利用芽孢桿菌防治魚腥草白絹病的研究.pdf

1、本研究從魚.腥草根圍土壤中和葉圍分離篩選對魚腥草白絹病有拮抗作用的芽孢桿菌，經(jīng)盆栽防效試驗，篩選出具有較好生防效果的菌株B8。并對B8菌株進行了種類鑒定，定殖能力和抑菌譜測定，以及生物學特性和生防機制的研究。結果如下：
　　 1，從魚腥草根圍土壤中和葉圍分離到400多株芽孢桿菌菌株，通過平板對峙培養(yǎng)篩選出具有拮抗活性的菌株43株，其中拮抗活性較好的4株菌株用于盆栽防病試驗，篩選出對魚腥草白絹病具有較好生防潛力的菌株B8。在平板對

2、峙培養(yǎng)和盆栽試驗中，B8菌株對魚腥草白絹病病原菌的抑制效果分別達67.7％和56.8％。
　　 2，用利福平標記B8菌株測定其定殖能力，結果表明：該菌在魚腥草根圍土壤中的定殖能力較強，在接種后第7d達到初始菌量的1.85倍，接種后15d菌量仍為初始菌量的20.8％。
　　 3，B8菌株在NA平板上菌落呈圓形、邊緣不整齊、有皺紋、白色、不透明；顯微形態(tài)觀察：菌體呈桿狀（0.8μm×3.2μm）、產(chǎn)生橢圓形芽孢（0.7μm×

3、1.7μm）、芽孢中生、革蘭氏陽性；結合18項生理生化指標測定以及16SrDNA序列分析，將B8菌株鑒定為枯草芽孢桿菌(BacillussubtilisCohn)。
　　 4，對B8菌株的生物學特性研究表明：在BPY、YT、YPG、YSP、LB、NA6種發(fā)酵培養(yǎng)基中，菌體生長最好的培養(yǎng)基為YPG，其次為YSP，最差為NA;產(chǎn)生拮抗物質(zhì)最多的培養(yǎng)基為YSP，其次為NA，最少為BPY。選擇YSP作為發(fā)酵培養(yǎng)基；培養(yǎng)12h后，B8開始

4、產(chǎn)生拮抗物質(zhì)，48h時菌體生長量和產(chǎn)生拮抗物質(zhì)量均達到最佳；在25～35℃溫度范圍內(nèi)，B8能夠較好的生長且產(chǎn)生一定量的拮抗物質(zhì)，35℃下生長最好，30℃下產(chǎn)生拮抗物質(zhì)最多；培養(yǎng)基初始pH在6～9時，B8生長較好且能產(chǎn)生拮抗物質(zhì)，pH=7時，B8生長最好，產(chǎn)生拮抗物質(zhì)最多：250ml三角瓶裝液量為20m1時，B8的生長量和產(chǎn)生拮抗物質(zhì)的量最佳。
　　 5，對B8菌株拮抗機理的初步研究表明：B8菌株產(chǎn)生的揮發(fā)性物質(zhì)能夠抑制Scler

5、otiumrolfsilSacc菌絲的生長。B8菌株的發(fā)酵濾液對SclerotiumrolfsilSacc.菌核的形成以及萌發(fā)都有一定的抑制作用。顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)，經(jīng)過該菌發(fā)酵濾液處理過后，.SclerotiumrolfsilSacc.菌絲頂端膨大呈圓形、橢圓形或念珠狀、畸形分支細胞壁破裂、細胞質(zhì)外溢、菌絲裂解和斷裂。該發(fā)酵濾液的活性物質(zhì)對熱以及強酸、強堿的穩(wěn)定性較差。對B8菌株抗菌物質(zhì)的提取和分離結果表明，該菌的拈抗物質(zhì)為蛋白質(zhì)，經(jīng)過S