拮抗放線(xiàn)菌的篩選及其對(duì)香蕉鐮刀菌枯萎病防治作用的研究.pdf

1、鐮刀菌枯萎病是一種對(duì)外檢疫性病害,由尖孢鐮刀菌古巴專(zhuān)化型(Fusariumoxysporum f.sp.cubense)侵染引起的維管束系統(tǒng)性病害,又稱(chēng)巴拿馬病、黃葉病。2008年在海南省各市縣香蕉種植區(qū)采集發(fā)病的香蕉植株近地面莖段維管束病變的樣本,分離得到的病原菌經(jīng)過(guò)形態(tài)學(xué)和致病性鑒定后,確定該病原菌為:尖孢鐮刀菌古巴專(zhuān)化型(Fusarium oxysporum f.sp.cubense)。本論文是以該病原菌為靶標(biāo)菌,分別從東方、八所

2、、黃流、三亞和廣東省湛江、徐聞、海安等香蕉種植地采集的根際土樣進(jìn)行拮抗放線(xiàn)菌分離篩選,最終得到拮抗活性強(qiáng)且穩(wěn)定的拮抗菌株D4-4-L菌株,以該菌株為研究對(duì)象,對(duì)其鑒定、發(fā)酵條件的優(yōu)化及盆栽和田間防治效果等進(jìn)行了研究,主要結(jié)果如下:
　　 (1)本實(shí)驗(yàn)對(duì)從海南全島和廣東省香蕉種植地采集的根際土樣進(jìn)行拮抗放線(xiàn)菌的分離與純化,得到放線(xiàn)菌菌株139個(gè)。通過(guò)紙片擴(kuò)散法,篩選出對(duì)香蕉尖孢鐮刀菌枯萎病4號(hào)生理小種具有拮抗作用的菌株8個(gè)。分別用

3、這8株放線(xiàn)菌發(fā)酵上清液與香蕉枯萎病病原菌孢子懸浮液混合12 h后,測(cè)得有2株放線(xiàn)菌發(fā)酵上清液對(duì)病原菌孢子萌發(fā)的抑制率超過(guò)80％。進(jìn)一步試驗(yàn)表明,其中菌株D4-4-L不僅對(duì)香蕉枯萎病4號(hào)生理小種的菌絲有良好、穩(wěn)定的抑制作用,且對(duì)另外14個(gè)不同專(zhuān)化型病原菌也有一定的抑制作用。
　　 (2)病原菌--尖孢鐮孢菌古巴專(zhuān)化型(Fusarium oxysporum f.sp.cubense)在不同pH值培養(yǎng)基上培養(yǎng)4 d后,發(fā)現(xiàn)尖孢鐮刀菌菌

4、落在pH值4.0-9.0范圍內(nèi)均可生長(zhǎng),pH值為6.0-7.0時(shí)最適,菌落直徑平均在3.7-3.9 cm之間。試驗(yàn)結(jié)果表明:尖孢鐮刀菌在不同營(yíng)養(yǎng)成分的培養(yǎng)基上培養(yǎng),N源對(duì)尖孢鐮刀菌菌絲生長(zhǎng)的影響大于C源,生長(zhǎng)到第6 d時(shí),全糖型培養(yǎng)基產(chǎn)孢量最大,且小型分生孢子的產(chǎn)孢量也最大,使香蕉苗發(fā)病率達(dá)到100％,而大型分生孢子產(chǎn)生的最佳培養(yǎng)基為低氮型培養(yǎng)基。
　　 (3)通過(guò)對(duì)D4-4-L菌株進(jìn)行培養(yǎng)性狀、形態(tài)特征、生理生化特征、16S

5、rDNA序列的測(cè)定及其系統(tǒng)發(fā)育分析的研究,表明D4-4-L為鏈霉菌屬(Streptomyces)。
　　 (4)為了提高鏈霉菌菌株D4-4-L的發(fā)酵濾液對(duì)香蕉枯萎病的防治效果,采用不同碳、氮源試驗(yàn)設(shè)計(jì),優(yōu)化其發(fā)酵培養(yǎng)基。使用優(yōu)化培養(yǎng)基搖瓶發(fā)酵試驗(yàn)得出,使用優(yōu)化培養(yǎng)基:10％大米粉、1.5％大豆粉、K2HPO41g,MaCl1g,CaCO34g,自來(lái)水1000mL,pH7條件下進(jìn)行搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)6d,有利于生物活性物質(zhì)的積累。