杉木PGPR菌分離篩選及其微生物復(fù)合菌肥研制.pdf

1、杉木(Cunninghamia lancceolata)是亞熱帶針葉樹種，而且是我國特有的速生針葉用材林樹種，栽培區(qū)域達(dá)16個(gè)省市之多，木材產(chǎn)量超過了全國商品用材的25％。然而，杉木人工純林連栽引起地力嚴(yán)重衰退及生產(chǎn)力下降。雖然通過樹種搭配構(gòu)建混交林能有效緩解林地土壤結(jié)構(gòu)和養(yǎng)分衰減，但僅靠林分優(yōu)化提高肥力的效果有限，土壤N、P等元素仍然缺乏，嚴(yán)重制約了人工林可持續(xù)發(fā)展。因此本研究對(duì)杉木根際固氮菌、溶磷菌進(jìn)行篩選，得到高效固氮、解磷菌株；

2、并對(duì)其分泌IAA，生理生化等特性進(jìn)行研究，發(fā)酵條件優(yōu)化，適當(dāng)比例復(fù)配，形成微生物復(fù)合菌肥，使用于杉木幼苗，進(jìn)行肥效檢測(cè)。主要研究結(jié)果如下：
　　 (1)采甩Ashby培養(yǎng)基篩選杉木根際固氮菌，用乙炔還原測(cè)定固氮菌固氮酶活，得到16株固氮能力較強(qiáng)的菌株。利用蒙金娜有機(jī)培養(yǎng)基和PKO培養(yǎng)基篩選杉木根際解磷菌，根據(jù)透明圈直徑(D)/菌落大小(d)的比值，分離篩選出D/d大于1.6的解有機(jī)磷和無機(jī)磷菌株各12株。篩選出來的固氮菌，溶磷菌

3、用Salkowski比色法測(cè)定IAA分泌量。結(jié)果表明：16株菌中有5株固氮酶活性大150nmol·mL-1·h-1，最高的NGJ－4達(dá)264.7nmol·ml-1·h-1，NGX－5次之為237.4 nmol·mL-1·h-1。大部分菌株都能分泌生長素，有6株菌分泌能力較強(qiáng)IAA濃度大于20 mg·L-1，其中NGX－5達(dá)35.8、NGJ－3為32.1、NGJ-4為27.8、NGJ-8為27.7(mg·L-1)。溶解有機(jī)磷能力最強(qiáng)的是P

4、y16，Py10和Py3(分別為7.131mg/100mL，5.907mg/100mL和6.514mg/100mL，)；無機(jī)磷的足Pw10，Pw6，Pw20分別是23.2mg/100mL，18.59mg/100mL，17.26mg/100mL。分泌IAA最大的是解有機(jī)磷菌是Py18，Py16和Py3(分別為38.80mg/L，37.29mg/L和35.79mg/L)，無機(jī)磷菌是Pw6，Pw8，Pw21(分別是45.340mg/L，39.

5、340mg/L，27.480mg/L)綜合考慮最后篩選出NGJ－4，NGX－5和NGJ－8三株固氮菌，Py16，Py3兩株解有機(jī)磷菌和一株解無機(jī)磷菌Pw6這6株菌，在多功能微生物菌肥研制中具有重要開發(fā)潛能。
　　 (2)對(duì)固氮菌和溶磷菌分別做搖瓶發(fā)酵條件優(yōu)化，通過單因子變量和正交試驗(yàn)得到最佳搖瓶發(fā)酵條件，固氮菌最適條件為：葡萄糖12g，氯化鈉0.2g，碳酸鈣5g，磷酸二氫鉀0.2g，硫酸鎂0.2g，硫酸鈣0.2，水1000mL，

6、pH7.2，溫度33℃；解無機(jī)磷解磷菌最適條件為：葡萄糖10g，磷酸鈣3g，硫酸銨0.5g，氯化鈉0.1g，硫酸鎂0.1g，氯化鉀0.2g，硫酸錳0.004g，硫酸亞鐵0.002g，酵母膏0.6g，水1000mL，pH7.2，溫度30℃；解有機(jī)磷解磷菌最適條件為：葡萄糖10g，硫酸銨0.5g，氯化鈉0.3g，氯化鉀0.3g，硫酸亞鐵0.03g，硫酸錳0.03g，碳酸鈣，5g酵母膏0.4g，卵磷脂0.1g，水1000mL，pH7.2，溫度

7、35℃。最佳搖床培養(yǎng)條件都在160r/min，接種量10％，裝液量60mL(250mL三角燒瓶)這樣使固氮菌的酶活以及解磷菌的解磷力達(dá)到最高。
　　 (3)將固氮菌，解有機(jī)磷菌和解無機(jī)磷菌按最佳發(fā)酵條件發(fā)酵分別用無菌水稀釋，按照不同比例復(fù)配，以草木灰和甲殼素為載體施用于0.5年生的杉木苗17株，月增長率為33.9％-90.5％，得到最佳復(fù)合生物菌肥配方：固氮菌，解有機(jī)磷菌和解無機(jī)磷菌稀釋成質(zhì)量百分濃度均為15％，按體積比為1.5