恩諾沙星在鋸緣青蟹（Scylla serrata）體內(nèi)藥物代謝規(guī)律研究.pdf

1、本論文建立了鋸緣青蟹不同組織中恩諾沙星高效液相色譜檢測法，研究了給藥途徑(肌肉注射、口灌給藥)、劑量、鹽度和溫度下，恩諾沙星在鋸緣青蟹體內(nèi)代謝規(guī)律。 1、測定方法建立。本研究優(yōu)化了組織樣品中恩諾沙星和環(huán)丙沙星提取方法、色譜條件，建立了鋸緣青蟹血淋巴、肌肉、肝胰臟和性腺等組織中恩諾沙星和環(huán)丙沙星含量同時檢測的高效液相色譜法。高效液相色譜儀采用艾捷倫公司Agilent 1100系列，包括四元泵、自動進樣器、柱溫箱、熒光檢測器及HP化

2、學(xué)工作站，色譜柱為ZORBAX SB-C18，4.6×150 mm。流動相為乙腈：磷酸鹽緩沖液(含10 mmol/L NaH2PO4和5 mmol/L溴化四丁基銨，25％磷酸調(diào)pH至2.0)=14.5：85.5(V/V)。流速為1.0 ml/min，柱溫40℃，進樣量10μL，熒光檢測器，Ex，280nm，Em，418nm。恩諾沙星和環(huán)丙沙星線性范圍為0.05-10μg/ml。恩諾沙星在血淋巴、肌肉、肝胰臟、精巢和卵巢中回收率分別為96

3、.11％、94.25％、86.55％、96.16％和90.01％；相應(yīng)組織中的環(huán)丙沙星的回收率分別為97.21％、82.83％、82.04％、87.36％和91.52％。恩諾沙星和環(huán)丙沙星在血淋巴、肌肉、肝胰腺、精巢和卵巢內(nèi)日內(nèi)精密度RSD分別為3.63％和3.48％、3.00％和4.63％、2.38％和3.12％、3.39％和．5.86％、3.20％和3.57％。恩諾沙星和環(huán)丙沙星在血淋巴、肌肉、肝胰腺、精巢和卵巢內(nèi)的日間精密度RSD

4、分別為4.76％、和4.99％、3.15％和5.17％、2.89％和3.82％、3.56％和5.25％、3.46％和2.02％。 2、代謝產(chǎn)物質(zhì)譜分析。同時，采用電噴霧離子阱質(zhì)譜法在正離子檢測方式下，以注射泵直接進樣的方式對鋸緣青蟹口灌恩諾沙星給藥后血淋巴中恩諾沙星和代謝產(chǎn)物進行定性分析。通過對血漿中恩諾沙星及其代謝產(chǎn)物的質(zhì)譜裂解行為進行碰撞誘導(dǎo)解離分析，獲得了各化合物的多級質(zhì)譜信息，通過比較各化合物結(jié)構(gòu)和質(zhì)譜裂解途徑的異同點，

5、發(fā)現(xiàn)有三個代謝產(chǎn)物，其中峰面積最大的為環(huán)丙沙星，其次為羥基化恩諾沙星，另一代謝產(chǎn)物可能是加氧恩諾沙星。通過定量分析，血漿中恩諾沙星和代謝產(chǎn)物環(huán)丙沙星的濃度分別為19.1 μg/ml和0.526 μg/ml。 3、給藥途徑對藥動學(xué)影響。本文分析了鹽度為33的海水養(yǎng)殖下恩諾沙星藥液肌肉注射和口灌給藥(劑量10 mg/Kg)后在鋸緣青蟹體內(nèi)的藥代動力學(xué)。肌肉注射和口灌給藥下，藥物吸收快(Tmax分別為1 min和0.5 h)，藥物吸收

6、好(Cmax分別為31.86μg/ml和12.903 μg/ml)。鋸緣青蟹血淋巴恩諾沙星濃度-時間曲線關(guān)系均適合采用二室模型來描述，口灌組具有一級吸收相?？诠嘟M分布半衰期(t1/2a=3.364 h)高于肌肉注射給藥組(t1/2a=0.312 h)，而消除半衰期(t1/2β=34.644 h)低于肌肉注射給藥組(t1/2β=64.665 h)，總體清除率(CL=0.052l/h/kg)高于肌肉注射給藥組(CL=0.024 l/h/kg

