檉柳Lea基因抗重金屬功能及與elF5A共轉(zhuǎn)化山新楊的研究.pdf

1、Lea和eIF5A都是參與了植物的抗逆脅迫。我們已經(jīng)在檉柳中分別克隆到了Lea和eIF5A基因。在此基礎(chǔ)上,擬對(duì)Lea基因的抗重金屬能力以及Lea和eIF5A基因共轉(zhuǎn)化山新楊進(jìn)行研究。首先,利用實(shí)時(shí)定量RT-PCR技術(shù)研究了不同脅迫條件下Lea基因在檉柳中的時(shí)序表達(dá)模式。結(jié)果表明,Lea基因能夠應(yīng)答NaCl、ZnCl2、CdCl2以及CuSO4脅迫。亞細(xì)胞定位的結(jié)果表明,Lea-GFP蛋白定位于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核。
　　 為驗(yàn)證Le

2、a基因?qū)χ亟饘倜{迫的抗性,選取本實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)轉(zhuǎn)入Lea基因山新楊4個(gè)株系和非轉(zhuǎn)基因山新楊對(duì)照株系(WT),轉(zhuǎn)基因株系分別為1-4號(hào)。對(duì)這5個(gè)株系組培苗進(jìn)行了CdCl2脅迫試驗(yàn),從生長(zhǎng)情況來看1號(hào)和2號(hào)抗性較強(qiáng)。選擇1號(hào)、2號(hào)和非轉(zhuǎn)基因山新楊進(jìn)行脅迫分析逆境脅迫條件下非轉(zhuǎn)基因植株和這些轉(zhuǎn)基因植株的SOD活性、丙二醛(MDA)含量、POD活性、脯氨酸含量、可溶性蛋白含量等指標(biāo)的變化。結(jié)果表明:脅迫7天后,轉(zhuǎn)Lea基因山新楊株系的SOD活性、P

3、OD活性、脯氨酸含量要高于非轉(zhuǎn)基因山新楊株系,而MDA含量以及可溶性糖含量要低于非轉(zhuǎn)基因山新楊株系。這說明Lea基因可能通過調(diào)控增強(qiáng)植物體內(nèi)活性氧清除能力、增加脯氨酸含量,調(diào)控可溶性蛋白的合成來提高植物對(duì)鹽脅迫耐受能力。
　　 將Lea和eIF5A基因構(gòu)建到植物表達(dá)載體pROKⅡ中,形成重組質(zhì)粒pROKⅡ-Lea-eIF5A。通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)的山新楊的遺傳轉(zhuǎn)化,使兩個(gè)外源基因整合到山新楊基因組中。獲得了14個(gè)卡那霉素抗性株系,對(duì)轉(zhuǎn)