轉(zhuǎn)基因紫花苜蓿及其抗重金屬、抗有機(jī)污染物研究.pdf

1、工業(yè)化不斷發(fā)展給我國(guó)的土壤環(huán)境造成的污染問(wèn)題已經(jīng)相當(dāng)嚴(yán)峻，不解決污染問(wèn)題，經(jīng)濟(jì)的持續(xù)發(fā)展和人類健康都會(huì)受到損害，如此看來(lái)，控制與修復(fù)土壤污染是十分緊迫和必須的?，F(xiàn)在，一般的土壤污染修復(fù)指的是物理/化學(xué)修復(fù)和生物修復(fù)。植物修復(fù)技術(shù)有著快速、高效、成本低，于環(huán)境和諧的眾多優(yōu)點(diǎn)，是近年來(lái)發(fā)展前景廣闊的新型修復(fù)技術(shù)。
　　本研究旨在利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)將兩個(gè)基因轉(zhuǎn)入紫花苜蓿以增強(qiáng)其對(duì)土壤重金屬和有機(jī)物復(fù)合污染的修復(fù)能力;這兩種基因分別是對(duì)多種重

2、金屬都有效的金屬硫蛋白基因MT10，對(duì)降解含硝基化合物非常有效的基因NSFA。目前，國(guó)內(nèi)外還沒(méi)有同時(shí)利用這兩個(gè)基因進(jìn)行土壤修復(fù)的報(bào)道的出現(xiàn)。
　　實(shí)驗(yàn)構(gòu)建含有MT10、NSFA基因的植物雙元表達(dá)載體:用目的基因替換表達(dá)載體pBI121上的Gus基因，構(gòu)建P35S-MT(NSFA)-T35S表達(dá)盒，然后通過(guò)凍融法將表達(dá)載體pBI121-NSFA、pBI121-MT一并轉(zhuǎn)入同一農(nóng)桿菌LBA4404中。
　　實(shí)驗(yàn)選取“阿爾岡金”“

3、金皇后”“維多利亞”三種紫花苜蓿，最終選定以“金皇后”的下胚軸作為基因轉(zhuǎn)化的受體，對(duì)組織培養(yǎng)條件優(yōu)化，篩選出胚性愈傷組織出愈率高的條件，針對(duì)各時(shí)期愈傷組織培養(yǎng)的特定需要，考察了蔗糖、瓊脂、不同的激素配比、添加抗褐化劑等因素，進(jìn)而優(yōu)化了適合“金皇后”的遺傳轉(zhuǎn)化再生體系。經(jīng)共轉(zhuǎn)化將MT10基因和NSFA基因?qū)搿敖鸹屎蟆弊匣ㄜ俎Ｖ?。?jīng)共培養(yǎng)、選擇培養(yǎng)培育出了240株抗卡那霉素的轉(zhuǎn)基因植株。
　　對(duì)篩選出的240株抗性植株使用PCR和R