不同地區(qū)野生鋸緣青蟹腸道菌群的分子生態(tài)學(xué)分析.pdf

1、鋸緣青蟹(Scylla serrata)是我國(guó)東南沿海重要的海洋經(jīng)濟(jì)蟹類之一。隨著養(yǎng)殖規(guī)模的擴(kuò)大，青蟹病害頻繁暴發(fā)，給養(yǎng)殖生產(chǎn)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。人們通常使用抗生素、化學(xué)合成藥物等來(lái)防治青蟹病害，但長(zhǎng)期、大量的使用抗生素不僅破壞腸道正常菌群組成，造成腸道菌群的微生態(tài)失調(diào)，導(dǎo)致對(duì)病原微生物的易感性增加以及細(xì)菌耐藥性，而且還會(huì)在體內(nèi)殘留，嚴(yán)重阻礙了無(wú)公害青蟹養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。養(yǎng)殖動(dòng)物腸道內(nèi)正常的菌群對(duì)機(jī)體的健康有著重要的影響，它們與宿主間的微生

2、態(tài)平衡保證了宿主動(dòng)物的正常代謝，提高了宿主的免疫抗病力，同時(shí)還能為宿主的生長(zhǎng)發(fā)育提供豐富的維生素等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。因此，由改善腸道菌群、促進(jìn)動(dòng)物健康的益生菌制成的餌料添加劑的研究逐漸受到重視，而對(duì)青蟹腸道菌群的了解是研究和開(kāi)發(fā)青蟹專用益生菌添加劑的先決條件。
　　 利用DGGE(Denaturing Gradient Gel Electrophoresis，DGGE)技術(shù)對(duì)七個(gè)地區(qū)的野生鋸緣青蟹的腸道總菌群進(jìn)行了群落結(jié)構(gòu)分析和比較。對(duì)

3、14個(gè)樣本直接提取其菌群總DNA，用引物BV3-F和BV3-R擴(kuò)增16S rDNA基因的V3可變區(qū)，再結(jié)合DGGE技術(shù)分析各個(gè)樣本的群落組成。結(jié)果表明，七個(gè)地區(qū)的青蟹腸道菌群的結(jié)構(gòu)多樣性存在較大差異，相似性指數(shù)在30％～71％之間，且同一地區(qū)雌雄樣本的腸道菌群相似性也存在差異。對(duì)DGGE圖譜中的12條主條帶進(jìn)行回收，測(cè)序結(jié)果經(jīng)過(guò)Blast比對(duì)表明：12個(gè)條帶代表的細(xì)菌分別屬于三個(gè)不同的細(xì)菌類群：變形桿菌(Proteobacterium)

4、、厚壁菌(Firmicutes)和棍狀厭氧菌(Anaerorhabdus)，其中7個(gè)條帶代表的細(xì)菌為不可培養(yǎng)的。
　　 利用16S rDNA-DGGE技術(shù)對(duì)七個(gè)不同地區(qū)的野生鋸緣青蟹的腸道的可培養(yǎng)菌群進(jìn)行了群落結(jié)構(gòu)分析和比較。對(duì)14個(gè)樣本分別研磨后，用LB培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，然后對(duì)菌液提取總DNA，再用引物BV3-F和BV3-R擴(kuò)增可培養(yǎng)菌群的16S rDNA基因的V3可變區(qū)，再結(jié)合DGGE技術(shù)分析各個(gè)樣本的群落組成。結(jié)果表明：七個(gè)

5、地區(qū)青蟹腸道的可培養(yǎng)菌群的結(jié)構(gòu)多樣性存在較大差異，相似性指數(shù)在10％～72％之間，且同一地區(qū)雌雄樣本的腸道可培養(yǎng)菌群的相似性也存在差異。對(duì)可培養(yǎng)菌群的DGGE圖譜中的6條主條帶進(jìn)行回收，測(cè)序結(jié)果表明：6個(gè)條帶代表的細(xì)菌主要分為兩個(gè)不同的細(xì)菌類群：變形桿菌(Proteobacterium)和厚壁菌(Firmicutes)。
　　 結(jié)論：
　　 1.16S rDNA PCR-DGGE技術(shù)在分析青蟹腸道菌群方面比傳統(tǒng)培養(yǎng)方法具