7、)。兩組實驗的肌肉和肝胰臟藥動學(xué)參數(shù)采用統(tǒng)計矩原理求得。肌肉注射組，肌肉和肝胰臟恩諾沙星平均駐留時間分別為92.387 h和102.723 h，總體清除率分別為0.033 L/h/kg和0.007 L/h/kg，消除半衰期(t1/2z)分別為67.254 h和51.554 h?？诠嘟o藥組，肌肉和肝胰臟恩諾沙星平均駐留時間分別為36.364 h和464.223 h，總體清除率分別為0.029L/h/kg和0.016 L/h/kg，消除半衰

8、期(t1/2z)分別為65.504 h和47.735 h。肌肉注射組，恩諾沙星能被鋸緣青蟹很好地吸收和分布；相反地，肌肉注射組的恩諾沙星從鋸緣青蟹體內(nèi)的消除即變得緩慢。兩組試驗的血淋巴、肌肉和肝胰臟中代謝產(chǎn)物環(huán)丙沙星的濃度變化比較復(fù)雜，均呈現(xiàn)多峰現(xiàn)象。代謝產(chǎn)物環(huán)丙沙星在三個組織中達峰時間不一致。肌肉注射組分別為48 h、96 h和96 h，峰濃度分別為0.227 μg/ml、0.194μg/g和O．176μg/g；口灌給藥組分別為48

9、h、48 h和24 h，峰濃度分別為0.074 μg/ml、0.095 μg/g和0.178 μg/g。在鋸緣青蟹體內(nèi)，恩諾沙星轉(zhuǎn)化成環(huán)丙沙星的比率較低，各組織中Cmax-CIP/Cmax-ENR在0.57％-1.57％之間，AUCCIP/AUCENR在1.38％-8.7％之間。口灌給藥下，恩諾沙星在鋸緣青蟹組織中吸收好，但消除也慢；到25d時血淋巴、精巢和卵巢中檢測不到恩諾沙星，肌肉和肝胰臟中恩諾沙星濃度分別為0.018μg/g和O．

10、032μ/g。 4、鹽度的影響。在鹽度4和鹽度33下，對鋸緣青蟹進行恩諾沙星單劑量口灌給藥，給藥劑量為30mg/kg。兩鹽度下，恩諾沙星在蟹體內(nèi)血藥濃度-時間曲線適合用一級吸收的二室模型描述，血藥濃度與時間關(guān)系曲線及肌肉藥濃度和時間關(guān)系曲線均表現(xiàn)為雙峰現(xiàn)象，鹽度4組血淋巴和肌肉的第一峰濃度低于第二峰濃度，血淋巴中出現(xiàn)的時間分別為給藥后0.5h和2h，峰濃度分別為19.70μg/ml和30.53μg/ml；肌肉中兩個峰出現(xiàn)時間分別

11、為給藥后0.5h和2h，藥物濃度分別為13.16 μg/g和18.62 μg/g。而鹽度33組血淋巴和肌肉的第一峰濃度高于第二峰濃度，血淋巴中出現(xiàn)的時間分別為給藥后0.5h和4h，峰濃度分別為27.23 μg/ml和24.79μg/ml；肌肉中出現(xiàn)的時間分別為給藥后0.5h和6h，藥物濃度分別為16.04gμ/g和13.20μg/g。鹽度4時，Tmax=1 h，Cmax=253.57 μg/g；鹽度33時，Tmax=0.5h，Cmax=

12、349.95μg/g；兩鹽度下青蟹肝胰臟中恩諾沙星濃度均遠高于血淋巴和肌肉，肝胰臟擔(dān)當(dāng)著“藥庫”的作用。但肝胰臟中的藥物消除也很快，在達到峰濃度后幾小時內(nèi)即降為最高濃度的10％左右。鹽度33下青蟹組織中環(huán)丙沙星AUC和MRT均高于低鹽度相應(yīng)組織中相應(yīng)值；而高鹽度下青蟹組織中環(huán)丙沙星Vz和CLz均低于低鹽度下相應(yīng)組織中的相應(yīng)值。鹽度33下，肌肉、血淋巴和肝胰臟中代謝產(chǎn)物環(huán)丙沙星消除均明顯慢于鹽度4組。鹽度4和鹽度33下三種組織中的代謝產(chǎn)物

