倏逝波光纖免疫傳感器BTV抗體檢測(cè)方法的建立.pdf

1、藍(lán)舌病作為一種世界動(dòng)物衛(wèi)生組織(OIE)必須上報(bào)的烈性動(dòng)物傳染病，主要危害牛、羊等家畜，在世界范圍內(nèi)廣泛流行。國(guó)際組織和各國(guó)政府均將藍(lán)舌病列為動(dòng)物疫病監(jiān)測(cè)和防控的重點(diǎn)，對(duì)動(dòng)物和動(dòng)物制品國(guó)際間貿(mào)易具有非常重要的影響。目前，世界各國(guó)尚無(wú)有效的藍(lán)舌病疫苗和防治措施，只能以免疫監(jiān)測(cè)為主，因此，建立一種快速、靈敏、方便、特異性強(qiáng)的BTV檢測(cè)方法就變得尤為重要。
　　 倏逝波光纖免疫傳感器是將倏逝波原理、熒光免疫分析原理及光纖檢測(cè)結(jié)合于一體

2、的檢測(cè)裝置，具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、檢測(cè)速度快、操作簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)。因此，在爆炸性物品檢測(cè)、環(huán)境監(jiān)測(cè)、毒品和濫用藥品檢測(cè)、臨床疾病監(jiān)測(cè)、食品衛(wèi)生監(jiān)測(cè)及生物學(xué)檢測(cè)等領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用前景。
　　 本研究利用BTV VP7單克隆抗體和BTV VP7蛋白(均為本實(shí)驗(yàn)室制備)，進(jìn)行BTV抗體倏逝波光纖免疫傳感器檢測(cè)方法的研究。用BTV VP7蛋白作為光纖包被抗原，VP7單克隆抗體作為檢測(cè)樣品，Cy3標(biāo)記的羊抗鼠。IgG抗體作為檢測(cè)二抗，進(jìn)行

3、BTV抗體倏逝波光纖免疫傳感器檢測(cè)方法的建立。本研究借鑒ELISA常用的棋盤法，對(duì)光纖包被VP7蛋白濃度和Cy3標(biāo)記抗體濃度進(jìn)行優(yōu)化，結(jié)果證實(shí)VP7蛋白最佳包被濃度為150μg/ml，Cy3標(biāo)記抗體的最佳實(shí)驗(yàn)濃度為20μg/ml。經(jīng)過(guò)初步優(yōu)化，得到的VP7單克隆抗體檢測(cè)下限為10 ng/ml。另外，在實(shí)驗(yàn)后期對(duì)檢測(cè)步驟進(jìn)行了優(yōu)化，將原來(lái)的兩步法改為一步法，不僅簡(jiǎn)化了檢測(cè)步驟，還縮短了檢測(cè)時(shí)間，使此檢測(cè)方法更加簡(jiǎn)便、迅速。
　　

4、在倏逝波光纖免疫傳感器檢測(cè)實(shí)驗(yàn)中，光纖再生問(wèn)題一直難以解決。本研究用甘氨酸-HCl緩沖液(pH2.0)、TEA溶液(pH11.5)和0.5％的SDS(pH1.9)溶液進(jìn)行光纖的再生，結(jié)果顯示TEA溶液(pH11.5)的再生效果最好，可以再生至少10個(gè)循環(huán)；甘氨酸-HCl緩沖液(pH2.0)可以再生6個(gè)循環(huán)；而0.5％的SDS(pH1.9)溶液只能再生2個(gè)循環(huán)。因此，在本實(shí)驗(yàn)中選用TEA溶液作為光纖再生液。
　　 最后，將此檢測(cè)方