煙草抗病促生復(fù)合微生物菌劑的研制及效果評價.pdf

1、煙草黑脛病(Phytophthora parasitica var. nicotianae)和青枯病(Ralstonia solanacearum E.F Smith)是煙葉生產(chǎn)上危害最嚴重的病害，特別在多年連作的煙田，這兩種病害的發(fā)生尤其嚴重。由于兩種病害的病原菌主要存在于病田土壤，一旦發(fā)生很難治理。目前生產(chǎn)上對土傳病害主要采用土壤消毒或藥劑灌根等方式防治，大量土壤用藥不僅對土壤及環(huán)境造成污染，而且持效短、病害容易反復(fù)。利用土壤有益微

2、生物控制土傳病害則可以避免上述問題。
　　本研究利用實驗室前期從各地?zé)熖锿寥乐蟹蛛x獲得的對青枯病菌和黑脛病菌有抗菌活性的PGPR細菌和木霉菌為材料，首先分析了各菌株對煙草黑脛病菌和青枯病菌的拮抗活性，從中選取抗菌活性較高的菌株6株，測定了各菌株對煙草幼苗的促生作用；將篩選出的菌株進行了培養(yǎng)條件優(yōu)化，分析了不同添加物對拮抗細菌活性的影響；初步分析了菌劑組合的促生效果。主要研究結(jié)果如下：
　　1.生防細菌對煙草青枯病菌和黑脛病菌

3、的抑菌作用
　　將實驗室前期獲得的PGPR(Plant Growth-Promoting Rhizobacteria)細菌分別與煙草青枯病菌和黑脛病菌對峙培養(yǎng)，共獲得5株拮抗效果較好的細菌菌株。這5個菌株都屬于類芽孢桿菌屬（Peanibacillus sp.），其中菌株H1-2、B1、H7-3-1為多粘類芽孢桿菌（Peanibacillus polymyxa）。
　　2.生防木霉菌株對煙草黑脛病的重寄生作用
　　將本實

4、驗室前期保存的深綠木霉菌株M5(Trichoderma atroviride)與煙草黑脛病原菌對峙培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)，13d后黑脛病菌菌絲體完全被木霉菌株覆蓋。
　　3.各菌株室內(nèi)促生防效分析
　　采用盆栽實驗，分析了各菌株對煙草幼苗生長的影響，其中H1-2對煙苗的促生效果最好，其地上部和地下部鮮重分別比對照增加了81.18％、218.94%，其它各菌株對煙苗的生長也有明顯的促進作用。
　　4.各菌株相互作用分析
　　對

5、5株P(guān)GPR細菌與木霉菌株M5的相互作用分析，發(fā)現(xiàn)各拮抗細菌菌株與M5間無拮抗作用。將各拮抗細菌菌株間兩兩組合，分析各拮抗細菌菌株間有無拮抗作用。結(jié)果顯示，PGPR細菌菌株B1、H1-2、H7-3-1、L2-3-1、NX1-4-4間均無抑制作用，拮抗細菌菌株與木霉菌株M5間也沒有抑制作用。
　　4.復(fù)合菌株室內(nèi)促生、防病防效分析
　　采用盆栽試驗，分析了各菌株及復(fù)合菌株對煙草幼苗的生長，結(jié)果顯示，復(fù)合菌株對煙草幼苗的促生效果

6、最好，其地上部和地下部鮮重分別為23.34g、7.46g，分別比對照增加了41.54%、63.96%。對煙草黑脛病的防效為49.05%。
　　5.拮抗細菌菌株發(fā)酵條件的優(yōu)化
　　以菌株B1為材料對復(fù)合菌株中細菌發(fā)酵培養(yǎng)基碳源、氮源及無機鹽進行優(yōu)化，篩選得到最適宜細菌菌株生長的培養(yǎng)基組分及配比為：1%碳酸鈣、0.3%玉米粉、0.3%大豆粉。
　　進一步對其培養(yǎng)條件進行優(yōu)化，發(fā)現(xiàn)最適于細菌菌株生長的條件為3%接種量、pH值

7、7.0～7.5、裝瓶量60ml(250ml錐形瓶)、溫度為30℃、培養(yǎng)時間為48h。
　　6.不同添加劑對拮抗細菌活性的影響
　　將腐植酸、麥芽糊精、海藻酸鈉等15種不同添加物按一定量分別加入到發(fā)酵液中，發(fā)現(xiàn)腐植酸、麥芽糊精、CMC-Na、海藻酸鈉4種物質(zhì)可以提高發(fā)酵液菌體存活率。通過正交設(shè)計試驗以及貯存穩(wěn)定性試驗對液劑保護劑進行了研究，初步確定最佳添加保護劑配方為0.8%腐植酸+0.4%麥芽糊精+2%CMC-Na+1.5%