斑石鯛虹彩病毒(SKIV)結構蛋白質組學及三個新型魚類細胞系的建立與部分特性.pdf

1、腫大細胞病毒是造成廣泛的淡水和海水養(yǎng)殖魚類暴發(fā)性傳染病的重要病毒性病原。國內最早于上世紀90年代初的養(yǎng)殖鱖暴發(fā)性流行病觀察到,并最終被確認為鱖暴發(fā)性流行病的病原。根據(jù)該病毒引起的發(fā)病鱖的臨床癥狀、病原及病理學特征定名為傳染性脾腎壞死病毒(ISKNV)。根據(jù)最新的國際病毒分類委員會第八次的分類報告(ICTV-8),ISKNV被定義為虹彩病毒科(family Iridoviridae)新成立的腫大細胞病毒屬(genus Megalocyti

2、virus)的代表種。種種未知因為,腫大細胞病毒難以在常見魚類細胞系上生長,我們此前建立了鱖仔魚細胞系MFF-1,成功解決了此類病毒的細胞培養(yǎng)問題。本研究中,(1)我們利用MFF-1細胞純化到大量海洋魚類來源的斑石鯛虹彩病毒(SKIV),對SKIV的結構蛋白做了系統(tǒng)的蛋白組學鑒定,結果顯示,SKIV的主要高豐度結構蛋白有16個,全病毒蛋白有51個獲得鑒定,其中包括4病毒囊膜蛋白。細胞水平上的抗體中和作用實驗顯示,4個重組囊膜蛋白均不具備

3、抗體中和能力,動物免疫保護試驗也顯示,以重組病毒蛋白為抗原免疫動物(鱖魚),盡管能夠誘導較高水平的特異性抗體的產生,但攻毒試驗顯示重組囊膜蛋白并非病毒的保護性抗原。(2)為了建立更多的敏感細胞系,為大規(guī)模疫苗生產尋找更多細胞資源,本研究從早期的鱖魚仔魚原代細胞成功培養(yǎng)出一個新的傳代細胞系MFF-2,MFF-2在細胞形態(tài)、細胞核型等方面與MFF-1細胞有較大的差別,但MFF-2同樣對ISKNV和SKIV高度敏感,可能作為疫苗生產中有用的細

4、胞候選。此外,本研究還建立了鱖腦組織原代細胞來源的克隆細胞系MB16C和錦鯉鰭條組織來源的細胞系KF-2,病毒感染試驗顯示,MB16C和KF-2對腫大細胞病毒皆不敏感或低敏感,但KF-2對錦鯉皰疹病毒(KHV)具有一定的敏感性,利用KF-2細胞我們成功自國內發(fā)病錦鯉分離了第一例錦鯉皰疹病毒KHV-QY08(C),基于KHV-ORF136基因和蛋白序列的多重序列分析顯示,KHV-QY08(C)與日本代表株TMSUT1(J)在進化距離上最為