外

3、光照穩(wěn)定性較強(qiáng)，對(duì)日光照穩(wěn)定性較差。
　　 2.發(fā)酵液通過有機(jī)溶劑萃取實(shí)驗(yàn)，選擇乙酸乙酯為適宜的萃取劑。經(jīng)預(yù)處理、溶媒萃取等步驟后，采用硅膠柱色譜對(duì)活性物質(zhì)進(jìn)行分離。首先以硅膠薄層色譜初步篩選分離條件，在此基礎(chǔ)上，進(jìn)一步優(yōu)化柱色譜條件：依次采用石油醚：異丙醇為9:1、7:3、5:5、2:8洗脫，結(jié)果取得了較好的分離效果。最后采用硅膠薄板層析法，以石油醚：異丙醇：甲醇為10:1:0.5做展開劑薄層層析時(shí)，分離得到了1種對(duì)煙草青枯病

4、菌有明顯抑菌作用的活性物質(zhì)。
　　 3.利用高效液相色譜對(duì)分離產(chǎn)品進(jìn)行純度分析，為得到最佳的效果，試驗(yàn)對(duì)色譜條件進(jìn)行優(yōu)化，結(jié)果為：色譜柱EclipseXDB_C18，5μm，4.6㎜×150㎜；以甲醇-水系統(tǒng)60:40為流動(dòng)相；流動(dòng)相流速為1mL/min；柱溫30℃；紫外檢測(cè)波長(zhǎng)207nm。結(jié)果表明，分離提取的活性物質(zhì)純度較高，可以滿足光譜分析等進(jìn)一步研究的需要。
　　 4.拮抗產(chǎn)物純品的理化性質(zhì)和官能團(tuán)反應(yīng)。通過捷克八