蘑菇屬菌種質(zhì)量檢測(cè)技術(shù)研究.pdf

1、菌種是食用菌產(chǎn)業(yè)的重要生產(chǎn)資料之一，其質(zhì)量?jī)?yōu)劣直接關(guān)系到食用菌產(chǎn)業(yè)能否良性發(fā)展。本研究以As2796、新登96、高溫1號(hào)、大肥菇和寶地蘑菇五個(gè)蘑菇菌株為材料，從菌種活力、菌種純度、菌種種性三個(gè)方面進(jìn)行研究，建立了一套比較完整的菌種質(zhì)量檢測(cè)技術(shù)。主要結(jié)果如下：　　1.菌種活力　　以五個(gè)菌種在不同培養(yǎng)時(shí)間的菌絲為材料，測(cè)定了幾個(gè)與菌種老化相關(guān)的生理生化指標(biāo)，結(jié)果表明：丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性、過(guò)氧化氫酶(CAT

2、)活性和電導(dǎo)率與不同培養(yǎng)時(shí)間的蘑菇菌種間沒(méi)有顯著的內(nèi)在聯(lián)系；而酸性磷酸酶(ACP)活性隨著菌齡的增加均逐漸降低?！　?.菌種純度　　以五個(gè)菌種的菌絲為材料，分別接種不同濃度的細(xì)菌，使之形成隱性污染。設(shè)計(jì)一對(duì)細(xì)菌16SrDNA的高度保守區(qū)序列的引物對(duì)細(xì)菌和蘑菇進(jìn)行擴(kuò)增;結(jié)果表明，細(xì)菌擴(kuò)增產(chǎn)物為1500bp，而蘑菇?jīng)]有擴(kuò)增產(chǎn)物；同時(shí)，對(duì)細(xì)菌16SrDNAPCR擴(kuò)增的靈敏度進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果表明，PCR最低能檢測(cè)1pg大腸桿菌DNA。最后，利

3、用平板劃線法、液體培養(yǎng)法、煮沸PCR擴(kuò)增法和液氮冷凍—高溫水浴—溶菌酶破壁PCR擴(kuò)增法進(jìn)行隱性污染的檢測(cè)，結(jié)果表明：平板劃線法和煮沸PCR擴(kuò)增法較另外兩種效果好?！　?.菌種種性　　以五種蘑菇的DNA為材料，進(jìn)行核糖體RNA轉(zhuǎn)錄間隔序列(ITS)擴(kuò)增、酶切、測(cè)序，結(jié)果表明，新登96和寶地蘑與另外三個(gè)差異明顯。同時(shí)進(jìn)行隨機(jī)引物擴(kuò)增多態(tài)性(RAPD)和相關(guān)序列擴(kuò)增多態(tài)性(SRAP)擴(kuò)增，結(jié)果從200個(gè)RAPD引物中篩選了4個(gè)，從153個(gè)