13、環(huán)丙沙星濃度遠低于原料藥恩諾沙星，血淋巴的AUCCIP/AUCENR分別為4.0％和3.8％。作者認為，與畜禽動物相比，在水產(chǎn)動物中起臨床療效主要是恩諾沙星，而不是環(huán)丙沙星。 5、劑量的影響。劑量明顯影響藥物的吸收、分布與消除。30 mg/kg劑量下，血淋巴中恩諾沙星峰濃度(Cmax=27.23 μg/ml)、分布半衰期(t1，2=14.3 h)、消除半衰期(h1/2β=123.3 h)和曲線下面積(AUC0.t=2672.1

14、mg/1.h)顯著大于低劑量實驗組(分別為12.90μg/ml、3.364 h、34.644 h和171.613 mg/1.h)。兩劑量組下，肝胰臟中恩諾沙星濃度差別很大，10 mg/kg和30 mg/kg兩個劑量下的鋸緣青蟹肝胰臟恩諾沙星峰濃度分別為22.30±1.95μg/kg和349.95±35.89μg/kg，高劑量下的肝胰臟恩諾沙星峰濃度是低劑量下峰濃度的近18倍。在30 mg/kg劑量下，肝胰臟恩諾沙星峰濃度分別是血藥峰濃度

15、、肌肉中恩諾沙星峰濃度的12.85倍、21.83倍；而在10 mg/kg劑量下，其相應(yīng)的比值分別是1.73倍、3.69倍。結(jié)果表明，高劑量口灌給藥下，大量藥物積聚在肝胰臟中，表現(xiàn)出肝胰臟“首過效應(yīng)”。 6、溫度的影響。溫度對恩諾沙星在鋸緣青蟹體內(nèi)吸收、分布和消除規(guī)律的影響。比較研究在19℃和26℃兩個溫度下，恩諾沙星口灌給藥下在鋸緣青蟹血淋巴中藥代動力學(xué)。在本研究中，采取從蟹步足關(guān)節(jié)腔處連續(xù)取血方法，對每只蟹連續(xù)取血11次，得到

16、每只蟹的個體水平上血藥濃度-時間變化關(guān)系曲線。即使在同一溫度下鋸緣青蟹血藥濃度也存在著個體間差異，但同一溫度下不同個體間血藥濃度的變化總體趨勢還是一致的。從平均血藥濃度-時間曲線來看，兩溫度組下的血藥濃度達峰時間差別較大，19℃和26℃分別為6 h和2 h，峰濃度分別為7.26 μg/ml和11.03μg/ml。兩溫度下，恩諾沙星在鋸緣青蟹體內(nèi)的平均血藥濃度-時間曲線比較適合采用具有一級吸收的二室模型來描述，19℃下吸收半衰期(t1/2

17、ka)和分布半衰期(t1/2a)分別為3.68 h和4.96 h，顯著大于26℃相應(yīng)值(分別為1.08 h和1.53 h)，但兩溫度下的消除半衰期(t 1/2β)分別為79.083 h和56.521h。結(jié)果顯示，26℃下恩諾沙星的吸收、分布和消除明顯快于19℃。 7、休藥期建議。10mg/kg劑量口灌給藥下，恩諾沙星在鋸緣青蟹組織中吸收好，但消除慢；至給藥后20d，肌肉、肝胰臟、精巢和卵巢中恩諾沙星濃度分別為0.032 μg/g

18、、0.038 μg/g、0.022μg/g和0.027μg/g，都低于0.05 μg/g。比照恩諾沙星的最高殘留限量規(guī)定，鋸緣青蟹口服恩諾沙星的休藥期應(yīng)在20 d以上。 8、用藥方案制定。Cmax/AUC比值在8-10之間通常認為是氟喹諾酮類藥物臨床藥效的臨界點。本研究中，多組實驗的血淋巴以及其它組織中的Cmax/AUC比值都在10以上，說明了恩諾沙星對防治鋸緣青蟹細菌性疾病的有效性。根據(jù)藥動學(xué)和藥效學(xué)結(jié)果，若恩諾沙星以10mg