幾種林木病原菌拮抗放線菌的篩選及其活性物質(zhì)研究.pdf

1、本文對(duì)采自秦嶺火地塘林區(qū)的10個(gè)土樣進(jìn)行了放線菌的分離，共得到了512株菌株，經(jīng)過初步分類合并，采用其中的292株進(jìn)行了對(duì)幾種常見林木病原菌的拮抗試驗(yàn)，結(jié)合發(fā)酵液的活性測(cè)定和生測(cè)治試驗(yàn)得到了一株抑菌譜較廣、活性極強(qiáng)的放線菌--268號(hào)菌株，并對(duì)其做了一系列的研究。主要研究結(jié)果如下： 1.以高氏一號(hào)瓊脂、天門冬素淀粉瓊脂和精氨酸瓊脂培養(yǎng)基做為分離培養(yǎng)基，重鉻酸鉀濃度為150 mg/L，可以較好的分離該土樣中的放線菌。 2.

2、各土樣的各層鏈霉菌屬均為絕對(duì)優(yōu)勢(shì)屬，其它屬分離出的較少，粉紅孢類群、金色類群和灰褐類群是大多土樣的優(yōu)勢(shì)類群。 3.平板初篩結(jié)果表明：14、42、45、50、162、189、268及289號(hào)菌對(duì)多種靶菌均具有較強(qiáng)的拮抗作用。發(fā)酵液的活性測(cè)定表明：42、189和268號(hào)菌株對(duì)多種靶菌存在較強(qiáng)的抑制性。預(yù)防效果的生物測(cè)定結(jié)果表明：268號(hào)菌株的效果最好，預(yù)防效果為64.7％。 4.對(duì)268號(hào)菌株的發(fā)酵液進(jìn)行了萃取試驗(yàn)，其乙酸乙

3、酯相具有強(qiáng)烈的抑菌活性。乙酸乙酯相的薄層層析試驗(yàn)表明：以體積比10：7的石油醚和丙酮為展開劑可以較好地將活性組分與其他組分分離開。并對(duì)268號(hào)菌株活性產(chǎn)物的性質(zhì)進(jìn)行了初步研究，結(jié)果表明：該物質(zhì)沒有揮發(fā)性，對(duì)酸有著較好的穩(wěn)定性，對(duì)強(qiáng)堿不穩(wěn)定，對(duì)熱和紫外線較為穩(wěn)定。 5.通過單因素試驗(yàn)結(jié)合正交試驗(yàn)，對(duì)268號(hào)菌株的發(fā)酵培養(yǎng)基和發(fā)酵條件進(jìn)行了優(yōu)化，結(jié)果表明：最適的發(fā)酵培養(yǎng)基配方為：黃豆餅粉10 g/L，蛋白胨3 g/L，葡萄糖10g/

4、L，NaCl 2.5 g/L，F(xiàn)eS04 0.01g/L，pH≈8.0，最適的發(fā)酵條件為：菌齡48 h，接種量2％，裝液量200 ml，發(fā)酵時(shí)間6 d，搖床轉(zhuǎn)速150 dr/min。 6.對(duì)268號(hào)菌株活性產(chǎn)物的抑菌機(jī)制進(jìn)行了初步研究，結(jié)果表明：其抑菌活性主要體現(xiàn)在對(duì)菌絲的影響上，對(duì)楊樹潰瘍病、蘋果腐爛病和楊樹腐爛病病原菌的生長(zhǎng)抑制作用最強(qiáng)，EC50分別為0.0076 ml/ml、0.0061 ml/ml和0.0043 ml/m